黄河鲤CFH基因的克隆、组织表达及对病原类似物的表达响应

补体调节因子H(Complement factor H,CFH)为一类重要的补体调节蛋白,在调节补体激活反应和抵御病原感染过程中发挥重要作用。为研究黄河鲤(Cyprinus carpio YR)CFH基因在病原感染中的作用,本文克隆获得了体质量(20±2)g黄河鲤CFH基因开放阅读框序列(命名为CcCFH),进行生物信息学分析后,用荧光定量PCR(RT-PCR)技术分析其在肝脏、脾脏、头肾、鳃、心脏、皮肤、肠和体肾等组织中的表达水平以及腹腔注射100μL浓度为0.2 mg/mL的LPS溶液、100μL浓度为0.2 mg/mL的Poly I:C溶液和100μL生理盐水(对照组)后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h脾脏、头肾和体肾等组织的表达变化。结果显示:CcCFH基因开放阅读框全长2 817 bp,编码939个氨基酸,包含一个信号肽和15个CCP重复结构域。同源性比对和系统进化分析显示:CcCFH基因与鲤科鱼类相似性最高。组织分布结果表明:CcCFH基因广泛分布在健康黄河鲤各组织器官中,在肝脏和皮肤中表达量最高。LPS和Poly I:C刺激后,CcCFH基因在脾脏中呈现先上升后下降的表达趋势,在刺激后的24 h出现表达峰值;在头肾中呈逐渐上升的表达趋势,在72 h表达水平最高;在体肾中3 h表达水平最高,之后呈现逐渐下降的表达趋势。以上研究结果表明,CcCFH基因参与了黄河鲤对病原的响应过程,可能在鱼类抗病原感染的免疫响应中发挥重要作用。

斜带石斑鱼核苷酸结合结构域及亮氨酸重复序列受体对病原类似物的识别——通过核因子κB信号途径

构建斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)核苷酸结合结构域(Nucleotide-binding domain,NOD)1及2基因的表达载体pEGFP-Nod1和pEGFP-Nod2,与报告基因质粒pNFκB-Luc及内参质粒pRL-TK共转染HEK293T细胞,以脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)、胞壁酰二肽(MDP)、及二氨基庚二酸(DAP)为细菌类似物代表,以多聚肌苷酸-胞苷酸(Poly I:C)、多聚尿苷酸(PolyU)、多聚脱氧腺苷酸-脱氧胸腺苷酸[Poly(da:dt)]为病毒类似物代表,研究病原类似物刺激后核因子κB(NF-κB)的活化程度。结果表明,斜带石斑鱼Nod2基因可通过NF-κB信号途径识别多种病原成分;Nod1基因可识别DAP,对其他配体呈抑制作用或未通过NF-κB信号通路发挥作用。斜带石斑鱼Nod1及Nod2基因可不同程度地通过NF-κB信号途径识别病原成分。