基于响应面分析的高抗原活性猪链球菌2型疫苗培养基的研制与效果评价研究

试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。

基于多信息融合的疫苗培养基检测研究

针对疫苗培养基检测准确率较低的问题,首次提出利用机器视觉、红外温度和光照度的多传感器信息融合技术检测疫苗培养基。通过BP神经网络将3种传感器采集到的信息在特征层进行融合,在模型的建立过程中,对各个信息的主成分因子数进行了优化。从实验结果看,模型对预测集检测的识别率为97%,实验结果表明:通过多信息融合方法检测疫苗培养基是可行的,检测结果的准确性和稳定性相对于单个模型有明显提高。

基于响应面分析的高抗原活性猪水肿病大肠杆菌疫苗培养基的研制及效果评价

【背景】猪水肿病大肠杆菌引发的疾病造成了很大的危害,但现有培养基存在培养密度低的问题。【目的】研制出高抗原活性猪水肿病大肠杆菌疫苗培养基。【方法】以常用的市售猪水肿培养基为对照,通过单因素试验、爬坡试验(Plackett-Burman,PB)、响应面(Box-Behnken,BB)试验对猪水肿培养基进行响应面优化,得到猪水肿培养基最优配方。以响应面试验得到的培养基培养猪水肿病大肠杆菌,评价不同培养时间点菌株的抗原活性,制作灭活疫苗,进行动物免疫保护试验。【结果】对研制的培养基进行扩大培养验证,发现扩大培养得到的菌株活菌数可达5×10^(9) CFU/mL以上,约为对照组的2倍。制备的灭活疫苗效价可达1:140000,并在9 h时抗原蛋白效价达到最高。【结论】本研究研制出的疫苗培养基显著提高了猪大肠杆菌菌体密度,并可提高菌体抗原活性,为猪水肿病灭活疫苗的制备提供了技术指引。

基于响应面分析的高抗原活性鸭疫里默氏杆菌疫苗培养基的研制及其效果评价

【背景】鸭疫里默氏杆菌广泛存在于养殖场,引起雏鸭发生传染性浆膜炎,严重危害养鸭业的发展。【目的】提高鸭疫里默氏杆菌发酵培养水平和抗原活性,为鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗的研制提供技术指引。【方法】利用单因素及响应面的试验设计方法,针对鸭疫里默氏杆菌进行疫苗培养基的研制,并探究不同发酵时间点该菌的抗原活性,选择抗原活性最高点时制备灭活疫苗,通过动物免疫保护试验评价疫苗免疫效果。【结果】使用研制的疫苗培养基发酵培养鸭疫里默氏杆菌,其活菌数能够达到4.68×10^(10) CFU/mL,较市面上该菌专用的培养基提高2.29倍。该菌发酵12 h后抗原活性达到最高,在此时制备的灭活疫苗诱导小鼠产生的抗体水平显著高于商品化灭活疫苗,攻毒保护率达到了100%。【结论】本研究研制的培养基具有优异的增菌效果,可作为生产鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗抗原的发酵培养基,疫苗生产过程中可选择菌株抗原活性达到最高时收集菌体。

基于响应面法的高抗原活性禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基的研制与效果评价

【背景】禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引发的禽霍乱疫情造成了巨大的危害,而现有培养基存在培养菌密度较低的问题。【目的】研制高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基。【方法】通过单因素试验、Plackett-Burman试验和响应面分析方法对禽多杀性巴氏杆菌培养基的成分进行调整,并对不同发酵阶段的菌体进行免疫原性测定。最后使用该培养基培养细菌后制备疫苗并通过动物攻毒试验评价其保护效果。【结果】使用研制的培养基培养禽多杀性巴氏杆菌,活菌密度能够在6 h达到约1.84×1010 CFU/mL,增菌效果是对照培养基的2.6倍;免疫原性测定结果显示在生长平台期菌体的抗原活性最高;攻毒试验表明制备的疫苗能够很好地抵抗禽多杀性巴氏杆菌的侵袭。【结论】研制出了高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基,为疫苗的生产奠定了基础。

回忆“文革”期间研究狂犬组织培养疫苗的一段历史

本文叙述1966-1973年文革期间开发原代地鼠肾组织培养狂犬疫苗的一段历史。著者通过重重艰难险阻，把原拟定的活毒疫苗课题方向改变为灭活疫苗方向，终于制备出aG毒种，加入佐剂，形成目前使用的疫苗雏形，眼看疫苗即将成功，此时由于突然的上级命令，著者转变做别的工作，离开此项目。此过程跌宕起伏，30年来尘封箱底不为人知。为还历史本来面目，披露如下。

狂犬病细胞培养疫苗近况与重组活载体疫苗研究进展述评

利用细胞培养技术生产狂犬病疫苗,利用重组DNA技术发展狂犬病重组活载体疫苗,是近十年来狂犬病疫苗研究领域的两大突破性进展,前者已广为应用,后者已有制品。文章概述了狂犬病细胞培养疫苗生产使用方面的研究近况,并着重从以复制性的痘病毒和腺病毒及非复制性的家禽痘病毒与野鸟痘病毒作载体构建的重组狂犬病毒糖蛋白或核蛋白疫苗方面,对狂犬病重组活载体疫苗及其免疫研究进展作了述评,对病毒载体疫苗研究作了展望。

“组织培养人用狂犬病佐剂疫苗”引起过敏反应一例

患儿男，6岁，因注射狂犬疫苗后全身瘙痒，皮痒，呼吸困难3h，于1988年3月19日21h入院。发病前1个月曾被家猫抓伤手部。入院3h前在某卫生所臀部肌肉注射“组织培养人用狂犬病佐剂疫苗”(疫苗批号：871163，效期，1988年5月，卫生部武汉生物制品研究所制）2ml，

H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立及高产细胞型疫苗株的拯救

【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株的猪流感病毒rH1N1,并且成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株re-LM株,研究结果表明二者均具有良好的遗传稳定性。rH1N1经MDCK细胞连续传代培养后,血凝价最高仅为1:64;而re-LM的血凝价最高可以稳定在1:1024,表明该毒株具有细胞繁殖高产的特性。用该重组病毒制备油乳剂灭活苗免疫2月龄仔猪,首免2周即可检测出HI抗体,平均效价在1:32以上,三免后2周HI抗体平均效价达到1:512,说明其有良好的免疫原性。【结论】H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为猪流感病毒致病机理、传播机制及病毒基因功能的研究奠定了基础;重组细胞高产型猪流感病毒株的拯救为H1N1亚型猪流感疫苗的研制开辟了新的途径。

狂犬病疫苗的研究动向

狂犬病疫苗的研究动向张德礼（北京军区后勤部军马防治检验所）近１０年来，现代生产技术的广泛应用在狂犬病疫苗研究领域取得了三项重要进展：（１）应用细胞培养技术制备优质狂犬病病毒疫苗；（２）应用生物工程技术研制野生动物狂大病病毒口服疫苗（狂犬病病毒糖蛋白—...

免疫遗传算法在结构损伤识别中的应用与改进

为了解决结构的多损伤识别问题,提出了基于免疫遗传算法和贝叶斯融合理论的二阶段识别方法。首先将结构的应变能和频率数据作为两种具有互补性质的信息源,通过采用贝叶斯融合理论来初步确定结构的损伤位置,然后通过免疫遗传算法来精确确定结构的损伤位置和程度。考虑到基本免疫遗传算法的搜索效率仍不太高,故提出了疫苗培养、以及双终止条件等改进策略。数值计算结果表明,论文提出的二阶段方法可以有效的识别出结构的损伤位置和程度,而所建议的改进免疫遗传算法明显优于基本免疫遗传算法和简单遗传算法。

重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8/34毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h后,血凝价可以达到1∶512,表明该毒株具有高度适应细胞繁殖特性,为H3N2亚型猪流感病毒细胞培养型疫苗的研制奠定了基础。

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗的最小免疫量、免疫期和保存期

草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗对草鱼的最小免疫量为稀释10∧3倍，0.2毫升/尾，免疫产生期为疫苗注射后的第2天；免疫保护期达15个月。弱毒疫苗的保存期为-30℃30个月、-10℃24个月，4℃8个月，15-20℃1个月左右。

美国当前的疫苗生产能力可应对流感大流行

美国密歇根大学Lash等的一项研究显示，如果在今后5年内美国发生流感大流行，则利用现有设施生产细胞培养疫苗是控制疫情的唯一办法。 现行流感疫苗用鸡胚培养法制备。此法比细胞培养法费时费力。美国用鸡胚培养法需6个月才能生产出2．5亿～3亿剂流感疫苗，而且细胞培养法，4个月就能生产6亿剂疫苗。