适用于RPA-LFD技术检测对虾肝胰腺DNA样品的快速制备试剂研究

为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题,实现真正的现场快速检测,本研究致力于研制和优化一种对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂,即核酸释放剂,适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinasepolymeraseamplication,RPA)与侧向流层析试纸条技术(lateralflow dipstick, LFD)结合的RPA-LFD技术检测。实验优选20~100 mmol/L Tris-HCl、50~250 mmol/L KCl、0.01%~0.10%十二烷基硫酸锂(LDS)、0.5%~2.0%聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、1~5mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EGTA2Na)、0.5~5.0 mmol/L牛血清白蛋白(BSA)、1~5 mg/mL明胶、0.01%~0.10%海藻糖、1%~5%甜菜碱等配制成核酸释放剂。以对虾肝肠孢虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)阳性样本和阴性样本对核酸释放剂各组分间配比进行优化,采集绿豆大小的对虾肝胰腺组织加入100μL核酸释放剂,100℃加热3 min,取上清液进行RPA-LFD反应,测试各组分不同浓度配比;并以对虾急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)阳性样品及阴性样品作为检测模板对优化后核酸释放剂再次验证。结果显示,核酸释放剂的各组分最佳配比为100 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L KCl、0.02%LDS、0.5%Triton X-100、1 mmol/L EGTA2Na、0.05%海藻糖、1 mg/mL明胶、0.5 mmol/L BSA、2%甜菜碱。RPA-LFD方法检测可显著区分阳性和阴性样品。本研究优化的核酸释放剂,适用于RPA-LFD检测对虾肝胰腺病原DNA样品的制备,有效避免了常规DNA样品繁琐、耗时的制备步骤,极大地提高了核酸水平病原检测效率。

快速病原体检测技术在甲型流感病毒检测中的应用

目的探究甲型流感病毒(FluA)抗原检测法、核酸检测法和快速病原体检测技术的临床应用价值。方法收集2016年10月—2019年1月西京医院临床疑似FluA感染患者鼻咽拭子样本,分别采用FluA核酸检测法、抗原检测法进行检测,比较2种检测方法的结果,评价快速呼吸道病原体检测技术的临床应用价值。结果FluA抗原检测法的阳性检出率为9.56%,FluA核酸检测法的阳性检出率为27.29%。每年12月—次年2月为FluA感染暴发季,其抗原筛查阳性率为10.95%,核酸检测阳性率为27.71%;<5岁的婴幼儿、约20岁的青少年以及>90岁的老年人为易感人群;男性与女性比较,FluA核酸检测结果差异无统计学意义(P<0.05)。快速呼吸道病原体检测检出阳性170例,阳性结果207个,其中部分患者为多种呼吸道病原体混合感染。结论抗原和核酸检测均能较好地初步筛查FluA感染,快速病原体检测技术可快速检出多种常见呼吸道感染相关病原体,对临床呼吸道感染患者的诊断和治疗有重要意义。

快速病原体检测技术在甲型流感病毒检测中的应用价值分析

探究分析快速病原体检测技术在甲型流感病毒检测中的应用价值。方法 从2019年8月至2022年8月我院收治的疑似甲型流感病毒感染的患者中抽选80例作为研究对象,所有患者均进行快速病原体检测技术进行甲型流感病毒检测和核酸检测,将核酸检测结果作为金标准,对比临床检测结果。结果 快速病原体检测和核酸检测阳性阴性检查结果如下表,其中快速病原体检测特异度为33.33%,敏感度为97.40%,准确率为95.00%。快速病原体检测满意度为98.75%,核酸检测满意度为95.25%,两种不同检测方式满意度差异不大,P>0.05。从表3的甲型流感病毒感染时间分布结果来看,甲型流感病毒感染发生的高发时间段是12月到次年的2月之间,三个月发生率占据了总数的84.42%。快速病原体检测甲型流感病毒感染年龄分布、性别分布分析结果显示,检出的患者中男性占比55.84%,女性占比44.16%,差异不大,P>0.05;检出的患者中18岁以下占比49.35%、18-35岁占比10.39%、35-60岁占比11.69%、60岁以上占比28.57%,18岁以下占比和60岁以上占比明显高于其他年龄阶段,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论 在甲型流感病毒检测中运用快速病原体检测技术和核酸检测都可以很好的检出病毒,不过快速病原体检测技术检测速度更快,在多种呼吸道病原体的检测中都可以发挥出很好的价值。

基于环介导等温扩增技术检测东北地区大豆主要品种(系)种子携带的病原菌

为了解东北地区大豆种子携带病原菌的情况,选取了该地区52个大豆主要品种(系),采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测其种子携带胶孢炭疽菌、平头炭疽菌、冬青丽赤壳菌、亚细亚镰孢菌、黄色镰孢菌、木贼镰孢菌、禾谷镰孢菌、层出镰孢菌、尖镰孢菌、茄腐镰孢菌、轮枝镰孢菌、接骨木镰孢菌、大豆炭腐病菌、大豆拟茎点种腐病菌、大豆疫霉菌和立枯丝核菌16种大豆主要病原菌的状况。结果表明:在其中38个品种(系)的种子样本中累计检测出上述8种病原菌,检出率由高到低依次为:大豆拟茎点种腐病菌、立枯丝核菌、木贼镰孢菌、亚细亚镰孢菌、禾谷镰孢菌、层出镰孢菌、尖镰孢菌和平头炭疽菌。不同大豆品种(系)种子带菌的种类及数量存在较大差异,其中品种绥12-18和29182被检出的病原菌多达4种。本研究对了解东北地区大豆种子携带病原菌的状况有参考价值,并为大豆种子带菌检测提供了新的方法。

分子生物学技术在病原菌快速检测中的应用进展

脓毒症是危重患儿的重要死亡原因之一。细菌感染是弓I起脓毒症最主要的病因。细菌感染的早期诊断是正确抗感染治疗的保证，及时有效地控制感染决定了重症脓毒症患儿的预后。我国目前对病原菌检测、鉴定手段仍停留在血培养和生化水平，检测周期较长，阳性率低，因此，建立快速高敏感的诊断方法显得十分重要。近年来，随着分子检测技术的迅速发展，一些分子生物学技术被应用于细菌的分类鉴定，提高了检测的准确性和灵敏度，缩短了检测时间，扩大了检测的病原谱。目前主要应用的有两大类，一类为基于核酸的检测技术，如核酸杂交、核酸扩增、DNA测序、基因芯片等，第二类为基于蛋白质组为基础的技术，如生物质谱技术。该文对近年来各种分子生物学技术在细菌快速检测中的应用作一综述。

单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果讨论

为了提升实验室食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力,增强实验室竞争力,实验室参加了中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证活动。利用BAX System Q7全自动病原微生物快速检测系统快速筛查了此次能力验证中的2个样品,根据单核细胞增生李斯特氏菌检验的国家检测标准中的鉴定方法对筛选出的疑似菌进行了鉴定。结果表明:编号样品18-C660检出单核细胞增生李斯特氏菌,顺利完成能力验证,结果为满意。

Filmarray在儿童社区获得性肺炎中的应用价值

Filmarray作为一种多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)病原检测体系,具有通量高、阳性率高等特点,该文评价了Filmarray在儿童社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)中的病原检测性能、临床价值和经济学价值。支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)是用于Filmarray呼吸道病原检测较好的样本类型。Filmarray呼吸检测体系(Filmarray respiratory panel,FARP)可作为CAP中常规检测方法阴性时病原体补充检测手段之一,可提供重症CAP患儿更多的病原信息,可为重症CAP提供"早期病原预警"信号,可能对重症CAP或重症CAP转化倾向的患儿更加适用。Filmarray肺炎检测体系(Filmarray pneumonia panel,FAPP)在重症CAP早期或者病情加重时提供快速的病原结果和耐药基因结果辅助指导抗生素针对性的使用,有望发挥一定的抗生素管理潜力。FARP和FAPP的结果需要医生综合患儿临床特征进行判读,评价两种检测体系中的临床指标和经济学价值,需严格控制混杂因素。