减毒沙门菌作为疫苗活载体的研究进展

沙门菌是一种常见的病原菌，在医学、兽医学和公共卫生学上均具有重要的意义，其是一种胞内侵袭性细菌，能够逃避巨噬细胞的先天性免疫而在胞内存活，研究发现其能够有效递呈外源抗原到黏膜表面，发挥疫苗活载体的作用，重组减毒的沙门菌能够在淋巴组织内黏附、侵入和增殖，刺激机体的黏膜免疫，进而激活机体的免疫调节功能，引发全身性的免疫应答。在抗病毒、寄生虫、肿瘤等方面均取得了较为可观的前景，近些年随着一些新方法和新技术的诞生，针对减毒沙门菌作为疫苗载体递呈外源抗原的研究越来越引起人们的关注。

动物疫病活载体疫苗研究进展

活载体疫苗是以细菌或病毒作为载体表达外源抗原和治疗因子的载体系统,具有安全性高、毒力返祖风险低、成本低,可诱导免疫机体产生高水平的体液免疫、细胞免疫或黏膜免疫等优点,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一,在动物疫病防控领域应用较多。病毒载体包括DNA病毒(如腺病毒、腺相关病毒和痘病毒等)和RNA病毒(如新城疫病毒、流感病毒等);细菌载体包括减毒致病菌与非致病菌两类,主要包括乳酸菌、沙门氏菌、大肠杆菌等。活载体疫苗常用的抗原呈递策略有载体-宿主平衡致死系统、微生物表面展示系统。多种疫苗载体的开发及抗原呈递策略的选择,使得活载体疫苗的使用价值最大化。不同载体疫苗在预防疫病方面均有不同优缺点,应根据实际情况选择最优最适合的活载体疫苗。本文综述了动物疫病防控领域的病毒和细菌活载体疫苗研究进展及其抗原呈递方式,以期为活载体疫苗的进一步研究提供参考。

病毒稀释液理化特性对禽流感病毒(H9亚型)重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗病毒蚀斑数的影响

为了解病毒稀释液理化特性对禽流感病毒(H9亚型)重组火鸡疱疹病毒载体活疫苗(HVT-H9-308株)蚀斑数的影响,研究解析了稀释液配方、pH值、温度以及稀释液中添加抗生素等因素的改变与病毒衰减之间的关系。结果显示:商品化稀释液与M199培养基效果相似,添加胎牛血清能够提升稀释液使用效果;稀释液pH7.0时,稀释疫苗后获得的蚀斑数最高,酸或碱性稀释液均显著降低稀释后病毒蚀斑数(P<0.05);稀释液温度为25℃时,稀释疫苗后获得的蚀斑数最高,高温或低温稀释液均显著降低稀释后病毒蚀斑数(P<0.05);添加头孢噻呋后,对稀释液pH值改变小,未对稀释后蚀斑数产生显著影响,而添加盐酸林可霉素和硫酸大观霉素后,稀释液pH值变酸性,显著降低稀释后病毒蚀斑数(P<0.05);稀释液的改变主要影响稀释瞬间病毒蚀斑数,对蚀斑数随时间的衰减规律无明显影响。综上所述,在25℃、pH 7.0时使用空白商品稀释液稀释禽流感病毒(H9亚型)重组火鸡疱疹病毒载体活疫苗(HVT-H9-308株),能更好保证疫苗免疫效果。

重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗研究进展

火鸡疱疹病毒因具有基因组庞大、复制非必需区域多、容纳外源基因能力强、安全性好、免疫持续时间长、相关基因操作技术成熟等众多优点成为活载体疫苗研究的热点。利用同源重组、细菌人工染色体、Fosmid和CRISPR等技术,研究人员成功构建了火鸡疱疹病毒的感染性克隆,并将其转染至易感细胞中拯救重组病毒。为使重组病毒高效表达外源蛋白,通常选择合适的插入位点、启动子和终止序列,并对外源基因序列进行优化处理。目前,以火鸡疱疹病毒为载体的重组疫苗在禽流感、新城疫、传染性法氏囊病、传染性喉气管炎、鹦鹉热衣原体病、艾美尔球虫病和鸭霍乱等多种疾病的预防和控制中展现出了广阔的应用前景。本文从火鸡疱疹病毒活载体疫苗的发展历程、构建方法与应用实践等方面进行综述,旨在为相关领域研究提供理论和实践指导。

犬细小病毒核酸疫苗、重组活载体疫苗与弱毒疫苗免疫犬实验研究

分别用犬细小病毒(CPV)核酸疫苗(pVCPV-VP2)、CPV重组活载体疫苗(CAV2/CPV)与CPV弱毒疫苗对犬进行了免疫试验,以检测不同CPV疫苗的免疫原性。采用CPV ELISA、CPV HI与CPV微量中和试验检测免疫犬的体液免疫水平,采用淋巴细胞转化试验检测犬的细胞免疫水平。结果,pVCPV-VP2和CAV2/CPV均能诱导机体产生抗CPV ELISA抗体与抗CPV中和抗体,但是pVCPV-VP2不能诱导机体产生可检测的抗CPV HI抗体,而CAV2/CPV能够诱导机体产生抗CPV HI抗体。淋巴细胞转化试验结果,pVCPV-VP2和CAV2/CPV免疫犬的外周血淋巴细胞对ConA与CPV的刺激均出现明显的增殖反应。结果表明,pVCPV-VP2和CAV2/CPV免疫犬均能诱导机体产生抗CPV的特异性体液免疫反应和细胞免疫反应,两者所表达的VP2蛋白均具有较好的免疫原性。CAV2/CPV以及pVCPV-VP2和CAV2/CPV联合免疫犬的抗CPV体液免疫水平和细胞免疫水平均比用pVCPV-VP2单独免疫犬的体液免疫水平和细胞免疫水平高。但CAV2/CPV诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应仍然比CPV弱毒疫苗诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应弱。另外,CAV2/CPV还能诱导机体产生抗CAV-2的特异性免疫反应。

活载体疫苗的研究进展

随着现代科学的发展与生物技术的进步,基因工程疫苗的应用日趋广泛。活载体疫苗是基因工程疫苗中最具发展意义的疫苗之一,一般具有免疫效果好、效率高、易控制、成本低、相对稳定、诱导位点专一、免疫方式简单等诸多优点。

表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组活载体疫苗株的构建

【目的】构建表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。【方法】克隆并改造TSOL18基因,构建重组质粒pYA3341-TSOL18,电转入鼠伤寒沙门氏菌终宿主菌株X4550,体外鉴定重组菌X4550(pYA3341-TSOL18)表达蛋白的免疫原性、稳定性、生长曲线、安全性和小鼠免疫试验进行评价。【结果】酶切鉴定和基因序列测定证实重组质粒构建成功;尿素-SDS-PAGE检测有目的蛋白条带,Western Blot证实该抗原具有免疫原性;重组菌株在体外营养选择压力下可稳定地携带重组质粒传代繁殖;蛋白的表达对重组菌株的生长基本没有影响;小鼠实验证实重组菌安全可靠,二免后ELISA检测产生抗体。【结论】成功构建了能稳定表达TSOL18蛋白的可口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(pYA3341-TSOL18)。

动物病毒重组活载体疫苗研究进展

病毒活载体疫苗作为一种新型疫苗,与传统疫苗相比,具有极大的优势与应用前景,是当今与未来疫苗研制与开发的重要方向之一。目前在人类医学和兽医领域,病毒活载体疫苗均取得了大量的研究成果。本文综述了主要的兽用病毒疫苗载体及重组活载体疫苗的最新研究进展,并分析了其发展趋势,为进一步研制新型重组病毒疫苗提供参考。

TSOL18抗原重组减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗对小鼠的免疫保护作用

用构建好的活载体疫苗X4550(pYA3341-TSOL18)免疫小鼠,检测小鼠血清中IgG、IgM和肠液中IgA抗体的产生及各免疫组织重组疫苗株的分布情况,分析小鼠脾细胞亚型的分化,探讨了重组疫苗的免疫保护效果。结果显示,在免疫后第7 d,小鼠血清中有抗TSOL18 IgM产生,在二免后第28 d,IgG的D492 nm值达到0.645,在二免后第42 d,肠液中有抗TSOL18分泌性IgA抗体产生,表明重组疫苗能诱导小鼠产生较强的抗体水平和激发多种方式的免疫应答;小鼠免疫后第21 d在脾中仍能检测到大量的重组疫苗株,表明TSOL18重组蛋白的表达没有影响重组疫苗X4550(pYA3341-TSOL18)的定居能力;免疫小鼠的CD4+、CD8+T淋巴细胞数目明显增多,CD4+/CD8+T细胞比值也显著增高(P<0.01),提示重组疫苗可能通过提高CD4+/CD8+T细胞比值来发挥免疫作用。

伪狂犬病病毒基因缺失及活载体疫苗研究进展

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种畜、禽及野生动物的一种以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要症状的急性传染病。该病每年给养猪业造成的损失达数十亿美元,目前对该病主要是以疫苗防制为主。随着基因工程技术的不断更新和发展,研制更加安全、有效的基因工程疫苗对该病的防治将会有重要的意义。文章对伪狂犬病基因缺失疫苗及活载体疫苗的研究进行了综述。

减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展

活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体。现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功。文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述。

Ⅰ型牛疱疹病毒活载体疫苗的构建及研究进展

I型牛疱疹病毒(BHV-1)可引起牛的呼吸道疾病、生殖道损害、流产甚至致死性系统感染,给养牛业造成了严重的经济损失,疫苗接种是防治本病的主要措施。文章介绍了其活载体疫苗的构建原理、研究进展及应用前景方面内容。

口蹄疫重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1的构建与理化学特性研究

目的 构建含有口蹄疫病毒（FMDV）衣壳蛋白前体PI-2A和蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗并研究其理化学特性。方法选用鸡痘病毒作为载体，将FMDV的衣壳蛋白前体P1—2A和蛋白酶3C基因插入到鸡痘病毒表达载体中，构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1，并与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞，通过药物BrdU加压筛选、间接免疫荧光实验以及Western blot等方法筛选并获得了一株重组鸡痘病毒。将其经酸、碱、加热、氯仿、乙醚以及胰蛋白酶处理，接种到CEF上观察处理前后口蹄疫重组活载体疫苗vUTAL3CP1细胞病变，分析这些理化因子对口蹄疫重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1重组鸡痘病毒的影响。结果 在pH3．0～9．0范围内，pH值变化不会造成该口蹄疫重组活载体疫苗vUTAL3CP1毒价的显著变化；口蹄疫重组活载体疫苗VUTAL3CP1经50℃60min、55℃30min或60℃15min即可被灭活；对氯仿敏感；经胰蛋白酶37℃作用1h，毒价降低2．44log10TCID50对乙醚有抵抗力，经乙醚作用24h病毒滴度下降1．0log 10TCID50结论 筛选并鉴定了含有口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1，为疫苗研制奠定基础。

活菌疫苗载体的研究与应用

目前在疫苗研究中,要求新型疫苗不仅能够激发高效持久的免疫应答,而且应易于接种、生产费用低。减毒或无毒的活微生物作为疫苗载体能够激起持久的系统和黏膜免疫反应,批量制备成本较低,且具有良好的安全性,近年来已成为疫苗研究领域的热点。本文综述了几种活菌疫苗载体,包括沙门氏菌、卡介苗、耶尔森菌等的研究状况及其在疫苗载体方面的应用。

表达乙型脑炎病毒E蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建

目的:构建表达乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株。方法:克隆JEV E基因,将其插入表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-E,将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E);鉴定重组菌E蛋白的表达,测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性,以及小鼠的免疫试验和血清中和试验。结果:酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE检测有目的蛋白条带;Western印迹证实表达的E蛋白能与猪抗JEV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可较稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用,安全可靠;小鼠口服重组菌免疫,ELISA检测产生了抗JEV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。结论:构建了能稳定表达JEV E蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-E),为研究乙型脑炎口服基因工程疫苗奠定基础。

用活载体疫苗诱导动物黏膜免疫的研究进展

动物传染病是危害动物健康，给畜牧业造成重大经济损失的主要原因，免疫预防是减少损失最经济最有效的手段之一。随着新技术的应用，活载体、亚单位、合成肽以及核酸疫苗等新型疫苗也相继问世。在新型疫苗中活载体疫苗由于其独特优势备受关注，在诱导黏膜免疫方面也最具优势。本文主要介绍黏膜免疫的基本特点及活载体疫苗诱导动物黏膜免疫的研究进展。