幽门螺杆菌5种候选疫苗抗原基因的克隆、表达及抗原性的鉴定

目的:构建含人Hpylori5种候选疫苗抗原Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB的编码基因的重组质粒并研究其抗原性.方法:应用PCR技术从Hpylori染色体中扩增编码Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB的基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布的其他Hpylori菌株基因序列比较,再将目的基因克隆至融合表达载体pGEX-4T-1上中进行表达,用GST亲和层析对其进行纯化,纯化产物用于对29株小鼠抗Hpylori-全菌单克隆抗体(mAb)的鉴定及与Hpylori感染患者血清进行Westernblot分析.结果:扩增的Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB基因全长分别为528bp,351bp,675bp,855bp,1704bp(GenBank登录号分别为DQ106902,DQ141574,DQ141577,DQ141575,DQ141576),与GenBank公布的其他菌株的核酸序列的同源性在95%-99%,表达Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB融合蛋白的相对分子质量分别约为48000,41000,52000,60000,91000Da,29株小鼠抗Hpylori全菌mAb中针对Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB抗原的分别为4,5,5,1,6株,5种抗原的纯化产物均可被Hpylori感染患者血清特异性识别.结论:重组表达的Lpp20,HspA,UreaseA,CagA,UreaseB均具有较好的抗原性.

口蹄疫疫苗抗原含量检测方法

口蹄疫（Foot-and-Mouth disease virus,FMDV）是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性的动物疫病,对畜牧业有着巨大的危害。目前大多数国家采取计划免疫为主的措施预防和控制口蹄疫,口蹄疫疫苗的质量是保证控制措施实施的重点,而抗原含量直接决定口蹄疫疫苗的质量和免疫效力。

疟疾疫苗抗原研究进展

疟疾疫苗抗原研究进展人体寄生虫学教研室王星，徐大为关键词疟疾，疫苗抗原，抗原结构，基因结构疟疾目前仍是严重威胁热带地区和第三世界国家的寄生虫病，近年来因疟原虫抗药性和蚊媒耐药物的产生与蔓延，促使科学家们重新考虑研制安全有效的疫苗来控制乃至彻底消灭疟疾...

猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗抗原病毒含量测定对比试验

在猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗抗原病毒含量测定对比试验中发现:用方瓶传代与用转瓶传代的Marc-145细胞所测的病毒含量差别很小,用营养液加8%蓝耳病专用血清所测的病毒含量比加8%普通血清的高,用营养液加8%普通血清所测的病毒含量比不加血清的高,分别用冻融2～5次的猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗抗原在同样条件下测定其病毒含量,结果差别很小。

个体化肿瘤新生抗原肽疫苗中残留有机溶剂的顶空GC法测定

目的建立个体化肿瘤新生抗原肽疫苗组中8种有机溶剂残留量的测定方法。方法采用顶空气相色谱(顶空GC)法,FID检测器,检测器温度250℃;色谱柱为Agilent DB-1毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm,3μm),程序升温:起始柱温70℃(保持11 min),以50℃/min升温至130℃(保持9 min),再以50℃/min升温至200℃(保持2 m in);载气为氮气,柱流速1.0 mL·min^(-1);进样口温度200℃。有机溶剂检测项目为甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈、乙醚、三乙胺、哌啶和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。结果8种溶剂的专属性、定量限与检测限、线性与范围、准确度、精密度均达到了ICH指导原则中对残留溶剂测定的验证要求。结论建立的方法能有效控制个体化肿瘤新生抗原肽疫苗组中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈、乙醚、三乙胺、哌啶和DMF的残留量。

通用型H5亚型禽流感病毒亚单位疫苗抗原表达和免疫效力研究

H5亚型高致病性禽流感病毒因其变异快、感染性和致病性强等特点严重威胁着家禽业和人类健康。为研制具有广谱保护性的H5亚型禽流感病毒通用型亚单位疫苗,本研究分析和对比各分支H5亚型禽流感病毒的HA蛋白基因,获得HA蛋白基因共有序列,采用杆状病毒表达系统构建和表达重组HA蛋白。经IFA、Western Blot、微量血凝试验等方法鉴定重组HA蛋白,结果显示重组HA蛋白在昆虫细胞中得到正确表达,血凝效价达13log2,且与禽流感Re6、Re7和Re8阳性血清均具有较好的交叉反应活性。免疫效力试验结果显示,重组HA蛋白疫苗组血清抗体能与H5亚型禽流感病毒Re6、Re7和Re8检测抗原反应,且能诱导机体产生较高水平IFN-γ和IL-4。该研究结果可为H5亚型禽流感通用型亚单位疫苗研发提供试验基础和科学依据。

金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用研究

为研究金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用,分别用纯化蛋白StbA、SirH以及甲醛灭活的金黄色葡萄球菌为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定血清效价,然后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价两种抗原的免疫保护作用。分别用SirH和StbA抗血清免疫小鼠,4 h后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价抗血清的保护作用。结果显示,StbA和SirH抗血清效价均为1：1 638 400。金黄色葡萄球菌攻击主动免疫小鼠,SirH纯化蛋白免疫组（60%）和StbA纯化蛋白免疫组（70%）存活率均明显高于对照组（0%）（P〈0.05）,金黄色葡萄球菌全菌免疫组（20%）存活率与对照组（0%）差异不具备显著统计学意义（P〉0.05）。SirH纯化蛋白免疫组（60%）和StbA纯化蛋白免疫组（70%）存活率均高于金黄色葡萄球菌全菌免疫组（20%）。将抗血清免疫小鼠后,用金黄色葡萄球菌腹腔内注射攻击小鼠,免疫组小鼠16-18 h内全部死亡,而对照组小鼠在攻毒后12-14 h内全部死亡。结果表明,SirH和StbA是具有潜力的保护性抗原,但其抗血清都不具有保护作用。

口蹄疫疫苗抗原加川芎嗪对体外培养大鼠心肌膜微血管内皮细胞分泌ET-1和NO的影响

为了弥补口蹄疫疫苗的免疫缺陷,为寻找新型低毒的口蹄疫疫苗中药佐剂提供试验依据,试验将体外培养的大鼠心肌膜微血管内皮细胞(MVECs)分为空白对照组(加入正常培养液)、口蹄疫疫苗组(加入混有口蹄疫疫苗稀释液的培养液)、口蹄疫疫苗+川芎嗪组(加入混有口蹄疫疫苗稀释液与川芎嗪溶液的培养液),分别测定口蹄疫疫苗与口蹄疫疫苗+川芎嗪对心肌膜MVECs分泌一氧化氮(NO)和血管内皮素1(ET-1)的影响。结果表明:口蹄疫疫苗组心肌膜MVECs分泌NO和ET-1的量较空白对照组极显著升高(P<0.01),但不是同比例升高,导致ET-1/NO的值偏离空白对照组接近2倍;而口蹄疫疫苗+川芎嗪组心肌膜MVECs分泌ET-1和NO的量较口蹄疫疫苗组显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),较空白对照组仍明显升高,但ET-1/NO的值比口蹄疫疫苗组降低,较接近空白对照组。说明中药川芎嗪保护了被口蹄疫疫苗损伤的心肌膜MVECs。

肿瘤新抗原疫苗研究进展

免疫疗法作为一种变革性的肿瘤治疗手段,使肿瘤免疫学重新焕发活力。肿瘤免疫治疗有多种途径,包括免疫检查点抑制剂、细胞治疗及肿瘤新抗原疫苗等。肿瘤新抗原疫苗是根据患者的基因突变信息设计开发的个性化治疗疫苗,能够特异性清除肿瘤细胞且具有较小的不良反应,在临床上有广阔的应用前景。本文围绕肿瘤新抗原疫苗的概念、开发流程及其临床应用等方面的研究进展进行阐述,并通过关注具有里程碑意义的研究总结新抗原疫苗的优势及当前和未来的挑战。

基因组学、蛋白质组学、抗原组学与疫苗的发展

疫苗免疫是机体抵御微生物和寄生虫感染的有效措施,然而还有许多病原体缺乏有效的疫苗,疫苗研究任重而道远.随着许多病原体基因组测序的完成,利用基因组学筛选疫苗抗原显示了强大的优势.同时由于近年来比较基因组学、蛋白质组学、抗原组学等的发展,病原体毒力相关蛋白、分泌性蛋白和膜表面结合蛋白基因可以被分离出来,从而可以更加准确地分析候选抗原,极大地提高了疫苗抗原分析的效率.总之,利用基因组和蛋白质组进行疫苗抗原筛选是疫苗研究的革命,将极大地推动疫苗的研究和开发.

提高病毒疫苗抗原产量的策略

疫苗接种是预防传染病的一种重要策略。然而,目前许多疫苗在生产过程中存在抗原产量偏低的问题,由此导致疫苗的生产成本较高、有效抗原含量低和免疫效果差等问题。为此,研究人员尝试了不同策略来提高病毒疫苗抗原的产量,以改进疫苗的质量并降低生产成本。文中总结了近年来提高疫苗中病毒抗原产量的主要方法,包括改造病毒基因、改善病毒对细胞的适应性、优化抗原表达体系、改进疫苗生产工艺等方面。并分析了不同策略的优点和存在的问题,提出了提高疫苗抗原产量的一些设想。

我国云南分离株间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原pvs25基因多态性分析

目的阐明我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原pvs25基因多态性特点。方法收集全年流行区云南省血样31份;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增pvs25基因;Sanger双脱氧链终止法测序;DnaSPversion4.0软件统计学分析。结果成功扩增pvs25全长基因31个序列。与标准株SalI比较,检测出4个错义突变位点,5种基因型,4处氨基酸置换。C103G289C389C391为主导基因型,L35E97T130Q131是相应主导氨基酸型,其突变与季节流行区的主导基因型和氨基酸型完全一致。核苷酸多态性π值为0.0014。组间多态性π值比较表明全年流行区明显高于季节流行区。结论我国分离株间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs25只有1种主导基因型和1种主导氨基酸型。有限的基因突变再次提示Pvs25是理想的候选抗原,以Pvs25为基础构建的传播阻断疫苗在我国具有广泛应用的可行性。

乙型肝炎病毒HBsAg重组疫苗与表面抗原DNA疫苗诱导H-2~b小鼠免疫应答的实验研究

目的:观察重组乙肝疫苗及乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原DNA疫苗接种后,C57BL/6(H-2b)小鼠的免疫应答.方法:构建质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S.转染COS7细胞系进行表达.将C57BL/6小鼠分为5组,分别接种质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S,pVR1012100μg及重组乙肝疫苗1μg.ELISA法检测小鼠血清抗-HBs.结果:DNA疫苗在转染细胞中可表达HBsAg.血清抗-HBs在第一次接种重组乙肝疫苗后即可检出,而在DNA疫苗组则未检出.此后重组疫苗组诱导的抗-HBs的滴度与DNA疫苗组相似.结论:HBV表面抗原DNA疫苗在H-2b小鼠试验中有体液免疫原性.

肝癌靶向性超抗原基因疫苗的设计和预测

目的 :探讨AFP顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原疫苗 (SEA(D2 2 7A) Linker CD80tm)设计的合理性。方法 :应用核酸和蛋白质分析软件GeneConstructionKit2 .0、ANTHERPRO5 .0、JAMBW1 1和www .expasy .com网站提供的方案 ,分析重组体的开放读框以及融合蛋白的可及性、柔性、抗原性和疏水性 ,并作了跨膜区和二级结构模拟。结果 :重组体的转录受AFP顺式作用元件调控 ,Linker所在部位柔性高 ,可及性弱 ,不改变两侧蛋白分子的抗原性和疏水性。融合蛋白表达后 ,被CD80tm锚定于肝癌细胞表面 ,超抗原部分 (SEA)表达在细胞膜外 ,二级结构预测Linker不改变蛋白结构 ,完全符合作者设计疫苗的初衷。结论 :重组疫苗设计合理 ,特异性高 ,融合蛋白有很大可能保留了SEA和CD80tm的理化特性 ,为进一步的实践操作提供了可靠的理论基础。

血吸虫多抗原肽疫苗的合成及生物活性

目的：合成由寡聚赖氨酸和曼氏血吸虫２８ＫｕＧＳＴ抗原肽段２６４３（Ｐ２６）、１４１１５３（Ｐ１４１），日本血吸虫２６ＫｕＧＳＴ抗原肽段１８７２０２（Ｊ１８７）组成的血吸虫多抗原肽疫苗，通过活性试验考察其抗原性及对实验动物的保护性免疫效果。方法：用固相逐步接肽法合成多抗原肽疫苗，产物经斑点酶联免疫吸附试验测定抗原性，并在无免疫佐剂存在下接种小鼠，以日本血吸虫尾蚴攻击感染，６周后剖杀小鼠进行体内成虫和肝内虫卵计数。结果：合成多抗原肽均能与感染日本血吸虫的病人或病兔血清结合，接种（Ｐ１４１）４ＭＡＰ、（Ｊ１８７）４ＭＡＰ的昆明小鼠和接种（Ｐ２６）８ＭＡＰ的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，与对照组相比成虫检获数分别减少６４６％，４１３％和２８１％；每克肝脏虫卵数分别减少５４９％，４５６％和４０６％。结论：合成血吸虫多抗原肽疫苗能诱导小鼠产生抵抗日本血吸虫感染的保护性免疫力。

包虫疫苗候选抗原基因FABP的克隆与序列分析

目的 获得细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白 (FABP)基因序列资料 ,并进行序列分析。方法 从包虫包囊内获取细粒棘球蚴原头蚴 (protocloex) ,提取RNA和DNA ,分别以cDNA和基因组DNA为模板扩增出FABP基因 ;并将其分别克隆到T载体后进行序列测定和分析 ;同时将从cDNA扩增得到的FABP基因亚克隆到原核表达载体 (pTGEX - 4T)。结果 获得长度分别为 40 2bp和 482bp两个FABP基因 ,序列分析表明内含子区域在 349…42 7bp,同源性比较结果FABP基因ORF内一个碱基突变。结论 获得了FABP基因 ,为研究其免疫效果奠定了基础。

间日疟原虫云南分离株传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因多态性分析

目的分析我国疟疾混合流行区云南分离株间日疟原虫(P.v)传播阻断疫苗候选抗原Pvs28基因特点。方法收集云南省血样17份;提取疟原虫基因组DNA;PCR扩增Pvs28基因;基因测序;DnaSPversion4.0软件进行基因多态性分析。结果成功扩增Pvs28全长基因17个序列。与标准株Sal-I比较,检测出7个错义突变,7个基因型和7种氨基酸型。云南P.v分离株核苷酸多态性π值为0.0044。若不考虑重复片段拷贝数的差异,云南P.v分离株和湖北P.v分离株Pvs28蛋白主导氨基酸型完全一致,即V14-L52-L98-E105-L116-S140-I223。与泰国P.v分离株比较,我国主导基因型突变位点完全包含在泰国P.v分离株突变位点中。结论以Sal-IPvs28为基础建立的传播阻断疫苗能够克服云南P.v分离株Pvs28抗原多样性而发挥传播阻断作用,提示间日疟原虫传播阻断疫苗在我国具有良好的应用前景。

我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点分析

目的明确我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点。方法收集疟疾单纯流行区浙江、湖北两省间日疟患者血样,制备血样干滤纸片;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增Pvs48基因;Sanger双脱氧链终止法测序并分析。结果成功扩增12例间日疟原虫分离株Pvs48全长基因。与间日疟原虫标准株SalⅠ比较,检测出6个错义突变位点,导致6处氨基酸置换和6种基因型。结论我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48具有保守性。