艾灸镇痛下丘脑疼痛相关信号分子的PCR Array筛选研究

目的:明确下丘脑疼痛相关信号分子在艾灸镇痛作用中的表达情况,筛选与艾灸镇痛相关的分子靶点,为揭示艾灸镇痛原理提供新的实验依据。方法:选取健康、雄性C57BL/6J小鼠,随机分为空白组、模型组、模灸组。皮下注射20μL弗氏完全佐剂(Freund’s Complete Adjuvant,CFA)于小鼠右后足底,建立形成炎症疼痛实验小鼠模型。CFA足底注射后第4 d,给予“足三里”穴温和灸干预1次,持续时间为30 min。选取热刺激-缩腿潜伏期(Thermal-Withdraw Latency,TWL)作为判定疼痛指标,测定造模前、造模后、艾灸前、艾灸后即刻、30 min、60 min、90 min以及120 min痛阈值。运用PCR Array高通量分子筛选技术,筛选显著差异表达的下丘脑疼痛相关信号分子;用实时荧光定量PCR技术对差异表达基因进行重复验证。结果:(1)模型组、模灸组TWL较空白组均下降明显(P<0.01);模灸组在艾灸结束即刻、艾灸后30 min、60 min、90 min、120 min的痛阈较模型组均显著上升(P<0.01),艾灸后0 min即刻即出现痛阈上升,艾灸后60 min痛阈开始下降。(2)模型组7个疼痛相关基因差异表达显著,其中CCL12、CCR2、IL-1α、TAC1显著上调;NTRK1、SCN10a、SLC6a2显著下调;模灸组13个疼痛相关基因显著下调,即CCL12、CCR2、IL-1α、IL-1β、IL6、CX3CR1、CD4、EDNRA、TLR4、PTGS2、SCN10a、CNR1、TRPa1。模型组上调疼痛信号相关分子CCL12、CCR2、IL-1α,艾灸后下调。结论:艾灸“足三里”对小鼠炎性疼痛有显著镇痛效应;下丘脑内可能有多种潜在的疼痛相关信号分子参与艾灸镇痛,CCL12、CCR2、IL-1α等可能是参与艾灸镇痛新的关键分子靶点。