人类疱疹病毒6型和人乳头瘤病毒在宫颈癌患者中的表达及临床检测意义

目的探讨人类疱疹病毒6型(HHV-6)和人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌患者中的表达及临床检测意义。方法选择86例疑似宫颈癌患者,检测其HHV-6与HPV表达情况。以阴道镜病理活检结果为金标准,分析HPV-DNA与HHV-6DNA检测诊断宫颈癌的一致性。比较HPV-DNA与HHV-6 DNA检测对宫颈癌的诊断效能。结果86例疑似宫颈癌患者经阴道镜病理活检确诊71例。κ检验分析结果显示,HPV-DNA、HHV-6 DNA检测诊断宫颈癌与阴道镜病理活检结果存在高度一致性(P<0.05)。HPV-DNA、HHV-6 DNA检测诊断宫颈癌的灵敏度(91.55%vs.88.73%)、特异度(86.67%vs.80.00%)与准确度(90.70%vs.87.21%)比较均无统计学差异(P>0.05)。结论HHV-6与HPV在宫颈癌患者宫颈组织中多呈现阳性表达,对宫颈癌患者行HHV-6与HPV检测可提高疾病筛查准确率。

人疱疹病毒6型儿童脑炎的流行病学特点

人类疱疹病毒6型（HHV-6），是一种普遍存在的人类疱疹病毒，可分为HHV-6A和HHV-6B两亚型，HHV-6B可引起临床上常见的婴幼儿急疹，表现为持续的高热、热退后的皮疹，较HHV-6A感染更为常见。有研究表明，约10％小儿发热疾病和HHV-6感染有关[1]。HHV-6感染还可引起中枢神经系统并发症，包括热性惊厥和急性脑炎或脑病[2]，有着较高的发病率和病死率，应引起临床医生的高度重视。本研究通过对疑似脑炎的474例患儿的脑脊液标本进行HHV-6荧光定量分型的检测，结合相关临床资料，分析HHV-6及其A／B亚型感染与儿童脑炎流行病学特点，现报道如下。

人疱疹病毒6型感染的研究进展

人疱疹病毒6型（HumanHerpesvirus6，HHV-6）是一种嗜人T淋巴细胞的双链DNA病毒，属于疱疹病毒β亚科，1986年首次从艾滋病患者和淋巴增生异常患者的末梢血中的单核细胞分离得到。HHV-6有显著的嗜淋巴细胞性和嗜神经性，儿科诸多疾病与其感染有关，

检测抗人疱疹病毒6型IgG的间接免疫荧光试验的建立及其应用

目的 :建立检测血清中人疱疹病毒 6型 (HHV 6 )IgG的间接免疫荧光试验 (IFA)。方法 :用HHV 6国内分离株感染人脐带血单个核细胞制备抗原片 ,建立检测HHV 6IgG的IFA方法 ,并用于育龄期妇女血清流行病学调查。结果 :建立的IFA具有特异性。对 116份育龄期妇女血清标本检测表明 ,HHV 6IgG的阳性率为 72 .4 % ,几何平均滴度 (GMT)为 1∶6 1;在孕妇和正常未孕妇女之间 ,以及不同孕期的孕妇之间 ,HHV 6IgG的阳性率和GMT均无差异 (P >0 .0 5 )。结论 :建立了具有特异性的IFA法 ,可用于对育龄妇女HHV

人疱疹病毒6型感染与淋巴瘤关系的初步研究

目的:研究人疱疹病毒6型(HHV-6)感染与淋巴瘤的关系。方法:用间接免疫荧光法及PCR,分别检测淋巴瘤患者和对照组患者血清中抗HHV-6 IgG及外周血单个核细胞(PBMC)中HHV-6 DNA序列。用免疫组化染色法,检测淋巴瘤患者淋巴结组织标本中HHV-6抗原。结果:淋巴瘤患者血清抗HHV-6抗体的阳性率为95.5％,几何平均滴度为1:123,PBMC中HHV-6 DNA的检出率为59.1％,均明显高于对照组(P<0.05)。免疫组化染色检测的5例淋巴瘤患者淋巴结组织标本中,4例HHV-6抗原阳性。结论:HHV-6感染可能与淋巴瘤的发病有关。

人疱疹病毒6型感染与神经胶质瘤关系的初步研究

目的:研究人疱疹病毒6型(human herpesvirus-6,HHV-6)感染与神经胶质瘤的关系。方法:巢式PCR法检测40例神经胶质瘤样本和13例正常脑组织样本中HHV-6、人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)、HHV-7 DNA序列。免疫组化染色法检测神经胶质瘤样本和正常脑组织样本中HHV-6、HCMV、HHV-7抗原的表达。结果:巢式PCR法检测结果显示,神经胶质瘤组织HHV-6 DNA阳性率为42.5%,正常脑组织HHV-6 DNA阳性率为7.7%(P=0.020),神经胶质瘤组织HCMV、HHV-7DNA阳性率分别为20.0%和5.0%,正常脑组织未检测到HCMV和HHV-7 DNA(P值分别为0.087和0.566)。进一步用免疫组化染色法检测HHV-6早期抗原p41的表达,神经胶质瘤组织阳性率为27.5%,正常脑组织未见阳性表达(P=0.030)。同时检测HHV-6晚期抗原gp116/64/54的表达,神经胶质瘤组织阳性率为32.5%,正常脑组织未见阳性表达(P=0.014)。用HCMV pp65抗体进行免疫组化染色后发现其在神经胶质瘤中阳性率为12.5%,正常脑组织未见阳性表达(P=0.229)。HHV-7 pp85抗原在神经胶质瘤样本和正常脑组织样本中均未检出阳性表达。结论:根据PCR和免疫组化的检测结果,HHV-6感染在神经胶质瘤和正常脑组织中具有显著性差异,HHV-6感染在神经胶质瘤的病因和发展过程中起了一定作用。

西安市人疱疹病毒6型血清流行病学调查

目的了解西安市区不同人群人疱疹病毒6型(HHV-6)的感染和免疫水平状况。方法采用间接免疫荧光试验方法检测儿童、成人和育龄妇女血清HHV-6IgG抗体。结果6个月～2岁幼儿的HHV-6抗体阳性率和几何平均滴度(GMT)分别为92.9%和1:152,高于其它年龄段的儿童和成人(P<0.05)。116份育龄妇女血清HHV-6抗体阳性率为72.4%,GMT为1:61;在孕妇和正常妇女之间,以及不同孕期的孕妇之间,HHV-6IgG抗体的阳性率和GMT均无差异(P>0.05)。结论HHV-6在不同人群中均有较高的感染率;HHV-6感染多可能发生在婴幼儿期,以水平传播为主;妇女妊娠期间无HHV-6的活化。

抗人类疱疹病毒6型南京分离株E5单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定人疱疹病毒6型(HHV-6)单克隆抗体。方法:用纯化的HHV-6南京分离株E5免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选,间接免疫荧光法、免疫印迹实验等方法鉴定单抗。并采用套式PCR法和ELISA法,在口腔癌中进行了初步的应用。结果:获得了一株分泌抗HHV-6单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为JA9。单克隆抗体亚类鉴定表明:其为IgG1亚类,轻链为κ。用间接ELISA法检测细胞上清单抗效价为1∶500;单抗腹水滴度为1∶8.0×104。免疫印迹实验结果表明:JA9单抗腹水与约75kuHHV-6E5病毒蛋白结合。口腔癌患者唾液的HHV-6阳性检测率结果分别是:套式PCR法60%,ELISA法40%。结论:成功制备并鉴定一株抗HHV-6南京分离株E5单克隆抗体,为HHV-6进一步的基础研究及临床快速诊断提供可能。

人类疱疹病毒6型及人乳头瘤病毒16型感染与宫颈癌发生、发展关系的研究

目的 :研究人类疱疹病毒 6型 (hHV 6 )及人乳头瘤病毒 16型 (hPV 16 )感染与宫颈癌发生、发展的关系。方法 :应用巢式多聚酶链反应 (nested PCR)检测hHV 6及多聚酶链反应 (PCR)检测hPV 16在 16份正常宫颈、2 0份宫颈炎症、6份宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)Ⅰ～Ⅱ级及 34份宫颈癌组织中的感染情况。结果 :宫颈癌组织中hHV 6DNA阳性率为 6 1.76 % (2 1/34) ,明显高于正常组、炎症组及CINⅠ～Ⅱ级组 (P <0 .0 1)。宫颈癌组织中hPV 16DNA阳性率为 76 .4 7% (2 6 /34) ,明显高于正常组的 12 .5 0 %和炎症组的15 .0 0 % (P <0 .0 1)。 2 1份hHV 6DNA阳性组织中的hPV 16DNA也全部阳性 ,二者在宫颈癌组织中呈高度一致性。随着宫颈癌临床期别的增加 ,hHV 6和hPV 16DNA阳性率均呈递减趋势 ,但差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论 :hHV 6感染与宫颈癌的发生密切相关 ,可能是宫颈癌的致病因子 ,作为“促进子”(promoter)与hPV 16协同促使宫颈癌进展。

人疱疹病毒6型感染与白血病关系的初步研究

白血病是来源于造血系统的一种恶性肿瘤, 好发于儿童和青少年, 其病因和发病机制尚不完全清楚, 但病毒病因学较受重视.人疱疹病毒6型(HHV-6)是1986年发现的疱疹病毒科中的一个新成员[1].研究发现, HHV-6的感染与淋巴瘤的发生有一定关系[2,3], 在白血病患者中具有较高的感染率[4].为了探讨HHV-6感染与白血病的关系, 我们采用间接免疫荧光试验(IFA )和PCR, 分别检测了白血病患者血清抗HHV-6 IgG和外周血单个核细胞(PBMC)中HHV-6 DNA的序列.

人类疱疹病毒6型感染U251细胞及其生物学功能的研究

目的:研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染人星形胶质瘤细胞U251,及感染后对其生物学功能的影响。方法:HHV-6感染U251细胞建立HHV-6体外感染模型,倒置显微镜观察细胞病变。PCR法检测HHV-6u22基因。间接免疫荧光(IFA)检测HHV-6即刻早期蛋白(IE1)和晚期蛋白(gB)的表达。MTT法检测U251感染HHV-6后细胞增殖的改变。流式细胞术(FCM)检测U251细胞周期改变。结果:在感染3天后U251出现典型细胞病变,细胞肿胀增大数倍,透亮,呈多形性。PCR检测到HHV-6u22基因。IFA检测到HHV-6IE1蛋白和gB蛋白的表达。MTT法显示HHV-6能增强U251细胞的增殖能力。FCM检测表明,HHV-6感染后U251细胞周期发生改变,感染组和对照组相比,前者G1期的细胞减少,S期和G2期细胞增多。结论:HHV-6能感染U251细胞引起细胞病变,促进细胞的增殖,使细胞周期发生改变。本研究结果提示人类疱疹病毒6型可能参与人神经胶质瘤的发生、发展,对其机制尚不清楚。

人类疱疹病毒6型U94基因克隆、表达、纯化及抗体制备

目的:制备人类疱疹病毒6型U94蛋白及其抗体。方法:PCR扩增U94基因,经测序后克隆到原核表达载体PGEX- 6p-1中。重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导蛋白表达。应用酶切鉴定、SDS-PAGE及Western blot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。表达的蛋白经亲和层析纯化,纯化的蛋白免疫动物制备抗血清。结果:成功地获得了高纯度的U94融合蛋白,纯度可达90%以上。用其制备多克隆抗体滴度可达1:100 000。结论:获得高纯度的U9d融合蛋白及其高效价的抗体。

首次热性惊厥与人疱疹病毒6型感染的关系

目的探讨首次热性惊厥与人疱疹病毒6型(HHV-6)感染的关系及其临床特征。方法采用PCR技术对75名首次发生热性惊厥的患儿进行HHV-6检测,并对比患儿HHV-6感染与否的临床特征。结果75名首次热性惊厥患儿中有26人感染HHV-6,感染HHV-6患儿的平均年龄明显低于未感染者(P<0.01)。首次热性惊厥合并HHV-6感染患儿丛集性发作、持续性发作、部分性发作、和发作后麻痹出现的频率明显高于未感染者(P<0.05)。小于1岁的感染HHV-6的首次热性惊厥患儿非典型发作出现的频率明显高于同年龄组的未感染患儿(P<0.05)。结论HHV-6感染与婴幼儿首次热性惊厥发作密切相关,可导致更严重惊厥形式的产生,并可能是继发性癫痫发生的一个危险因素。

药疹病人EB病毒和人疱疹病毒6型感染检测

目的探讨EB病毒(EBV)和人疱疹病毒6型(HHV6)感染在药疹发生中的作用。方法采用PCR-Southern blotting检测药疹病人和正常对照组外周血单个核细胞中EBV DNA;采用巢式聚合酶链反应检测HHV6 DNA,并对HHV6阳性标本进行酶切分型;采用ELISA法检测EBV VCA-IgM;采用RT-PCR-Southernblotting检测EBV即刻早期基因BZLF1 mRNA。结果药疹病人EBV DNA阳性率(77.42%,24/31)明显高于正常对照组(χ2=77.84,P<0.01),但HHV6阳性率(32.26%,10/31)与正常对照组比较差异无显著性(χ2=3.00,P>0.05)。10例HHV6阳性药疹病人全部为HHV6A亚型,未检测到HHV6B亚型;而正常对照组73例HHV6阳性标本中有13例为HHV6A亚型。药疹病人EBV VCA-IgM阳性率(19.34%,6/31)与正常对照组比较差异具有显著意义(χ2=4.61,P<0.05)。10例HHV6阳性药疹病人中有9例检出EBV DNA,5例BZLF1 mRNA阳性病人中有4例检出HHV6 DNA,药疹病人BZLF1 mRNA检出率与HHV6有明显的相关性(r=0.45,P<0.05)。结论药疹病人存在EBV的活动性感染,且EBV和HHV6可能有相互激活作用。

淋系白血病中人类疱疹病毒6型的感染情况

目的 :了解淋巴系统白血病患者人类疱疹病毒 - 6型 (HHV - 6)的感染情况。方法 :患者 38例 ,包括急性淋巴细胞白血病 (ALL) 31例、慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 4例、淋巴瘤白血病 (LL) 3例 ,正常对照 38例。取抗凝外周血 ,分离单个核细胞 ,提取DNA ,用巢式PCR方法检测目标DNA。结果 :HHV - 6DNA阳性检出率在全部患者中为 63% ,其中在ALL患者中为 68% ,均明显低于正常对照的阳性检出率 92 % (P <0 .0 5 ) ,另外 ,4例CLL患者有 1例阳性 ,3例LL患者中 2例阳性。结论 :在淋巴系统恶性疾病中HHV - 6的感染率低于正常人群 ,其临床意义有待进一步研究。

口腔鳞癌患者淋巴细胞对人疱疹病毒6型增殖应答受损

目的研究口腔鳞癌患者淋巴细胞对人疱疹病毒6型(HHV-6)特异性增殖应答,初步探讨HHV-6在口腔鳞癌发病机制中的作用。方法间接免疫荧光法(IIF)检测血浆中抗HHV-6IgG;免疫微磁珠分离CD4+T及CD8+T细胞;3H-TdR法检测CD4+T和CD8+T细胞及PBMCs的增殖水平;FACS分析CD4+C25+调节性T细胞(Treg)的比例。结果口腔鳞癌组血浆中抗HHV-6IgG阳性数为8/8,正常对照组为12例(12/20);口腔鳞癌组PBMCs及CD4+T细胞对HHV-6的增殖水平显著低于HHV-6潜伏感染组与未感染组(P<0.05);HHV-6潜伏感染组PBMCs及CD4+T细胞对HHV-6的增殖水平显著低于未感染组(P<0.05);口腔鳞癌组外周血中CD4+C25+Treg比例明显高于HHV-6潜伏感染组与未感染组(P<0.05)。结论口腔鳞癌患者的HHV-6特异性CD4+T细胞增殖应答减弱,可能在口腔鳞癌的发生发展中起一定作用。

人疱疹病毒6型不单是幼儿急疹的病原

人类疱疹病毒6型(human herpes virus 6,HHV-6)具有典型的疱疹病毒形态,但免疫学和分子病毒学研究显示它与HSV、VZV、CMV和EBOV均不相同.其感染广泛存在于婴幼儿、免疫缺陷患者中,也可发生在健康成人,与幼儿急疹、肺炎、脑炎、肝炎等多种疾病有关.

人疱疹病毒6型特异性CD4^+ T细胞的初步克隆

目的克隆人疱疹病毒6型(HHV-6)特异性CD4+ T细胞,并分析其基本特征。方法采用微孔有限稀释法克隆HHV-6特异性CD4+ T细胞;3H-TdR掺入法细胞增殖试验筛选HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆;流式细胞仪(FACS)分析HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆的表面标志,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆的细胞因子分泌水平。结果获得的细胞克隆中有4株以HHV-6感染细胞裂解物特异的方式增殖,并且其增殖水平与HHV-6感染细胞裂解物呈剂量依赖性;细胞克隆表面标志为CD3+CD4+;W-2和W-4细胞克隆的细胞因子分泌以白细胞介素10(IL-10)为主,W-1细胞克隆的细胞因子分泌以IL-10及γ干扰素(IFN-γ)为主,W-3细胞克隆的细胞因子分泌以IFN-γ为主。结论初步建立HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆,并分析其表面标志和细胞因子分泌水平,为HHV-6特异性Treg细胞的克隆、筛选及其功能的研究奠定基础。

口腔鳞状细胞癌与人类疱疹病毒6型感染的相关性研究

目的:研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染与口腔鳞癌的相关性。方法:用PCR和间接免疫荧光方法分别检测口腔鳞癌患者和健康志愿者唾液HHV-6DNA和血清抗HHV-6IgG抗体。免疫组化法检测口腔鳞癌组织及癌旁组织标本中HHV-6糖蛋白B(glycoprotein B,gB)抗原。结果:118份口腔鳞癌唾液标本中PCR阳性率为65.3%,高于正常人群的40%(P<0.05)。HHV-6感染与患者病历资料无显著相关性。18份口腔鳞癌患者和20份健康人血清中HHV-6IgG抗体的几何平均滴度分别为1∶102.17和1∶101.50(P<0.05)。免疫组化法检测,11例口腔鳞癌标本中6例出现的阳性结果,胞质内出现弥散性的黄色颗粒,在癌巢内特异性浓集,而间质为阴性。8例相应癌旁组织中3例出现阳性染色结果,但阳性强度较癌组织弱且弥散。1例gB组化阳性肿瘤组织细胞经分离后接种裸鼠,移植瘤组织也检测到HHV-6抗原。结论:本研究说明HHV-6与口腔鳞癌的发生存在相关性,但不与患者临床资料分布相关。本研究亦提示荷瘤裸鼠作为HHV-6动物模型的可能性。