鲤疱疹病毒2型ORF144原核表达和多克隆抗体制备

鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)引起的鲫造血器官坏死病是近年来对鲫(Carassius carassius)养殖业危害最大的疾病之一。通过PCR扩增得到ORF144基因全长,将其与pET-32a原核表达载体连接构建重组载体pET-ORF144,转化到大肠杆菌中,经IPTG诱导表达得到大小约46 kDa的重组蛋白,该蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在。将重组融合蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,间接ELISA检测显示抗体效价大于1∶51200。经Western Blot验证该抗体可特异性识别感染CyHV-2的细胞中的蛋白质和纯化的融合蛋白。间接免疫荧光结果显示该蛋白定位于细胞质,呈点状分布。结果表明构建的ORF144多克隆抗体可为病毒的基因功能和致病机制研究提供基础。

养殖鲫鲤疱疹病毒2型的鉴定及病毒囊膜蛋白ORF131多抗的制备

为了解鲤疱疹病毒2型(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)在南京地区养殖场鲫鱼中的发病情况,对南京某渔场疑似CyHV-2感染鱼,采集鳃、肾脏等组织进行解旋酶基因(hel)PCR扩增测序及遗传变异分析;通过蔗糖密度梯度离心从发病鲫鱼组织中提纯病毒粒子,电镜观察其形态;对CyHV-2的10种囊膜蛋白编码基因进行测序,并基于生物信息学分析选择理想的囊膜蛋白进行原核表达,免疫小鼠制备抗血清。结果显示:患鱼组织hel基因检测阳性,其序列与参考株ST-J1毒株hel基因序列(GenBank登录号:JQ85364)高度同源(99.67%),并位于同一进化分支;利用蔗糖密度梯度离心结合Western blot检测发现,病毒粒子存在于40%~46%蔗糖层,电镜观察显示直径在160 nm左右;10种囊膜蛋白中开放阅读框131(ORF131)囊膜蛋白具有一段连续B细胞表位且抗原性良好,将ORF131原核表达、免疫小鼠后制备的抗血清ELISA效价达1∶4000。本研究为南京地区CyHV-2感染的检测和防控提供了依据。

马疱疹病毒2型研究进展

马疱疹病毒2型(equine herpesvirus 2,EHV-2)属于疱疹病毒科γ疱疹病毒亚科,通常导致马呼吸道症状以及免疫抑制,进而引发其他疾病,现已成为引起马流产的潜在病原体。该病毒最大特点为潜伏感染,已流行于全世界,近年来我国也有检测到病毒的报道,这给养马业造成潜在威胁。目前对EHV-2致病机理尚不清楚,且未有针对EHV-2的疫苗,这给该病的防治带来一定的挑战。本文围绕EHV-2感染的病原学、国内外流行情况、临床表现、检测方法等进行了综述,以期为进一步研究提供参考。

驴流产样品中马疱疹病毒2型的鉴定与遗传进化分析

为了解马疱疹病毒2型(EHV-2)在驴群中的流行情况,本研究采集新疆伊犁察布查尔锡伯自治县某驴场流产母驴血清104份,利用PCR方法检测EHV-2的携带情况。结果显示,4份驴血清携带EHV-2,阳性率为2.9%,表明该驴场流产母驴携带EHV-2。遗传进化分析显示,本研究鉴定的EHV-2 Chabuchar16、Chabuchar31和Chabuchar34与波兰EHV-2 PL_EHV2_44、PL_EHV2_39_Ⅷ株处于同一进化分支,EHV-2 Chabuchar35与波兰EHV-2处于另一进化分支,表明有2种EHV-2基因型感染驴,且均与致伊犁马流产的EHV-2 XJ-YLZS28和XJ-YLZS28株亲缘关系较远。同源性分析显示:EHV-2 Chabuchar16、Chabuchar31和Chabuchar34与波兰马源EHV-2 PL_EHV2_39_Ⅷ株g B基因序列同源性为98%~99.6%,氨基酸序列同源性为97.5%~99.6%;EHV-2 Chabuchar35与波兰马源EHV-2PL_EHV2_3_I株g B基因序列同源性为99.7%,氨基酸序列同源性为100%,表明驴源EHV-2可能为外来病毒,且来源于马。另外,本研究鉴定的4株EHV-2 g B氨基酸序列在D^(165)N、P^(183)T、R^(196)K、S^(202)V和K^(217)R等位点发生了突变。本研究首次在流产驴血清中检测到EHV-2,并对其g B基因进行了遗传进化分析,为驴源EHV-2的流行病学研究提供了基础数据。

鲤疱疹病毒2型不同分离株的基因组比较分析

从流行病学和病原学方面简述了鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2),对感染CyHV-2的金鱼、鲫的状态进行了比较。通过GenBank数据库查找,显示CyHV-2完整基因序列有7株,虽然这7株的基因组具有很高的同源性,但是不同的分离株在其基因组中包含很多突变、插入、缺失和重排。CyHV-2基因组约含150个ORF,其中部分ORF的功能在病毒感染过程中起重要作用。CyHV-2是一种具有高度传染性的病原体,主要感染金鱼、鲫及其变种,严重危害金鱼和异育银鲫养殖业发展。指出,应以CyHV-2的基因组序列为基础,加强对CyHV-2的基因功能以及宿主对CyHV-2的免疫反应等基础研究,以获得更有效地预防、控制和治疗方法,遏制其病毒的传播扩散。

脑脊液二代测序确诊人类疱疹病毒2型所致坏死性脑膜脑炎一例

1病例报告患者男,37岁,因“发热伴进行性头痛加重3 d,发作性意识不清1 d”于2019-07-23日就诊于兰州大学第二医院。入院前3 d患者无明显诱因出现发热,体温38.4~39.4℃,伴头痛,为颞区轻度间歇性搏动性痛。次日症状加重,波及枕部及后颈部,予布洛芬缓释胶囊治疗无效。7月22日头痛症状明显加重,呈持续性,恶心,呕吐2次,呕吐物为胃内容;夜间突然意识不清,伴左侧肢体不自主运动,0.5 min后意识恢复。遂来兰州大学第二医院门诊,就诊时再次出现意识不清伴左侧肢体不自主运动,1 min后意识恢复。

鲤疱疹病毒2型武汉株的分离与鉴定

采用细胞培养、超薄切片电镜观察、巢式PCR检测以及病毒DNA克隆与测序分析等技术。从湖北武汉一循环水养殖系统中患出血病异育银鲫（Carassius auratusgibelio）体内分离鉴定了一株鲤疱疹病毒2型（Cyprinid herpesvirus2，CyHV-2）病毒，命名为鲤疱疹病毒2型武汉株（CyHV-2．WH）。患病鱼组织匀浆液接种锦鲤鳍条细胞系（Koi．Fin）可产生典型的细胞病变效应。用患病鱼组织匀浆液与细胞培养物分别人工感染异育银鲫，均可重复出与自然发病相同的症状，死亡率达100％。患病鱼脾与肾脏组织超薄切片电镜观察结果显示，病毒为具囊膜的球形病毒，囊膜直径为170-200am，病毒衣壳直径为110～120nm，病毒在细胞核内复制、组装。采用CyHV-2的特异引物对病鱼样本和感染细胞培养物样本进行巢式PCR检测，均能扩增出357bp的目的条带，将该扩增产物进行测序与比对分析后发现，其与GenBank中已报道的CyHV-2毒株的DNA解旋酶基因高度同源（99．44％以上）。与鲤疱疹病毒3型（CyHV-3）也有较高的同源性（81．55％）。系统进化分析结果显示，CyHV-2．WH株与JS2012、H．Fukuda、YCll0907等CyHV-2病毒株属同一分支。

鲤科疱疹病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立快速和敏感的检测鲤科疱疹病毒2型(Cy HV-2)的方法,本研究根据Cy HV-2 DNA聚合酶基因序列合成引物和Taq Man探针,建立了Cy HV-2荧光定量PCR检测方法。结果显示,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在5拷贝/μL^5×108拷贝/μL具有良好的线性关系,相关系数为0.999;其最低检出量为5拷贝/μL,比普通PCR的敏感度高100倍。该方法仅对Cy HV-2的靶基因序列进行扩增,而对锦鲤疱疹病毒、流行性造血器官坏死病病毒、病毒性出血性败血症病毒、传染性胰脏坏死病病毒及鲤春病毒血症病毒核酸扩增结果均为阴性。组内和组间重复试验变异系数的平均值分别为0.5%和0.3%,具有良好的重复性。与常规PCR相比较,该方法具有快速、敏感、特异及高通量检测等优点,适用于对Cy HV-2的快速检测。

马齿苋合剂水提液抗单纯疱疹病毒2型的实验研究

目的观察马齿苋合剂水提液对单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的抑制作用。方法马齿苋水提液作用于Hep-2、Vero细胞和原代兔肾(PRK)3种细胞上研究其抗病毒作用。结果马齿苋合剂水提液在Hep-2、Vero细胞和PRK细胞上均有明显的抗HSV-2作用,对HSV-2的最小有效浓度(MTC)为0.5 mg/ml,而且毒性低,最大无毒浓度(TDO)为12mg/ml,治疗指数(TI)为30.0,并有直接杀灭HSV-2的作用。结论马齿苋合剂水提液具有抗HSV-2作用。

生命泉膏滋抗实验小鼠阴道单纯疱疹病毒2型感染的研究

目的 :研究中药生命泉膏滋 (FESOL)抗小鼠阴道 HSV- 2感染的药效学作用。方法 :以不同剂量 FESOL作用于阴道感染 HSV- 2实验小鼠 ,观察用药后动物的发病率、死亡率和病变发展速度及程度。结果 :FESOL 高、中剂量组 ,[8.33、1.6 7、0 .34 g/ (kg.d) ]能显著降低感染鼠的发病率、死亡率 ,同时显著减轻病变程度 ,减慢病变发展速度。结论 :中药 FESOL能有效抗小鼠阴道 HSV- 2感染。

非淋菌性尿道炎与单纯疱疹病毒2型感染关系的研究

目的 进一步探讨目前我国男性非淋菌性尿道炎感染的病因。方法 用细胞培养法和免疫荧光法联合检测 10 0例非淋菌性尿道炎 (NGU )组和 3 0例对照组患者尿道分泌物标本单纯疱疹病毒 2型 (HSV2 )。结果 结果 10 0例NGU标本中有 13例HSV2 阳性 ,阳性率为 13 % ,对照组HSV2 均阴性。结论 HSV2 感染与非淋菌性尿道炎发病有一定关系。

壳聚糖碘液体外抗人单纯疱疹病毒2型的作用

目的研究壳聚糖碘液体外对人单纯疱疹病毒2型的作用效果。方法采用非洲绿猴肾细胞(Vero)培养单纯疱疹病毒2型(HSV-2),观察病毒半数感染量(TCID50)和病毒感染后的细胞病变效应(CPE),并通过MTT法测定药物对HSV-2感染细胞的保护率EC50。结果壳聚糖碘液对HSV-2的50%抑制浓度(EC50)为0.025mg/mL,治疗指数(TI50)为24;壳聚糖碘液对HSV-2的90%抑制时间在感染后的2h之前;且壳聚糖碘液和HSV-2预作用的时间越长,HSV-2的滴度越小。结论壳聚糖碘液在体外对人单纯疱疹病毒2型活性具有抑制作用。

单纯疱疹病毒2型泛素化新型DNA疫苗构建

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)早期表达蛋白感染细胞蛋白(ICP)27强制泛素化的DNA疫苗表达质粒。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术从人基因组DNA和HSV-2基因组中分别扩增出泛素全长基因和HSV-2、ICP27 377-459,PCR鉴定后酶切连接获得融合基因片段,插入真核表达质粒pcDNA3．1载体中,构建出重组真核表达质粒Ub-ICP-pcDNA3．1,并对其进行测序鉴定。结果构建的重组质粒Ub-ICP-pcDNA3．1克隆基因插入方向正确,与预期序列完全一致。结论成功构建了HSV-2早期表达蛋白ICP27强制泛素化DNA疫苗。

鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)灭活疫苗制备及其免疫效力测定

鲫造血器官坏死病是由鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)引起的危害我国养殖鲫鱼(Carassius auratus)最严重的病毒性疾病。为制备有效预防鲫造血器官坏死病的灭活疫苗,以CyHV-2代表流行株CNDF-TB2015为疫苗株,以CSC细胞系进行病毒增殖,并采用不同浓度的病毒对不同规格鲫鱼进行攻毒,建立攻毒模型。结果表明,培养的病毒滴度达10^(10)TCID_(50)/mL,以4×10^(7)TCID_(50)/尾的剂量腹腔注射感染体重300 g的鲫鱼可造成100%的死亡率。对病毒灭活剂甲醛、β-丙内酯和BEI灭活条件进行筛选优化,对疫苗免疫佐剂763A、IMS1312、铝胶和M402进行筛选,结果表明,浓度为10^(8.3) TCID_(50)/mL的病毒液最佳灭活条件为终浓度10 mmol/L的BEI 37℃灭活72 h,疫苗制备最佳佐剂为水佐剂IMS1312。对灭活疫苗的最小免疫剂量、最佳免疫剂量和有效免疫产生期进行测定,结果表明,要获得70%以上保护率的最小免疫剂量为8×10^(6)TCID_(50)/尾,最佳免疫剂量为4×10^(7)TCID_(50)/尾,在免疫4周后保护率可达80%,5周后保护率达到100%。制备的灭活疫苗为鲫造血器官坏死病的免疫预防提供了有力手段,也为其他水产动物病毒灭活疫苗的制备提供了借鉴。

务工人员单纯疱疹病毒2型感染状况分析

目的了解浙西地区农村外出务工人员单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染状况及相关危险因素。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测219例外出务工人员和155例健康对照血清中抗HSV-2IgG抗体。结果外出务工人员抗体检出率26.5%,对照组检出率17.4%,两组抗体检出率差异有显著性(P<0.05);按性别、年龄、教育程度、婚姻状况、不洁性行为等感染相关因素作性别分层分析,<25岁女性感染率最高,达41.2%,Logistic回归分析表明,不洁性行为是HSV-2感染的危险因素(P<0.01)。结论外出务工人员HSV-2感染率明显高于对照组,开展针对农村外出务工人员的性病知识健康教育和医疗保健活动势在必行。

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。

人单纯疱疹病毒2型感染致豚鼠输卵管妊娠的研究

目的探讨人单纯疱疹病毒2型感染引起输卵管妊娠的可能性。方法用人单纯疱疹病毒2型感染豚鼠阴道,实时荧光定量PCR技术检测豚鼠子宫颈,子宫内膜,输卵管粘膜细胞中人单纯疱疹病毒2型DNA,原位杂交法检测豚鼠子宫内膜及输卵管粘膜细胞中人单纯疱疹病毒2型DNA,免疫组化法检测子宫内膜和输卵管粘膜细胞人单纯疱疹病毒2型抗原,分别记录数据,计算感染率。结果实时荧光定量PCR法检测豚鼠人单纯疱疹病毒2型DNA,子宫颈阳性率46.67%,子宫内膜阳性率26.67%,输卵管粘膜细胞阳性率10.00%;原位杂交法子宫内膜阳性率23.33%,输卵管粘膜细胞阳性率10.00%;免疫组化法子宫内膜阳性率20.00%,输卵管粘膜细胞阳性率6.67%。结论人单纯疱疹病毒2型可沿豚鼠阴道感染子宫颈,上行感染子宫内膜,进而引起输卵管感染,是导致输卵管妊娠的重要原因之一。

单纯疱疹病毒2型与细菌性阴道病关系的Meta分析

目的：探讨单纯疱疹病毒2型（HSV-2）与细菌性阴道病（BV）发生的相关性。方法：通过检索中国知网、CBM、Medline、Springer Link、Elsevier Science、PubMed、Cochrane Library database等数据库,收集自1990年1月到2014年12月公开发表的关于HSV-2与BV病例对照研究的文献,选择OR值及其95%CI作为Meta分析指标。利用Stata 11.0软件对各研究结果进行异质性检验和效应值合并计算。结果：根据统一的纳入和剔除标准,纳入11篇文献,研究表明HSV-2与BV的发生有明显的关系（Z=18.46,P=0.000）,合并计算的OR值为1.40,OR的95%Cl为1.25~1.54。结论：HSV-2感染是BV发生的一个危险因素。

单纯疱疹病毒2型糖蛋白G的基因扩增、克隆及其B细胞抗原表位分析

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白G-2(gG-2)全长基因并对糖蛋白G-2进行B细胞抗原表位预测.方法:用PCR法扩增HSV-2的gG-2基因,连接到pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α株后测序.利用Lasergene,C lustal X等软件,进行B细胞抗原表位预测.结果:完成单纯疱疹病毒2型(HSV-2)gG-2全长基因克隆.通过B细胞抗原表位分析,发现HSV-1的gG-1和HSV-2的gG-2氨基端的同源性很低.gG-2蛋白在“独特区”存在抗原指数非常强的抗原表位.结论:成功构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)gG-2全长基因克隆,为单纯疱疹病毒感染的诊断试剂的研发及抗单纯疱疹病毒疫苗研究寻找更好的靶位点提供研究材料和参考.

原发性高血压与单纯疱疹病毒2型感染有关

目的:探讨单纯疱疹病毒2型感染与原发性高血压的关系方法 在有1244名住院病人(年龄在35至64岁)参与的对照研究中,488例原发性高血压病人,756例对照,用ELISA方法检测血中特异性单纯疱疹病毒2型IgG抗体,进行两组问比较。本研究分析高血压的危险因素有:年龄,男性,吸烟,糖尿病,血脂紊乱,较少体力劳动,体重指数和单纯疱疹病毒2型IgG抗体阳性:在多因素分析中,应用Logistic回归分析以去除其它危险因素的影响,并计算调整后的比值比(OR值)和95％的可信区间.以表示单纯疱疹病毒2型感染和高血压的关系,及对高血压的危险性。结果 单纯疱疹病毒2型IgG抗体阳性率,高血压组病人明显多于对照组(38.3％ vs.29.8％。P=0.002)。Logistic回归分忻去除其它危险因素的干预,发现单纯疱疹病毒2型IgG抗体阳性与高血压强相关,调整后的OR值为1.413(95.0％CI,1.108 to 1.802;P=0.005),调整变量包括血脂异常、糖尿病、冠心病、男性和吸烟。在单纯疱疹病毒2型IgG抗体阳性病人中,血脂紊乱的病人显著增多(P<0.05)。结论 单纯疱疹病毒2型感染可能是原发性高血压的独立危险因素。