HLA-A＊0201／Kb及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用

目的:为了用HLA-A2·1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A*0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法:采用基因共转染的方法,将HLA-A*0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、流式细胞术(FCM)和Westernblot检测了HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和提呈。结果:RT-PCR、FCM和Westernblot检测到HLA-A*0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论:MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。

HLA-A0201/K^b及MAGE-3基因共转染B16细胞的制备及其在MAGE-3肿瘤疫苗评价中的作用

目的用HLA-A2.1转基因鼠制备荷瘤模型以评价肿瘤疫苗的免疫效果,制备共表达HLA-A0201/Kb嵌合基因和MAGE-3的B16黑色素瘤细胞。方法采用基因共转染的方法,将HLA-A0201/Kb和MAGE-3转染到B16黑色素瘤细胞(B16-HLA-MAGE-3),利用RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测了HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16黑色素瘤中的表达;通过测定CTL活性和体内抑瘤实验证实肿瘤抗原MAGE-3可以在B16-HLA-MAGE-3中得到有效加工处理和递呈。结果RT-PCR、细胞流式和western blot的方法检测到HLA-A0201/Kb和MAGE-3在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤中的表达;LDH的方法观察到MAGE-3疫苗免疫小鼠脾细胞对B16-HLA-MAGE-3细胞的特异性CTL反应,抑瘤实验也证实,B16-HLA-MAGE-3细胞在免疫小鼠体内生长明显受到抑制。结论MAGE-3基因在B16-HLA-MAGE-3黑色素瘤细胞中得到表达,并被有效的加工处理、提呈给特异性CD8+T细胞;B16-HLA-MAGE-3细胞可以用来制备荷瘤模型,且该方法适合利用转基因小鼠用于人表位疫苗的体内评价。

疫苗评价中有关风险效益分析的思考

疫苗评价的原则是安全、有效,安全是第一位,有效是第二位的。评价中需分析能够接受疫苗使用带来的风险程度和疫苗接种者的获益程度或对整体流行病学意义的获益程度。本文将站在疫苗评价者的角度,讨论疫苗审评中所关注的风险效益分析,并以多年来总结的实例阐述疫苗研发中需考虑的重点问题。

从真实世界数据到真实世界证据:疫苗评价的应用

近十年来随着真实世界数据的应用增多,在弥补随机对照临床试验证据方面真实世界证据(Real-world evidence,RWE)研究为药品监管决策提供了重要的技术和证据支撑,一些国家药品监管机构出台了一系列RWE研究的规范和政策。新型冠状病毒感染疫情推动了RWE研究的进程和范围,尤其在评价疫苗有效性和安全性上取得了长足进步。RWE研究监管体系建设起步较晚,RWE研究质量体系和证据产生的机制尚需不断完善。目前RWE研究的相关概念、目的、数据源、研究设计框架等仍需规范。本文从疫苗评价的角度,对RWE研究的相关概念、应用范围、优势和局限性、监管法规和指南、数据源、设计类型、研究设计框架、应用实例、面临的挑战及其对策等进行概述,为开展RWE研究提供参考。

猪瘟传代细胞疫苗临床免疫试验效果评价及分析

在非洲猪瘟全国流行的情况下,经典猪瘟的免疫尤为重要。不同公司生产的猪瘟疫苗的免疫效果及免疫副反应不同,为选择优质疫苗,选择两个不同厂家猪瘟传代细胞疫苗,开展断奶猪两次免疫并收集数据,进行免疫效果及免疫副反应的评价。从副反应统计及疫苗效果跟踪可知,B公司猪瘟产品效果明显好于A公司产品。之后将B公司猪瘟疫苗产品应用在规模猪场进行临床效果跟踪,结果表明猪瘟抗体水平明显提升,且临床仔猪猪瘟抗体较高,可为猪瘟疫苗评价及防控提供参考。

戊型肝炎病毒疫苗的研发和评价

由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)导致的疾病日渐引起人们的关注。中国目前已经上市的HEV疫苗为万泰沧海生物技术公司(INNOVAX)研发的大肠杆菌表达的I型中国分离株ORF2 p239重组疫苗HEV 239(Hecolin),它能形成病毒样颗粒从而产生更好的免疫原性。该疫苗在HEV高危人群和高流行地区的使用将对戊型肝炎的流行起到积极的防控作用。回顾了HEV疫苗研究的历史过程,并探讨了目前HEV疫苗评价方法面临的问题及研究思路。

应用BACTEC-960仪进行DNA疫苗保护力评价的研究

根据BACTEC 96 0仪分析动物试验模型主要脏器的结核分枝杆菌生长情况 ,分析结核分枝杆菌MPT6 4和ESAT6DNA疫苗预防结核病的效力。将BALB/C小鼠随机分五组 ,分别用A组生理盐水、B组载体质粒、C组卡介苗、D组重组质粒JW 4 30 3 MPT6 4DNA、E组JW4 30 3 ESAT6DNA免疫 9周后 ,用H3 7RV结核分枝杆菌强毒株攻击小鼠。观察攻击一个月和两个月后的结果。发现C ,D ,E组比B组生长天数总体向后推迟 ,生长时间明显集中 ,生长曲峰强度比B组明显减弱 ,C组肝脏中的感染率比D ,E组有所下降。D组肺脏中感染率下降明显。D ,E组鼠脾淋巴细胞转化率较C组高 ,B明显降低。结论 :与B组比 ,小鼠免疫力的短期预防有所增强 ,其中卡介苗前期效果明显 ;MPT6 4 ,ESAT6是持续效果好。

关于腹泻疫苗人体安全性及效果的评价问题

人类腹泻的致病微生物有多种,其中危害最大的有霍乱菌、痢疾菌、大肠菌和轮状病毒等。从预防出发,特别是预防大流行的发生,用疫苗免疫,还不失为最佳选择,可惜尚未有合适的疫苗。当前应用生物技术研制新型疫苗有着良好的前景,并已有明显的进展,但如何评价疫苗的效果仍是困扰我们的问题。

猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗、猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗免疫效果及免疫安全性评价

为进一步了解猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗、猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗免疫种公猪产生的免疫应激反应及免疫效果,本试验分别对8头免疫种公猪的七项生殖生理指标和免疫抗体进行对比测试,测试结果表明:种公猪免疫前5 d与免疫后15 d内七项生殖生理指标均无显著性差异;种公猪免疫后21 d与免疫前抗体相比较,抗体阳性率显著升高;证实上述两种疫苗免疫种公猪是安全有效的。

柯萨奇病毒B组1型感染动物模型研究进展

柯萨奇病毒B组1型(coxsakievirus B1,CVB1)能引起人类心肌炎、无菌性脑膜炎、新生儿全身感染等多种疾病,幼儿感染后病情较重甚至引发死亡,而目前尚无针对该病毒的疫苗及特效治疗药物。因此,建立并开展相关动物模型研究对CVB1感染后的机体免疫反应、病毒毒力机制、药物疫苗研发等问题的解决具有重要意义,同时也能为临床治疗提供部分依据。本文通过对CVB1病毒感染构建的不同动物模型进行总结,以期望为建立合适的动物模型以及开展相关研究提供参考。

结核病疫苗研究正在展开

近日，在武汉大学A3实验室，编号为060211251的猕猴被送去拍胸部X光片。它与87个伙伴被选中参与目前世界规模最大的一项结核病候选疫苗评价研究，该项目由武汉大学A3实验室与美国一家结核病疫苗研发机构合作实施。

2004,完成SARS灭活疫苗Ⅰ期临床试验

科技部、卫生部、国家食品药品监督管理局日前联合宣布:我国自主研制的SARS灭活疫苗Ⅰ期临床试验已经顺利完成,取得了阶段性重大进展,标志着SARS疫苗研究的难关已基本攻克。

口蹄疫病毒样颗粒疫苗对机体免疫功能的影响

口蹄疫病毒样颗粒(virus-likeparticles,VLPs)疫苗是由VLP生理盐水+佐剂组成,本疫苗会起到增强机体免疫力的效果.为了评价口蹄疫病毒样颗粒疫苗对机体免疫功能的影响,采用腹腔巨噬细胞收集与吞噬实验和溶血空斑实验来评价疫苗的增强机体天然免疫应答能力与B淋巴细胞产生抗体能力.

草鱼IgM的纯化、标记及检测方法的建立

通过ProteinA亲和层析法分离纯化草鱼血清中的免疫球蛋白IgM,SDS-PAGE检测产物的纯度及分子量,用纯化产物免疫兔制备多克隆抗体,并用辣根过氧化物酶标记此免抗草鱼IgM抗体,用于检测经草鱼出血病病毒广东株(GCRV-GD108)衣壳蛋白VP4及VP5免疫草鱼后产生的抗体水平。结果表明,纯化后的草鱼IgM轻链及重链分子量分别在25 kD和75 kD左右,所制备的草鱼标记抗体可应用于草鱼血清IgM水平的快速检测。建立了标记抗体检测草鱼抗血清的方法,为进一步研究病原体入侵感染机制、草鱼的免疫防御机理和疫苗效果评价等提供便捷的血清学检测方法。

表达HIV-1 CRF01_AE亚型结构基因小鼠模型的建立和鉴定

目的:构建并鉴定表达HIV-1 CRF01_AE亚型结构基因的小鼠模型。方法:使用哺乳动物密码子优化的HIV-1 CRF01_AE gp160基因,通过慢病毒包装系统构建重组慢病毒LV-GFP-AE gp160,将上述重组慢病毒感染小鼠肺上皮细胞TC-1,经嘌呤霉素抗性筛选获得稳定表达gp160基因的TC-1细胞。采用RT-PCR、流式细胞术检测gp160基因在细胞内的表达稳定性,将稳定表达Gp160蛋白的TC-1-HIV AE gp160细胞接种小鼠,用免疫组化方法检测小鼠体内细胞团块中HIV Gp160蛋白的表达。结果:菌落PCR、酶切鉴定和测序表明重组质粒pLVX-AE gp160构建正确,RT-PCR、GFP荧光及流式细胞术结果均显示gp160基因能在细胞TC-1中稳定表达,免疫组化结果也表明小鼠体内接种的细胞可以稳定表达HIV Gp160蛋白。结论:建立了稳定表达HIV-1 CRF01_AE亚型Gp160蛋白的TC-1细胞及小鼠模型,为HIV-1 CRF01_AE亚型HIV疫苗的临床前研究提供了可靠的体外、体内免疫原性评价工具,为该疫苗的进一步开发奠定了坚实的实验基础。

百日咳小鼠呼吸道感染模型的建立与应用

目的模拟自然感染方式建立百日咳小鼠模型,并初步应用于疫苗评价。方法通过对小鼠品系、周龄,感染用菌株、菌液浊度,感染时间等进行比较,确定动物模型建立的相关参数。然后借助该模型比较全细胞百日咳疫苗和无细胞百日咳疫苗免疫后的小鼠肺部百日咳杆菌的清除情况。程序为第0、2、4周免疫,第6周进行呼吸道感染,感染后2 h、3 d、7 d、14 d、21 d取样,对小鼠肺部菌落进行计数。结果在菌液浊度至少为109CFU/m L时,用Tohama I株对4～10周龄BALB/c小鼠雾化感染30 min,小鼠肺部百日咳杆菌分离培养的阳性率可达100%。用于疫苗评价后发现,免疫全细胞百日咳疫苗的小鼠在感染后7 d检测不到肺内的百日咳杆菌,而免疫无细胞百日咳疫苗的小鼠在感染后21 d还可分离出少量百日咳杆菌。结论通过动物发病、肺部细菌分离培养和感染曲线等对动物模型进行分析,证明通过呼吸道感染途径可成功建立百日咳小鼠模型,并且该模型可应用于百日咳疫苗的评价,为百日咳疫苗的有效性评价奠定重要基础。

疫情暴发现场新冠病毒疫苗流行病学保护效果评价技术指南(试行)

评估我国新冠病毒疫苗在真实世界中预防新冠病毒疾病的保护效果,对不断完善我国新冠肺炎疫情防控策略具有重要意义。我国实施严格的非药物干预措施以及人群迅速达到高水平的疫苗接种率,在强有力保障公众健康的同时,对评估真实世界中接种疫苗对预防新冠病毒疾病的流行病学保护效果带来技术上的困难。近期我国部分地区出现新冠肺炎疫情及本地传播,为开展疫苗流行病学保护效果评估带来可能。中国疾病预防控制中心新冠病毒疫苗技术工作组在参考既往文献并总结前期工作经验的基础上,就如何基于国内疫情现场相关资料,探索评价疫苗在真实世界中的流行病学保护效果,制定本技术指南,供现场参考使用。

2010-2014年晋中市疑似预防接种异常反应监测数据分析

疑似预防接种异常反应（AEFI）是指预防接种后发生的怀疑与预防接种有关的反应或事件。随着疫苗种类和使用量的不断增加（特别是2007年国家实行扩大免疫规划后）,AEFI的报告数量也逐年增多普遍引起公众、媒体的关注,对预防接种服务的开展产生较大影响。开展AEFI监测,对于评价疫苗的安全性,改善预防接种服务质量,从而增强公众对预防接种的信心具有重要意义[1,2]。