猪瘟病毒低温诱变疫苗Thiverval株感染性克隆的构建及病毒拯救

采用高保真DNA聚合酶,分7个片段扩增猪瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因组序列,克隆至pMD18-T载体并测序。经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101,同时对病毒基因组5′和3′末端进行修饰,构建出含有T7启动子、榔头状(HH)核酶基因、CSFV Thiverval全基因组、丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和T7终止子的重组质粒pAC/F101/T1-7。利用T7 RNA聚合酶将线性化重组质粒pAC/F101/T1-7体外转录成基因组RNA,再使用脂质体转染将体外转录RNA转染PK-15细胞。通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,表明成功的从感染性克隆拯救出活病毒粒子。猪瘟病毒低温诱变疫苗"Thiverval"株感染性克隆的构建及病毒的成功拯救,为进一步研究CSFV疫苗株的致弱机制提供了重要工具。

骆驼布鲁氏菌活疫苗A19株免疫试验

为通过骆驼布鲁氏菌A19株疫苗免疫试验筛选出适宜的免疫方案,选择布鲁氏菌抗体检测阴性骆驼60头,按照不同剂量、不同年龄分4组颈部皮下注射免疫,并于免疫后不同时间采样检测免疫抗体。结果显示,1~3岁骆驼标准剂量(6×10^(10)CFU/头)免疫后23 d,免疫抗体阳性率为100%,至免疫12个月,免疫抗体阳性率0;1~3岁骆驼减低剂量(1×10^(9)CFU/头)免疫23 d,免疫抗体阳性率为94.1%,至免疫6个月,免疫抗体阳性率为0。3~12月龄骆驼标准剂量免疫38 d,免疫抗体阳性率为50%,免疫6个月,免疫抗体阳性率0。3~12月龄骆驼减低剂量免疫38 d,免疫抗体阳性率为16.7%,免疫6个月,免疫抗体阳性率为0。结果表明,1~3岁骆驼使用布氏菌活疫苗(A19株)标准剂量(6×10^(10)CFU/头)皮下注射免疫,效果最好。

维氏气单胞菌弱毒株FS12001及其疫苗对异育银鲫的免疫效果

为探究由维氏气单胞菌(Av)弱毒株FS12001制备的疫苗免疫效果,将Av弱毒株FS12001制备活疫苗、灭活疫苗、ISA763A-灭活疫苗和蜂胶-灭活疫苗,腹腔注射免疫异育银鲫,同时设ISA763A佐剂、蜂胶佐剂及0.65%NaCl作为对照组。于免疫后1、3、5、7和14 d经实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测脾脏组织中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量;于免疫后7、14、21、28、42和48 d尾静脉采血分离血清,检测IgM抗体水平,测定SOD和LZM酶活性;于免疫28 d后用2株Av强毒株分别攻毒各组实验鱼,连续观察记录7 d,计算各免疫组的相对保护率。结果显示,各免疫组脾脏组织中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量高于对照组,且ISA763A-灭活疫苗组和蜂胶-灭活疫苗组的表达量显著高于其他各实验组。各疫苗免疫组血清特异性抗体水平均显著高于0.65%NaCl对照组和佐剂对照组。各疫苗免疫组的LZM活性均在28 d最高,灭活疫苗组、ISA763A-灭活疫苗组及蜂胶-灭活疫苗组SOD活性均在7 d最高。菌株AVCA07攻毒后,活疫苗组、灭活疫苗组、ISA763A-灭活疫苗组和蜂胶-灭活疫苗组的RPS分别为63%、56%、100%和56%;菌株YC170511攻毒后,以上4个免疫组RPS分别为59%、55%、93%和72%。研究表明,用弱毒株FS12001制备疫苗,注射免疫异育银鲫后均可增加脾脏中IgM、IL-1β及LZM的基因表达量,提高血清抗体水平,增强SOD和LZM酶活性,增强其抵抗Av感染的能力。

一株基因Ⅲ型禽呼肠孤病毒变异株的分离及其灭活疫苗免疫原性初步评价

为了解禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)变异株在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,试验采集黑龙江省某企业送检的病鸡关节组织进行病毒分离,通过RT-PCR、序列分析及常见禽类外源病毒检测鉴定,进一步通过对体外复制能力、致病性、血清交叉中和能力及灭活疫苗免疫抗体水平检测,分析其致病性、抗原性和免疫原性。结果显示:成功从病鸡关节组织中分离到1株ARV,命名为ARV-HLJ21-1690401,该分离株位于基因Ⅲ型分支,与基因Ⅲ型参考株ISR5233和42563-4-2005遗传距离较近,氨基酸序列相似性为83.4%和81.7%,而与其他基因型分离株遗传距离较远;该分离株在LMH细胞上增殖良好,对鸡胚和SPF鸡均具有明显的致病性,可引起接种鸡胚90%死亡,接种6周龄SPF鸡可引起100%发病;该分离株具有良好的免疫原性,其制备的灭活疫苗免疫SPF鸡可诱导产生较好的抗体水平。综上所述,研究成功分离到一株具有致病性和良好免疫原性的基因Ⅲ型ARV变异株,为了解我国ARV变异株的流行及遗传进化特征提供了重要理论依据。

利用大蜡螟幼虫和小鼠感染模型筛选猪链球菌血清2、3和9型三价灭活疫苗候选菌株

旨在评估临床分离的猪链球菌血清2、3、9型强毒株制备的三价灭活疫苗对小鼠的免疫保护效果。使用大蜡螟幼虫感染模型和小鼠感染模型,从临床分离的猪链球菌中筛选出血清2、3和9型强毒株各1株(SS1803、SS1803024、SS1696),检测其生长曲线和毒力因子。将菌株分别灭活及混合灭活后与佐剂混合,用4×10^(7)CFU、8×10^(7)CFU SS1803、2×10^(8)CFU、5×10^(8)CFU SS1803024、1×10^(8)CFU、5×10^(8)CFU SS1696及三价灭活苗(2×10^(7)CFU SS1803^(+)1.5×10^(8)CFU SS1803024^(+)3×10^(7)CFU SS1696)分别对BALB/c小鼠进行两轮免疫,采集血清检测特异性抗体水平,分别用3种菌株致死剂量攻毒后观察小鼠免疫保护率,同时用亚致死剂量攻毒三价苗免疫组,测定小鼠血、脑、肺、脾的组织载菌量和细胞因子IL-6、IL-12水平,并观察脑、肺、脾、肾中的组织病理变化。结果显示:3株疫苗候选菌株的毒力基因鉴定分别为SS1803:gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(+),SS1803024:gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(-),SS1696:gapdh^(+)/sly-/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(-)。单价和三价疫苗免疫组均能产生对应免疫血清型的IgG抗体,以产生IgG1型抗体为主。三价疫苗免疫组能对2、3、9型3个菌株攻毒分别提供83.3%、66.7%和66.7%的保护率,能显著降低感染后小鼠组织中的载菌量,降低血清炎性因子水平和组织病变程度。本研究筛选临床流行率高的2、3、9型强毒株,联合制备三价灭活疫苗,能够对小鼠提供良好的免疫保护力,为猪链球菌多价疫苗的研发提供新的材料。

新流腺三联灭活疫苗对禽流感病毒和禽腺病毒流行株攻毒的免疫保护试验

为了验证鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗对H9亚型禽流感、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株的免疫保护效果,采用三联灭活疫苗免疫3周龄SPF鸡,免疫后21 d采血测定禽流感H9亚型HI抗体效价,同时分别用H9亚型禽流感病毒YT株、HD株、CX株和DL株以及禽腺病毒(Ⅰ群,4型)QD株、NJ株、HA株和CZ株进行攻毒,观察疫苗对H9亚型禽流感及禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株的免疫保护效果。结果显示,免疫组禽流感H9亚型HI抗体效价几何平均值为1∶676~1∶832,对照组试验鸡HI抗体均<1∶2;用H9亚型禽流感病毒YT株、HD株、CX株和DL株攻毒,对照组鸡9/10~10/10发病,免疫组鸡均9/10以上保护;用禽腺病毒(Ⅰ群,4型)QD株、NJ株、HA株和CZ株攻毒,对照组鸡9/10~10/10发病,免疫组鸡均10/10保护。表明新流腺三联灭活疫苗对2020-2022年分离的H9亚型禽流感病毒及禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株感染具有良好的免疫保护效果。

C株猪伪狂犬病疫苗免疫效果评价

越来越多的文献证实,国内流行的猪伪狂犬病毒株已经发生变异,其毒力、致病特点已经有了明显不同,因此很多人开始质疑经典毒株对新流行毒株的保护力。目前,国内很多疫苗厂家已经将猪伪狂犬病疫苗毒株更换为新的变异毒株,将其缺失致弱后用作疫苗株,比较知名的如HB-2000株、C株等。猪伪狂犬病病毒C株的不同之处在于其是自然致弱的毒株,病毒培养效果更好,容易收获更高的毒价,但其确切的效果还需要逐步验证。

鉴别猪伪狂犬病病毒gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,本试验依据PRV HB-98株和HB2000株的gE和gI基因缺失片段设计特异性引物和探针,优化反应体系,绘制标准曲线,进行特异性试验和敏感性试验,对临床样本和疫苗样本进行检测,并与商品化试剂盒的检测结果进行对比。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线R^(2)为0.9971;该方法特异性强,能区分PRV与其他常见的猪病原体;敏感性高,最低检测限为10 copies/μL;对临床样本的检测结果与商品化试剂盒的检测结果一致;能够区分PRV gI/gE基因部分缺失的疫苗株和野毒株。结果表明,本试验建立了一种特异性强、灵敏度高、适用范围广的鉴别诊断PRV gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。

季节性流感疫苗毒株药学变更管理的探讨

世界卫生组织(WHO)每年都会对全球流行性感冒病毒进行监测,并给出相应指引,引导当年季节性流感疫苗的生产。疫苗生产企业每年根据WHO推荐的流行性感冒病毒生产当季流感疫苗。对于季节性流感疫苗毒株的变更,涉及流行性感冒监测系统,数据收集分析,疫苗株推荐,类似株/种子株筛选及分发、扩增制备,疫苗生产及检定、分发、接种等多个环节,疫苗生产企业如何进行变更管理,关系到疫苗的安全性、有效性和质量可控性。本文就季节性流感疫苗毒株药学变更的国内外法规要求、国内季节性流感疫苗毒株药学变更现状、毒株变更开展的药学工作进行了探讨,以期为疫苗生产企业季节性流感疫苗毒株药学变更管理提供参考,同时也为其他疫苗毒株药学变更管理提供思路。

猪伪狂犬疫苗C株在伪狂犬野毒阳性场的免疫策略与净化思路

伪狂犬野毒株gE阳性猪场,在商品猪育肥过程中经常出现呼吸道疾病反复高发现象,不仅造成育肥期投药成本高,且在继发感染严重时极易出现高死亡率,对规模猪场造成严重经济损失。在本案例中该猪场为伪狂犬野毒株gE阳性,一直免疫传统Barth-K61毒株疫苗,但在120日龄以上商品猪育肥期经常出现呼吸道系统疾病,经检测分析判定为伪狂犬病与传染性胸膜肺炎混合感染,投药效果不理想。2021年11月在育肥区选用美保龙生物伪狂犬C株疫苗与传统Barth-K61毒株作平行对比发现,美保龙伪狂犬C株组157日龄育肥猪有1头gE抗体阳性、1头可疑;传统Barth-K61毒株组141日龄、152日龄育肥猪gE抗体全为阳性。说明美保龙伪狂犬C株疫苗保护时间长,保护期可至育肥后期。该养殖场于2022年开始全面使用美保龙伪狂犬C株疫苗,西育肥区2023年第1季度检测结果显示120日龄以上育肥猪gE抗体均为阴性,东育肥区推迟了免疫时间导致120日龄以上育肥猪gE抗体均为阳性,此案例证明临床伪狂犬防控不仅需要优质的疫苗还需要科学合理的免疫程序,也为该场下一步对伪狂犬全面净化打下坚实基础。

妊娠后期母猪接种猪繁殖与呼吸综合征VR-2332株疫苗的安全性和生产性能评估

为了解不同免疫背景的妊娠后期母猪免疫VR-2332株疫苗的安全性及对其生产性能的影响,在华东地区选择A、B、C、D 4个不同免疫背景的规模场,每个场随机选10头妊娠后期母猪免疫猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)VR-2332株疫苗,10头未免疫的作为对照,统计试验猪的流产数、产仔数、死胎数、弱仔数及产后20 d抗体水平。结果显示,4个规模场免疫组和对照组妊娠后期母猪均未出现流产情况,产仔数差异不显著;但其中首次免疫PRRS疫苗的A猪场,死胎数和弱仔数明显高于对照组;其他猪场免疫组和对照组生产性能无显著差异;免疫组母猪群抗体水平均好于对照组。因此,PRRS VR-2332株疫苗可用于免疫猪场妊娠后期母猪,为规模场母猪群PRRS疫苗免疫提供了依据。

越南非洲猪瘟疫苗AVAC ASF LIVE(ASFV-G-ΔMGF)研究工作分析与思考

非洲猪瘟(Afcrian swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的烈性传染病。近日,越南正式将经临床试验验证的非洲猪瘟弱毒疫苗AVAC ASF LIVE(ASFV-G-ΔMGF)在其全国推广使用。本文对越南非洲猪瘟弱毒疫苗ASFV-G-ΔMGF相关研究数据进行了总结分析,分别从ASFVG-ΔMGF株攻毒保护能力评价、传代细胞培养株临床动物实验、野猪口服接种试验、毒力返强验证等方面,结合国内相关ASFV基因缺失株试验数据进行了分析。总结分析发现:越南上市的ASFV-G-ΔMGF疫苗株,二次免疫接种后攻毒保护效果更好,但在对野猪的口服接种评价中,其口鼻接种效果存在不确定性;随着疫苗株在动物体内的不断传代,其存在毒力返强和毒株变异风险,导致接种猪只临床症状明显;ASFV-G-ΔMGF株虽然有较好的攻毒保护能力和可靠的生产优势,但仍缺乏相关研究数据,特别是在垂直传播、交叉保护、基因突变等方面。后续仍需对ASFV-G-ΔMGF株的临床应用效果进一步评价。

猪丹毒强毒株对不同品种小鼠最小致死量的研究

为了确定猪丹毒疫苗的效力,本研究采用常规方法传代猪丹毒杆菌强毒株C43-8株及C43-6株,在传代菌液形态、纯粹及活菌计数等相关检验合格的基础上给16~18 g昆明小鼠(简称KM小鼠)、BALB/c小鼠、ICR(institute cancer research)小鼠注射不同数量的活菌,根据小鼠的死亡情况确定猪丹毒杆菌强毒株对不同品种小鼠的最小致死量。结果显示,猪丹毒强毒株C43-8株对KM小鼠、BALB/c小鼠、ICR小鼠的最小致死量(minimum lethal dose,MLD)分别为20、25、15 CFU;猪丹毒强毒株C43-6株对上述三种小鼠的MLD分别为15、20、10 CFU。

山羊痘弱毒疫苗(AV41株)接种途径和剂量对牛抗体反应的影响

为评估山羊痘弱毒疫苗(AV41株)经皮下和皮内接种牛体后的抗体产生规律,优化牛体免疫程序,选取25头健康成年肉牛分为5组,每组5头,标准单头份剂量为含量1.0×10^(3.5)TCID_(50) AV41株,分别以5倍和10倍羊用剂量进行皮下和皮内免疫,于接种后0、15、30、45和60 d,利用病毒中和试验(VNT)和ELISA试剂盒检测血清抗体水平。结果显示:鼻咽拭子和血液PCR结果均为阴性,未出现排毒;VNT与ELISA抗体检测结果相似,免疫后第30天,皮下接种5倍剂量组中有60%牛抗体转阳,中和抗体滴度最高达1∶640。同时,皮内和皮下10倍剂量组各有40%牛抗体转阳,皮内5倍剂量组有20%牛抗体转阳。VNT中和指数与ELISA的S/P值呈现显著正相关。上述结果表明,类似于国际上相关疫苗的接种途径和剂量,皮下注射5倍羊头份剂量山羊痘弱毒疫苗是安全和有效的,可作为临床预防牛结节皮肤病的免疫接种方案。

接种新型冠状病毒疫苗与感染奥密克戎变异株患者心肌损伤和预后的关系

目的:分析接种新型冠状病毒(新冠病毒)疫苗与奥密克戎(Omicron)变异株感染者心肌损伤和预后的关系。方法:回顾性分析2022年4月7日至2022年6月1日上海交通大学医学院附属仁济医院收治的450例Omicron变异株感染者。根据是否发生心肌损伤分为心肌损伤组和无心肌损伤组;根据预后分为死亡组和存活组。收集患者的人口学特征、流行病学、实验室检查资料、治疗措施、住院天数和预后情况。单因素和多因素logistic回归分析心肌损伤和死亡的相关危险因素。结果:心肌损伤组患者新冠病毒疫苗接种比例明显低于无心肌损伤组(P<0.05);死亡组患者新冠病毒疫苗接种比例明显低于存活组(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示接种新冠病毒疫苗与Omicron变异株感染者发生心肌损伤呈负相关关系(OR=0.247,P<0.05),而与预后无相关性。结论:新冠病毒疫苗接种与Omicron变异株感染者心肌损伤减低有关,而与预后无关。

一类具有疫苗接种的双菌株流感模型的动力学分析

依据甲型H1N1流感的传播机理,构建了一类SVEI SI RR的传染病模型.计算了控制再生数R c,证明了无病平衡点的全局稳定性和地方病平衡点的存在性,进而对模型的主要参数进行了敏感性分析,最后进行了数值模拟.结果表明:感染规模随着潜伏期感染者自愈率1-p的增大而减少;耐药性菌株的感染人数随着治疗率f的提高而逐渐增大;累计感染人数随着疫苗接种率η的增大而逐渐减小,并且相比于未接种疫苗的情况,当疫苗接种率达到0.3时,累计感染人数降低约0.47倍.因此,科学合理地进行药物治疗,加大疫苗接种的覆盖率对控制甲型H1N1流感的传播有着非常重要的作用.

重组减毒沙门氏菌疫苗候选株研究进展

疫苗是人和动物疾病防控的有效措施之一。减毒沙门氏菌不仅可以被用作疫苗,也被用作疫苗载体制备表达外源基因的重组疫苗。目前,重组减毒沙门氏菌疫苗主要通过重组载体(含宿主菌-载体平衡致死系统)或重组染色体来表达外源靶基因。重组靶基因的减毒沙门氏菌疫苗,进入动物或人体内后,不仅能够表达蛋白诱导相应的抗体,而且沙门氏菌也能促进细胞免疫应答,增强免疫效果。近些年,伴随着基因工程的发展,越来越多针对细菌、寄生虫和肿瘤的重组减毒沙门氏菌疫苗候选株被构建,具有良好的免疫保护能力,展现出良好的应用前景。本文重点介绍重组减毒沙门氏菌疫苗研究和应用的最新进展。

儿童接种疫苗后感染Omicron变异株的临床特征及实验室血化验检查研究进展

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染可导致新型冠状病毒肺炎(2019, COVID-19)疾病,当前Omicron变异毒株有着十分强烈的传染致病性,对人类的生命健康造成的严重影响及威胁,同时对于全球的医疗模式也迎来了全新挑战。目前已有众多文献资料显示SARS-CoV-2对儿童的呼吸、消化及心理等有全身性损害,但当前毒株针对儿童多以轻症为主,住院率增高,但预后情况良好,部分研究考虑与儿童接种疫苗有关。本文将总结近3年有关儿童新型冠状病毒文献,讨论新型冠状病毒感染与儿童接种疫苗后相关临床特征等相关进展情况。

广东历年PRRSV流行毒株与疫苗株的重组分析

从GenBank上可查的全部424株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)全基因序列中筛选出了42株来源于广东的PRRSV毒株全基因组序列与6株PRRSV疫苗株全基因序列,用RDP4(Recombination detecting program 4,RDP4)软件进行重组分析。发现广东株之间的重组事件集中在2010年、2011年和2015年。JXA1-RCN-2009作为亲本毒株出现在12个重组事件中,重组体的年份从2010年延续到2018年。疫苗株Ingelvac ATP-US-2006与CH-1R-CN-2008作为次要亲本毒株出现在事件10中,该事件的重组体为广东2018年的毒株。在事件18和25中可以见到疫苗株之间的重组,但软件同时显示该事件可能是自然进化而非重组。该研究对广东猪场科学规范的使用弱毒疫苗有着一定指导意义。

动态浊度法检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗及其中间产品中细菌内毒素含量

目的:建立一种用于检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗及其中间产品中细菌内毒素含量的方法。方法:应用细菌内毒素动态试管检测仪检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗及其中间产品中细菌内毒素含量,并对方法的标准曲线可靠性、准确度、精密度和耐用性进行验证。结果:细菌内毒素含量在0.125~2EU/ml范围内,标准曲线回归方程为LgTg=2.918-0.2760LgC(∣r∣=0.9964);干扰试验中,供试品细菌内毒素含量回收率为62.82%~101.04%;准确度试验中,供试品细菌内毒素含量回收率为64.54%~93.74%;精密度试验中,3名实验人员测试的平均反应时间相对标准偏差(RSD)均小于4%,18次测试的平均反应时间总RSD小于8%,供试品细菌内毒素含量回收率为76.66%~149.65%;使用不同厂家鲎试剂时,供试品细菌内毒素含量回收率为76.66%~112.68%。结论:动态浊度法可用于Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗及其中间产品中细菌内毒素的定量检测。