仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用

建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌（CVCC79500株）运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18-24 h,37℃、200 r/min振荡培养8-24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108-31×108、33×108-41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108-66×108、78×108-88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5-5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。

猪链球菌4型疫苗用菌株的筛选

【背景】猪链球菌4型(Streptococcus suis serotype 4,SS4)分离率日益升高,对养殖业和公共卫生安全造成严重危害,目前尚无有效的SS4疫苗。【目的】筛选致病力强、抗原性好、遗传性状稳定的SS4疫苗菌种。【方法】以7株SS4分离株(代号为A1−A7)为受试菌株,通过累积法测定菌株半数致死量(LD_(50)),ELISA测定免疫小鼠血清中IgG效价,攻毒保护试验测定免疫保护率,并采集小鼠脏器观察病理组织学变化。再连续传代培养受试菌株,分别对第10、20、30代菌株进行致病性和抗原性试验。【结果】A1−A7菌株对小鼠的LD_(50)分别为2.19×10^(8)、1.76×10^(8)、1.83×10^(8)、1.01×10^(8)、4.05×10^(8)、1.19×10^(8)和9.03×10^(7) CFU。二免7 d后,A1、A2、A3、A4、A6、A7免疫组IgG效价分别为1:1600、1:1600、1:3200、1:6400、1:3200和1:6400,免疫保护率分别为30%、30%、50%、70%、60%和80%,而且A4、A7免疫组小鼠组织病变较其余4组轻微。体外传至30代后,A4菌株的LD_(50)上升至3.81×10^(8) CFU,IgG效价下降至1:1600,免疫保护率下降至40%,而A7菌株的LD_(50)上升至2.49×10^(8) CFU,IgG效价和免疫保护率稳定保持为1:6400和80%,而且A7免疫组小鼠的组织病变较A4免疫组轻微。【结论】A7菌株(原始编号为HBgu18-4)具有强致病力和良好的抗原性,而且遗传性状均一、稳定,可作为SS4制苗候选菌株。