携带SARS-CoV刺突蛋白N端片段重组腺病毒的构建

【目的】构建携带 SARS 冠状病毒刺突蛋白 N 端基因片段的重组腺病毒。【方法】从 SARS 病毒 cDNA 扩增刺突蛋白 N 端基因片段(-45～1469nt,截短的 S1区,S_N),插入腺病毒穿梭质粒 pShuttle,通过体外连接法构建重组腺病毒Ad-S_N。用 Ad-S_N 感染 Vero-E6细胞,通过 RT-PCR 和 Western blot 法检测 S_N 的表达。【结果】克隆的 S_N 基因序列与文献报道基本一致;Ad-S_N 基因组结构与预期一致。在 Ad-S_N 感染的 Vero-E6细胞中存在 S_N 基因的转录和分泌型 S_N 蛋白的表达。【结论】体外连接法是一种简便易行的重组腺病毒载体构建方法;重组腺病毒 Ad-S_N 能正确表达分泌型 S_N 蛋白,可用于诱导抗 SARS 免疫的动物实验研究。

刺突蛋白亚单位基因疫苗在大鼠体内诱导的体液免疫反应

目的利用重组腺病毒表达SARS病毒蛋白N端，研究其在动物体内诱导的体液免疫反应，探讨将其进一步开发为SARS病毒基因疫苗的可行性。方法用截短的刺突蛋白S1亚单位（SS）腺病毒载体疫苗（Ad—SS）皮下免疫大鼠[1×10^7pfu／（鼠·次），每周1次，连续3周]，用ELISA法测定血清中抗SARS—CoV IgG水平。结果Ad—SS在大鼠体内能诱导产生高滴度的抗SARS冠状病毒IgGs，IgGs在免疫开始2周出现，在最后一次免疫1～2周达到最高（最高滴度为1：2^8.5）。用Vero—E6细胞体外攻击保护试验检测免疫动物血清中SARS病毒中和抗体发现，Ad—SN免疫鼠血清能在体外保护Vero—E6细胞免受SARS病毒攻击，中和滴度达到1：2^6.9。结论Ad—SN能在大鼠体内诱导SARS病毒特异的保护性体液免疫，有望发展成为一种SARS基因疫苗。