PELA疫苗微球载体的正交优化工艺研究

目的 利用正交设计的数学方法进行实验设计 ,以牛白蛋白为包裹模型 ,寻求制备不同疫苗微球载体的最佳条件。方法 采用W /O/W法制备PELA微球 ,考察不同因素对疫苗微球平均粒径、成球率与蛋白包裹率 (三指标 )的影响。结果 五因素对疫苗微球成球性影响的主次顺序为PVA浓度 >搅拌速度 >PELA浓度 >油外 /外水相体积比 >内水相体积 ;而对粒径与蛋白包裹率的顺序则为PELA浓度 >PVA浓度 >搅拌速度 >油相 /外水相体积比 >内水相体积和PELA浓度 >PVA浓度 >搅拌速度 >内水相体积 >油相 /外水相体积比。结论 控制工艺条件 。

创伤弧菌微球口服疫苗的制备及其免疫效果研究

为了研究创伤弧菌灭活疫苗的免疫效果,本研究将实验室保存的创伤弧菌菌株EPL0201经0.3%甲醛灭活,采用海藻酸钠包裹灭活菌液制备了创伤弧菌微球疫苗,通过口服途径免疫健康的珍珠龙胆石斑鱼(Pearl gentian grouper),在免疫后第28天用1×107cfu/mL创伤弧菌腹腔注射珍珠龙胆石斑鱼,检测了免疫后珍珠龙胆石斑鱼部分免疫相关基因的表达趋势和攻毒后的免疫保护率。创伤弧菌微球口服疫苗的粒径为(34.55±5.33)μm,包覆率为90.5%。测其安全性良好。实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)结果显示,与对照组相比,各免疫基因先后出现不同的表达变化。TLR信号通路上的基因TLR1、TLR2、TLR3、TLR5和M y D88及炎性细胞因子IL-1β、IL-12p40和TNF-α在肾脏、脾脏、肝脏和肠组织中都参与免疫应答。TGF-β只在脾脏中有表达。免疫基因在各个组织中的表达变化不同,其中,表达量最高的是IL-1β在脾脏中,最高值为对照组的72.37倍。同一种免疫基因在鱼体不同器官和组织中的峰值表达量时间不同,同一组织中不同免疫基因的峰值表达量也不相同,说明各组织中的基因表达变化有差异性。攻毒试验结果显示,免疫保护率为61.3%。本研究结果显示创伤弧菌微球口服疫苗能够引起免疫基因参与免疫应答反应,对珍珠龙胆石斑鱼具有免疫保护作用,也为微球口服疫苗防治创伤弧菌引起的疾病提供试验数据支持。

鸡新城疫壳聚糖微球疫苗的制备及免疫效果研究

【目的】新城疫是禽类的一种急性、高度接触性传染病,是危害养禽业的首要疫病。疫苗免疫是控制该病的首选方法,但目前常用的弱毒活疫苗和灭活疫苗具有各自的缺点,在实际应用中具有一定的局限性。故本研究拟制备新城疫壳聚糖微球疫苗,以弥补弱毒活疫苗和灭活疫苗的不足。【方法】利用壳聚糖为囊材,新城疫病毒液为芯材,戊二醛为交联剂,选择适当的乳化体系,制备出粒径小、分散性好的新城疫微球疫苗。将新城疫壳聚糖微球疫苗与LaSota活疫苗和新城疫灭活疫苗分别免疫SPF鸡,利用MTT试验和血清IgGHI试验,分别检测不同疫苗免疫后的细胞免疫和体液免疫水平,并在血清抗体水平为3log2时进行攻毒试验。【结果】制备的新城疫壳聚糖微球疫苗平均粒径为5.83μm,均匀度较好,免疫试验鸡后可刺激机体产生较强的细胞免疫和体液免疫,与另外两组数据比较均有显著差异;且微球疫苗免疫组对强毒株的攻毒产生了较好的保护。【结论】新城疫壳聚糖微球兼有弱毒活疫苗和灭活疫苗的优点,具有较好的免疫保护效果,是一种具有广阔应用前景的新型疫苗。

新城疫壳聚糖微球疫苗免疫效果的研究

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的鸡的一种急性、烈性、高度接触性传染病,是危害养禽业的最严重疫病之一。控制新城疫最根本的措施是进行有效的疫苗接种,目前常用的疫苗是弱毒活疫苗和灭活疫苗,但二者在实际应用中均存在一定的局限性。口服微球疫苗可以诱导较强的粘膜免疫;同时还能够诱导产生系统的体液免疫和细胞免疫,已成为ND疫苗研究的热点。以壳聚糖为囊材,新城疫La Sota抗原液为芯材,戊二醛为交联剂,制备出新城疫壳聚糖微球疫苗,通过了实验室安全检验和效力检验。将新城疫壳聚糖微球疫苗与LaSota活疫苗和新城疫油乳剂灭活苗分别免疫SPF鸡,利用MTT、血凝抑制法(HI)和ELISA等分别检测不同疫苗免疫后的细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫抗体IgA,并在当免疫鸡HI抗体降到23的情况下进行了攻毒试验。结果表明,新城疫壳聚糖微球疫苗安全性好,免疫后可刺激机体产生较强的细胞免疫、体液免疫和局粘膜免疫,具有较好的保护作用。

缓释伤寒荚膜多糖微球疫苗免疫动物的实验研究

用 PEL A为材料包裹伤寒沙门菌荚膜多糖 ,制成缓释微球疫苗 ,分别以口服及皮下注射的方式免疫BAL B/ C小鼠 ,分别在第 2 ,4 ,8周取血 ,收集唾液 ,用 RIA方法检测血清中 Ig G抗体及唾液中 s Ig A抗体效价。第 8周腹腔注射伤寒沙门菌活菌攻击各组免疫动物 ,计算免疫动物保护率。单剂微球疫苗皮下注射比常规液体疫苗更有效地诱导全身免疫应答 (P<0 .0 5 ) ,而口服微球疫苗组和微球疫苗皮下注射组均可诱导较强粘膜免疫 (P<0 .0 5 )。动物保护力实验表明 ,口服微球疫苗组免疫保护率 4 0 % ,微球疫苗皮下注射组免疫保护率为 10 0 % ,常规液体疫苗免疫保护率为 6 0 %。缓释伤寒荚膜多糖微球疫苗具有在体内释放速度慢 。

聚乙二醇改性聚乳酸幽门螺杆菌微球疫苗的制备与体外控释

目的 应用聚乳酸与聚乙二醇共聚物（ＰＥＬＡ）包裹Ｈｐ超声上清液，制备 Ｈｐ口服微球疫苗，探讨共 聚物ＰＥＬＡ总相对分子质量ｒ、ＰＥＧ含量与不同相对分子质量ＰＥＬＡ共聚物的相对分子质量分布（Ｍｒ／Ｍｎ）对微球疫 苗体外释药特性的影响。方法 采用复乳法溶剂挥发技术，制备Ｈｐ微球疫苗，用电子显微镜与扫描电镜观测微球 疫苗的粒径，用紫外光谱分光光度法测定抗原包裹效率与Ｈｐ抗原释放量，并在ｐＨ７．３、浓度为 ０．０１ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢＳ溶 液中作体外控释实验。结果 Ｈｐ微球疫苗抗原包裹效率在７５％左右，平均粒径在５１μｍ以下。若ＰＥＧ量低于 １０％，ＰＥＬＡ组成对微球疫苗的粒径和抗原包裹效率影响不大。结论 Ｈｐ抗原体外释放量与 ＰＥＬＡ中ＰＥＧ的量和 相对分子质量、ＰＥＬＡ的相对分子质量分布成正比，而与ＰＥＬＡ的总相对分子质量成反比。

HBV壳聚糖微球疫苗鼻腔免疫的初步研究

目的 研究HBV表面抗原亚单位微球疫苗及DNA微球疫苗鼻腔免疫的效果 ,为新型鼻腔疫苗的研制提供实验基础。方法 选取HBV表面抗原亚单位疫苗及HBVDNA疫苗作为模型 ,以壳聚糖作为载体 ,通过沉淀 凝聚法制备壳聚糖微球疫苗 ,分别通过鼻腔、腹腔及肌肉免疫小鼠 ,在不同时间点收集小鼠血清 ,用ELISA检测血清中抗HBVIgG ,分析不同免疫途径的免疫效果。结果 在HBV亚单位微球疫苗免疫组中 ,腹腔与鼻腔免疫效果差异无显著意义 ;而在HBVDNA疫苗免疫组中 ,肌肉免疫后 12周IgG达到峰值 ,随后开始出现下降趋势 ;而微球疫苗则在 16周才达峰值 ,且鼻腔免疫组要高于肌肉免疫组。结论 鼻腔免疫可作为亚单位疫苗及DNA疫苗的免疫途径 ,且相对于DNA疫苗而言 ,壳聚糖微球具有保护作用及缓释作用。

口服霍乱微球疫苗的制备及其靶向分布

采用可生物降解的合成高分子聚ＤＬ－乳酸－聚乙二醇共聚物、包封霍乱弧菌古典生物型、Ｉｎａｂａ５６９Ｂ株的外膜蛋白后，制备成口服高分子霍乱微球疫苗。微球粒径＜５μｍ，微球中外膜蛋白有效包封率为１５．３％。动物口服微球后，微球主要分布在体内肝。

响应面法优化爱德华菌口服微球疫苗制备工艺及其特性分析

为优化渔用口服微球疫苗制备工艺,实验以海藻酸钠及爱德华菌灭活疫苗为原材料,采用乳化离子交联法制备爱德华菌口服微球疫苗。通过单因素实验研究海藻酸钠浓度、水油相比例、乳化剂浓度以及乳化时间对微球疫苗包封效率的影响,根据Box-Behnken中心组合实验设计,采用4因素3水平响应面法优化爱德华菌海藻酸钠微球疫苗的制备工艺。结果表明最佳制备工艺条件为海藻酸钠浓度3.5%,水油相比例2.4∶7.6,乳化剂浓度5.4%,乳化时间13 min。研究表明,在最佳工艺条件下制备的爱德华菌口服微球疫苗成球性好,粒径分布均匀,粒径(8.88±1.26)μm,跨距0.38,包封效率96.37%,具有较好抗酸性、肠溶性以及高安全性的特点。

幽门螺杆菌微球疫苗非临床实验初步研究

目的:通过考察幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)微球生物学行为,探讨其作为口服蛋白疫苗的可行性。方法:用可降解天然高分子材料-壳聚糖和海藻酸钠制备Hp全菌蛋白微球(HpWCP-CAMS),通过BCA方法测定微球中蛋白质的包裹效率及包裹量,测定微球在体外的药物释放度。并进行小鼠体内微球的靶向试验,微球的体内外毒性试验和淋巴细胞致敏试验。结果:HpWCP-CAMS中蛋白包裹量为31.5%,蛋白包裹效率为61.0%。微球中药物缓释周期可长达20 d,靶向试验结果显示微球能在肠黏膜、PP结及脾脏富集并能有效诱导淋巴细胞致敏。体外毒性显示125μL微球(5 mg.mL-1)对Hela细胞生长无明显影响,体内实验结果显示其对小鼠生长也没有影响。结论:HpWCP-CAMS具有良好的靶向性和缓释特征,无细胞毒性,有望作为疫苗进一步研究。

中华鳖温和气单胞菌口服缓释微球疫苗的研究:疫苗用菌液培养条件的优化

以中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As)口服缓释微球疫苗生产菌株 Z- 1株培养菌液含菌量和胞外产物溶血性为指标 ,考察了培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等因素对 As Z- 1株繁殖和产毒的影响 ,并采用正交试验方法 ,对培养基配方进行了优化试验。结果表明 :不同的培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等均会影响As Z- 1株的菌体产量和溶血性 ,其中 2 8℃振荡 (2 0 0 r/ min)培养 36 h菌液的含菌量和溶血价均较高 ;在营养肉汤中添加适量的硫酸铜、磷酸二氢钾、硫酸锰和硫酸铵 ,可显著提高菌液的含菌量和溶血价。

中华鳖嗜水气单胞菌微球缓释疫苗的研制及免疫效果

为通过免疫防治途径控制嗜水气单胞菌引起的多种中华鳖疾病,采用复乳化-溶剂挥发法制备缓释微球疫苗,通过灌胃方式免疫中华鳖（体质量150～200 g）,每只灌胃0.05 g或0.1g,微球含灭活菌约为6.75×1010/g.免疫应答反应结果显示,缓释微球疫苗体外释放可持续近40 d,血清抗体效价、白细胞吞噬率、白细胞吞噬指数及淋巴细胞转化率最高分别可达512,71.25％,1.51和77.25％.结果表明：中华鳖嗜水气单胞菌微球缓释疫苗可以达到注射灭活菌液疫苗的水平,且持续性略优于注射免疫.通过灌胃方式（0.1 g/只）、注射方式分别对中华鳖进行免疫,研究攻毒后的免疫保护率,结果显示注射免疫组和微球疫苗免疫组的免疫保护率均为85％.免疫应答实验和攻毒实验结果分别证明了中华鳖口服缓释微球疫苗免疫的持续性和有效性.

中华鳖温和气单胞菌口服缓释微球疫苗的研究:疫苗生产菌株灭活方法的优化

以灭活后中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As)残存数、胞外产物溶血性及菌体抗原性为指标 ,考察不同的甲醛浓度、不同温度、不同灭活时间对中华鳖 As Z- 1株灭活的影响。结果表明 :As Z- 1株菌体和胞外产物的灭活时间与所采用的温度和甲醛浓度成反比 ;在相同的甲醛浓度和灭活温度下 ,菌体和胞外产物所需的灭活时间有很大差异 ;在使菌体灭活的各种灭活方法中 ,以 2 8℃、0 .2 %甲醛作用 2 d的菌体抗原性为最佳。

基于rV270抗原的鼠疫多孔微球疫苗的制备及其免疫保护作用评价

目的:评价生物可降解高分子材料多孔微球作为鼠疫亚单位疫苗佐剂的可行性。方法:制备可生物降解的高分子材料多孔微球,将rV270抗原蛋白吸附到多孔微球中制备微球疫苗,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,初次免疫后21d加强免疫1次,于初次免疫后第10周用600LD50鼠疫耶尔森氏菌攻毒,攻毒后观察14d。结果:攻毒后,微球疫苗免疫的小鼠全部存活,且健康状况良好,对照组小鼠几乎全部死亡。结论:生物可降解多孔微球可作为免疫佐剂用于鼠疫亚单位疫苗研制。

生物降解微球疫苗的研究进展

可生物降解的高分子化合物具有良好的生物相容性,用其制备的微球疫苗是目前疫苗控制释放佐剂的研究热点之一。本文综述了可生物降解的主要材料、微球疫苗的几种制备方法及研制疫苗的概况。

可生物降解微球作为口服疫苗载体的研究进展

本文主要介绍可生物降解微球作为口服疫苗载体的优越性 ,以及微球疫苗的制备工艺、体外释放动力学、口服后的体内分布、免疫机理、口服质粒

幽门螺杆菌微球疫苗免疫诱导的免疫应答

目的通过对幽门螺杆菌微球免疫后Balbc小鼠血清IgG、IgA、胃肠sIgA的检测及脾脏IL4、IFNγ的mRNA表达水平、IgGASC、IgAASC数量的比较观察,探求疫苗的免疫保护机理。方法取Balbc小鼠口服免疫疫苗,剂量为150μg/(只·次),免疫时间为0、14、30d。2周后取血清及胃肠洗液进行抗体检测,同时取脾脏检测细胞因子mRNA表达水平及ELISPOT检测抗体分泌细胞数量变化。结果免疫后小鼠以上检测指标与对照组比较均有不同程度的升高。结论微球疫苗所诱发的免疫保护是细胞免疫、体液免疫两者共同作用的结果。

空肠弯曲菌重组蛋白微球疫苗制备及其免疫原性的分析

目的为增强多肽蛋白类药物的免疫效果,制备空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1与大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合表达的重组PEB1-LTB蛋白聚丙烯酸树脂微球,分析免疫Balb/c小鼠体内体液免疫应答及细胞免疫应答水平。方法乳剂—溶剂挥发法制备微球,测量微球粒径、包封率和体外释放度。雌性Balb/c小鼠随机分为4组,于第0、14、30天各免疫1次,末次免疫14 d后,检测各组血清特异性IgG、IgA、黏膜冲洗液sIgA水平及脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-4含量。结果制备得到平均粒径在(47.6±10.2)μm的聚丙烯酸树脂微球,包封率为79.87%。微球可耐受胃酸的破坏,在模拟肠液中的释放度4 h后达95.27%。免疫后特异性IgG、IgA、sIgA及IFN-γ、IL-4均明显高于对照组(P<0.05)。结论本研究制备的重组PEB1-LTB蛋白聚丙烯酸树脂微球通过口服免疫Balb/c小鼠可以有效的提高其免疫应答。