透明质酸酶增强5-FU对结肠癌抗癌作用的动物实验研究

目的:观察透明质酸酶(Hyaluronidase,Hyase)在氟尿嘧啶(5-FU)对裸小鼠结肠癌移植瘤生长影响中的作用,并探讨其作用的可能机制。方法:18只雄性裸小鼠左侧腹壁皮下移植三维培养人结肠癌HT-29细胞,随机分为6组,每组3只:Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组[Hyase200U/(kg.d)]、Ⅲ组[5-FU30mg/(kg.d)]、Ⅳ组[Hyase50U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)]、Ⅴ组[Hyase100U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)]和Ⅵ组[Hyase200U/(kg.d)+5-FU30mg/(kg.d)],Hyase于肿瘤细胞移植处第1、5天皮下注射,5-FU于第1～5天右侧腹腔注射。每周以游标卡尺测定瘤体最长径和最短径,计算肿瘤体积和抑瘤率,第6周杀鼠称瘤重,取瘤组织行HE染色,Westernblotting法检测瘤组织中E-钙黏素(E-cadherin)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和NF-κBp65蛋白的表达并对蛋白条带的光密度(OD)进行半定量分析。结果:裸小鼠均成功移植皮下肿瘤,与对照组(Ⅰ组)比较,单纯Hyase治疗组(Ⅱ组)肿瘤体积减小不明显(P>0.05),单纯5-FU治疗组(Ⅲ组)自第3周开始肿瘤体积明显减小(P<0.05),而不同剂量Hyase联合5-FU治疗组(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组)瘤体积减小更明显(P<0.05);与单纯5-FU治疗组(Ⅲ组)比较,第3周开始联合治疗组(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组)瘤体积明显减小(P<0.05);第6周Ⅱ～Ⅵ组抑瘤率分别为6.8%、17.5%、34.1%、46.3%和56.6%;Ⅲ～Ⅵ组瘤重均低于Ⅰ组(P<0.05或P<0.01);Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤组织内E-cadherin和ICAM-1蛋白条带OD值均较Ⅰ组有不同程度减低,而NF-κBp65蛋白条带OD值在各组间无明显变化(P>0.05)。结论:透明质酸酶可能通过抗细胞黏附在结肠癌化疗中具有增敏作用。

透明质酸酶联合C_2F_6诱导兔眼玻璃体后脱离的实验研究

目的 :研究透明质酸酶联合 C2 F6玻璃体腔注药诱导兔眼玻璃体后脱离 (PVD)的效果及安全性。方法 :15只兔 (30只眼 )随机分 A、B、C 3组 ,每组 5只 ,每兔一眼为实验眼 ,另一眼为对照眼。A、B两组实验眼玻璃体腔注射 30 IU透明质酸酶 ,C组实验眼玻璃体腔注入 0 .1ml BSS溶液 ,注射后第 7d A组和 C组加注 C2 F60 .5 ml,对照眼均注射 0 .1ml BSS溶液。注射后前 10 d每天行临床裂隙灯、前置镜、检眼镜及 B超和暗适应视网膜电图 (ERG)检查 ,以后除每天常规临床检查外 ,每周复查 B超及 ERG,共观察 8周。处死后眼球标本送光镜和扫描、透射电镜检查。结果 :A组 5只实验眼完全性玻璃体后脱离 ,B组 3只实验眼不完全性玻璃体后脱离 ,C组实验眼和 3组对照眼均无玻璃体后脱离发生。 A、B、C组实验眼注药前后及与对照眼相比较 ,视网膜电图 a、b波振幅和潜伏期均无显著改变 (P>0 .0 5 )。光镜、电镜检查未发现视网膜组织有毒性改变。结论 :动物实验中临床观察结合 B超、扫描电镜有助于准确判断玻璃体后脱离与否。透明质酸酶联合 C2 F6玻璃体腔注药可诱导兔眼完全性玻璃体后脱离的发生 。

术尔泰液及透明质酸酶预防术后肠粘连的实验研究

目的:探讨术尔泰液及透明质酸酶联合应用预防术后肠粘连的效果。方法:将60只大白兔随机分为4组,对照组(A组);术尔泰液组(B组);透明质酸酶组(C组);术尔泰液+透明质酸酶组(D组)。每组15只,均制成腹腔粘连动物模型,于术后14d均再次剖腹观察有无肠粘连及其程度。结果:A组粘连最重,其次为B、C组,D组粘连最轻。A组与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.05);A组与D组比较差异有统计学意义(P<0.01);D组与B、C组比较差异有意义统计学意义(P<0.05)。结论:术尔泰液与透明质酸酶均有预防术后肠粘连的作用,两者合用可产生协同作用。

纤维蛋白溶解酶联合透明质酸酶诱发玻璃体后脱离实验研究

目的 研究纤维蛋白溶解酶 (简称纤溶酶 )联合透明质酸酶诱发玻璃体后脱离 (PVD)。方法 16只兔随机分为A、B、C三组各 8、4、4只 ,均右眼为实验眼 ,左眼对照。A组实验眼玻璃体腔内注射纤溶酶 1U和透明质酸酶 2 0U ,B组纤溶酶 1U ,C组透明质酸酶 2 0U ,对照眼均注射BSS液。术后 7天内行B超、ERG、扫描及透射电镜等检查。结果 扫描电镜确诊A组实验眼完全性PVD 10 0 %,B组实验眼部分性PVD 75 %,C组实验眼及对照眼无PVD。实验及对照眼ERG振幅无明显下降 (P >0 0 5 ) ,透射电镜等检查无眼内毒性。结论 纤溶酶 1U联合透明质酸酶 2 0U兔玻璃体腔内注射能诱导出完全性PVD ,且无眼内毒性。

尿道外口皮下注射透明质酸建立大鼠膀胱出口梗阻模型及效果评价

目的通过尿道外口皮下注射透明质酸的方法建立一种简单微创、重复性好的大鼠膀胱出口梗阻(BOO)动物模型,并与传统开放手术BOO动物模型进行比较,评估其梗阻效果及并发症情况。方法共40只成年雌性SD大鼠进行试验,随机分为3组,即尿道外口透明质酸注射组(简称注射组)、开放手术近端尿道结扎组(简称手术组)和对照组。注射组(n=15)采用0.2mL透明质酸在尿道外口皮下周围注射的方法建立模型;手术组(n=15)利用传统开放性近端尿道结扎的方法建立模型;另10只正常大鼠作为对照。4周后检测各组充盈性膀胱测压检测梗阻效果、术后并发症、膀胱重量、以及HE染色检测膀胱组织学改变。结果注射组较手术组的模型操作时间显著缩短(P<0.05),无切口感染和膀胱结石等并发症;充盈性膀胱测压结果提示:与对照组相比,注射组和手术组均检测到膀胱容量、排尿频率和残余尿量增加及储尿末期逼尿肌不稳定收缩的典型膀胱出口梗阻的尿动力学表现;注射组和手术组膀胱重量明显增加(P<0.05),HE染色可见梗阻后膀胱黏膜下及间质明显水肿、肌层厚度均显著高于对照组(P<0.05)。结论大鼠尿道外口透明质酸注射简单微创、并发症少、效果明确、可重复性好,是一种有效的膀胱出口梗阻动物模型。

透明质酸酶的研究进展

透明质酸酶是以降解透明质酸为主的糖苷酶。近年来国内外关于透明质酸酶各方面的研究日益增多,透明质酸酶的构效关系及生物学应用越来越引起人们的关注。对透明质酸酶的相关研究进行了综述,主要阐述了各类型透明质酸酶的研究概况包括人透明质酸酶、牛睾丸透明质酸酶、毒液透明质酸酶、微生物透明质酸酶。简要介绍了透明质酸酶的活性测定、酶活抑制剂及透明质酸酶制剂的应用情况,最后对透明质酸酶的研究前景进行展望。

NADPH氧化酶4在1型糖尿病模型小鼠角膜病变中的致病作用及其机制

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(Nox4)在1型DM模型小鼠角膜病变中的致病作用及其可能机制。方法选择Nox4基因敲除(Nox4^(-/-))纯合子雄性小鼠40只,以鼠龄、性别匹配的野生型C57BL/6(Nox4^(+/+))小鼠120只作为对照。采用随机数字表法分别将2种小鼠随机分为DM组和非DM组,DM组小鼠采用链脲佐菌素腹腔内注射法构建1型DM模型。采用随机数字表法分别将Nox4^(+/+)小鼠DM组和非DM组分为普通饲料喂养小鼠和添加Nox4抑制剂GKT137831(GKT)饲料喂养小鼠。于DM造模后第16周采用酚红棉线法检测各组小鼠泪液分泌量;采用荧光素钠染色评分法评估角膜上皮完整性;采用激光扫描共聚焦显微镜观察角膜基质层神经纤维密度变化;采用CellROX荧光探针检测角膜上皮中活性氧簇(ROS)含量;采用免疫荧光染色法检测小鼠角膜上皮中E-Cadherin蛋白和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达变化;采用角膜铺片TUBB3染色法检测角膜中央区神经纤维密度。结果Nox4^(+/+)小鼠DM组和非DM组泪液分泌量分别为(2.40±1.18)和(5.30±1.02)mm/min,差异有统计学意义(P<0.01);Nox4^(-/-)小鼠DM组泪液分泌量为(4.19±0.63)mm/min,明显多于Nox4^(+/+)小鼠DM组,差异有统计学意义(P<0.05);普通饲料喂养小鼠与GKT添加饲料喂养小鼠DM组泪液分泌量分别为(2.23±0.83)和(4.02±0.71)mm/min,差异有统计学意义(P<0.01)。与Nox4^(+/+)小鼠非DM组比较,Nox4^(+/+)小鼠DM组角膜荧光素染色评分显著升高,角膜神经纤维密度显著降低,角膜上皮中ROS荧光强度明显增强,E-Cadherin蛋白表达荧光强度减弱,NF-κB蛋白表达荧光强度增强。Nox4^(-/-)或GKT添加饲料喂养小鼠DM组与非DM组比较角膜上皮中ROS荧光增强,E-Cadherin蛋白表达荧光减弱。Nox4^(-/-)和GKT添加饲料喂养小鼠DM组角膜上皮细胞中NF-κB蛋白荧光强度均较弱,与非DM组强度一致。角膜铺片免疫荧光染色显示,Nox4^(+/+)小鼠DM组中TUBB3染色的神经纤维密度明显低于非DM组,Nox4^(-/-)或GKT添加饲料喂养小鼠DM组角膜基质层神经纤维与非DM组比较无明显减少。结论Nox4参与了糖尿病角膜病变的致病过程,其机制可能与氧化应激诱导ROS产物聚集,激活NF-κB介导的炎症反应有关。

白癜风模型动物酪氨酸酶含量及血液流变性改变

目的 :研究化学脱色法复制白癜风模型动物血液中酪氨酸酶含量及血液流变性指标的变化。方法 :用 5%过氧化氢涂布于豚鼠的黑毛区 ,每日 2次 ,连续 50d ,腹主动脉取血 ,用分光光度计测酪氨酸酶含量和用LIANG 10 0型血液比粘度计测血液流变性指标。结果 :模型动物血中酪氨酶含量减少 ,血液流变性指标明显升高。结论

透明质酸酶在眼科应用的研究进展

透明质酸酶结构复杂,功能特殊,具有多种生物学活性。作为透明质酸的专一性水解酶在医学和生物学领域有广泛的研究和应用。近年来透明质酸酶在眼科手术局部麻醉,白内障及其并发症、青光眼、玻璃体视网膜疾病等方面的基础研究和临床应用报道很多,并有部分涉及甲状腺相关眼病等疾病的治疗应用情况。现将透明质酸酶基本性质及其在眼科应用的进展作一综述。

大鼠血透明质酸检测原位肝移植模型急性排斥反应

透明质酸是一种大分子线性多聚糖,血中透明质酸水平能够较准确反应肝内皮细胞的功能状态,进而反应肝损害程度。在肝移植术后,由于肝内皮细胞是主要组织相容性抗原的主要表达细胞,这些抗原在肝细胞几乎不能表达,肝内皮细胞是免疫排斥反应的首要靶细胞测定血中透明质酸水平可较早反应移植肝的功能状态,便于临床观察肝移植术后排斥反应水平。 1 材料和方法 1.1 材料用(?) SD封闭群大鼠(购自301医院医学实验动物中心)进行预实验,通过对Miyata法的改进,熟练掌握三袖套法原位肝移植的手术技术,达到1wk存活率>90％后开始正式实验。正式实验受体用(?) SD大鼠,供体为(?) Wistar大鼠,将其随机分到下列4组中。A组:正常对照组,SD,不施行肝移植术,B组:同基因大鼠原位肝移植,(SD-SD),C组:异基因大鼠原位肝移植(Wistar-SD),D组:异基因大鼠原位肝移植+环孢酶素A(CsA)术后1d开始im 15mg/d。术后3。

补阴方对阴虚模型小鼠皮肤中透明质酸含量的作用

目的 :观察补阴方药对阴虚模型小鼠皮肤中透明质酸含量和皮肤含水百分率的作用。方法 :用温燥中药制备阴虚模型并以补阴中药治疗 ,检测各组小鼠皮肤中透明质酸含量和皮肤含水百分率。结果 :阴虚模型小鼠皮肤中透明质酸含量、皮肤含水百分率明显低于正常对照组。在经补阴方药治疗后 ,皮肤中透明质酸含量和皮肤含水百分率回升到正常范围。结论 :补阴方药可以促进皮肤中透明质酸形成。

透明质酸酶和C3F8诱导兔眼玻璃体后脱离的实验研究

目的研究透明质酸酶联合C3F8玻璃体腔注药诱导兔眼玻璃体后脱离(PVD)的效果及安全性。方法12只兔(24只眼)随机分A、B、C3组,每组4只,每兔一眼为实验眼,另一眼为对照眼。A组实验眼玻璃体腔注射0.2ml(10U)透明质酸酶,B组为0.2mlC3F8,C组为0.1ml(10U)透明质酸酶+0.1mlC3F8,对照眼玻璃体腔注入0.2mlBSS溶液。注射后常规裂隙灯、直接眼底镜及眼部B超检查。在2周后处死动物,眼球标本送光镜、扫描电镜和透射电镜检查。结果C组4只实验眼在术后2周时B超有完全性玻璃体后脱离表现,扫描电镜也表现为较光滑的后极部视网膜表面;A组、B组及对照组眼B超检查无玻璃体后脱离表现,扫描电镜示视网膜表面较多纤维状附着物。各实验组及对照组光镜及透射电镜检查未发现视网膜组织有毒性改变。结论10IU透明质酸酶联合0.1mlC3F8玻璃体腔注药2周后可诱导兔眼完全性玻璃体后脱离的发生,且形态学上无视网膜毒性表现。

透明质酸酶诱导兔颞下颌关节骨关节病的实验研究

目的：建立兔颞下颌关节骨关节病动物模型。方法：将不同浓度透明质酸酶（ＨＤ）一次性注入两组兔颞下颌关节下腔内，分别于注射后２４ｈ，１、４、８、１２周后处死动物，对颞下颌关节标本进行组织学观察。结果：注射ＨＤ４周后出现关节表面软骨破坏，关节盘胶原纤维暴露，滑膜慢性炎症等骨关节病表现。结论：本实验研究建立的颞下颌关节骨关节病模型可用于颞下颌关节骨关节病早。

透明质酸酶治疗放射状角膜切开术切口瘢痕

用透明质酸酶治疗放射状角膜切开术后切口瘢痕愈合８３只眼，通过对治疗前后的视力、角膜切口瘢痕、屈光度及角膜屈光力等进行疗效观察，结果发现：透明质酸酶能促进切口瘢痕吸收及重建，减低该处角膜表面张力，改善光线在瘢痕区域内的折射及散射，增加视觉清晰度，提高视力。对治疗前后视力比较分析Ｐ＜０．０１。用０．２５％氯霉素眼药水治疗另一组８３只眼作为对照，观察方法相同，治疗前后视力改善不明显（Ｐ≥０．０５）。两组的屈光度和角膜屈光力均无明显改变（Ｐ＞０．０５）。

口服透明质酸对小鼠佐剂性关节炎的作用

目的:探讨口服透明质酸(HA)对小鼠佐剂性关节炎(AA)的治疗作用。方法:将40只6周龄的雄性小鼠随机分成4个小组,正常组、模型组、HA组和双氯芬酸钠组。通过给模型组、HA组和双氯芬酸钠组小鼠右后足注射弗氏完全佐剂(FCA)建立佐剂性关节炎模型,经连续4周口服透明质酸进行治疗后,分别对小鼠的体质量、足跖厚度进行测量,观察小鼠膝关节肿胀程度并评分,同时采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血清中白介素-1(IL-1)和HA的含量。结果:口服HA能显著降低小鼠足跖厚度和关节炎指数,同时血清中IL-1和HA含量亦显著降低;并且各项指标与双氯芬酸钠无显著性差异。结论:口服透明质酸能有效地缓解小鼠膝关节的肿胀,降低血清中IL-1的含量,增强活动能力,因而对小鼠佐剂性关节炎具有良好的治疗作用。

医用自交联透明质酸钠凝胶预防兔硬膜外粘连的安全性研究

目的利用体感诱发电位及运动功能评分,评价医用自交联透明质酸钠凝胶预防椎板切除术后硬膜外粘连的安全性。方法将L5全椎板切除的新西兰兔24只随机分为4组,A组为对照组:术区生理盐水冲洗后关闭切口;B组、C组、D组均为实验组:均在术区硬脊膜暴露区覆盖医用自交联透明质酸钠凝胶,而覆盖剂量各不相同,分别为0.5、0.75和1.0ml。分别于麻醉后,椎板切除术后,闭合手术切口之后,术后8周这4个时间点进行体感诱发电位监测并记录潜伏期值。并分别于术前,术后1d,术后8周对各组动物进行后肢运动功能评分。结果麻醉后和椎板切除术后各组潜伏期值无统计学差异(P>0.05)。在关闭切口后测定各组的潜伏期值显示:A组和B组潜伏期值均无延迟(P>0.05),C组和D组潜伏期值出现明显延迟(P<0.05)。在术后8周复测各组潜伏期值,均处于正常范围(P>0.05)。运动功能评分结果:术前所有动物评分均正常。在术后1d,A组和B组动物的评分仍然正常,C组和D组的动物评分下降。在术后8周,各组动物的运动功能评分均再次正常。结论体感诱发电位是测定脊髓损伤的敏感指标;椎板切除术后局部覆盖预防粘连剂有剂量的要求,0.5ml的医用自交联透明质酸钠凝胶不会对该动物模型的脊髓的电生理功能及后肢运动功能产生影响。

膝关节液透明质酸含量与滑膜炎程度的关系

目的探讨膝关节液透明质酸含量与滑膜炎程度之间的关系。方法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测膝关节疾病(OA)患者102例共104膝的关节液透明质酸含量,并在关节镜下应用Ayral滑膜炎评分法和Outerbridge关节软骨损伤评分法评价膝滑膜炎和关节软骨损伤程度。采用t'检验、Spearman相关分析和多元线性回归分析进行统计分析。结果Ayral滑膜炎评分≥60分组的关节液透明质酸含量比Ayral滑膜炎评分<60分组高(P<0.001)。104膝关节液透明质酸含量与Ayral滑膜炎评分呈正相关(茁'A=0.497,P<0.001),与Outerbridge软骨损伤累计评分呈负相关(茁'o=-0.364,P<0.001),且Ayral滑膜炎评分的影响较大。关节液透明质酸含量与Ayral滑膜炎评分在Ayral滑膜炎评分≥60分组呈正相关(r=0.306,P<0.05),在Ayral滑膜炎评分<60分组无相关性(r=-0.144,P>0.05)。与非OA组相比,OA组的关节液透明质酸含量较低(P<0.05),而Ayral滑膜炎评分较高(P<0.01)。结论膝关节液透明质酸可作为生物标记物反映滑膜炎的程度,关节液透明质酸含量的增高提示滑膜炎较重。

透明质酸提取方法进展

通过对近50年来透明质酸提取方法的评价,基本阐明了透明质酸的提取方法,即从动物组织生化提取到生化酶工程和利用基因工程技术合成的演变过程,尤其是对从动物组织生化提取,这种较为普及的方法,从原料到提取用药的各个步骤进行了比较,为从事进一步的研究工作提供了基础资料。