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侵染葡萄的一种病毒分离物的鉴定 被引量:1
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作者 王杰 王德好 +7 位作者 佘林保 张成林 李世秀 胡易冰 刘明芳 何云霞 王秀英 贾宗友 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 1998年第1期66-69,共4页
分离物采自葡萄呈扇叶、花叶症状的病叶(代号为GF),人工摩擦接种能侵染昆诺藜(C.quinoa)、苋色藜(C.amaranticolor)和葡萄(LN33)。病毒致死温度(TIP)为60~65℃,稀释限点(DEP)为... 分离物采自葡萄呈扇叶、花叶症状的病叶(代号为GF),人工摩擦接种能侵染昆诺藜(C.quinoa)、苋色藜(C.amaranticolor)和葡萄(LN33)。病毒致死温度(TIP)为60~65℃,稀释限点(DEP)为10-2~10-3,寄主体外存活期(LIV)为3~4周,病毒粒体为球状,约30nm。该分离物和葡萄扇叶病毒(GFV)抗血清呈阳性反应。 展开更多
关键词 葡萄 侵染葡萄 病毒分离物
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新疆甜菜坏死黄脉病毒分离物的症状反应及核酸组分分析 被引量:1
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作者 刘升学 黄家风 +2 位作者 向本春 万利君 席德慧 《中国糖料》 2002年第3期12-16,共5页
利用症状反应和RT-PCR技术对12个采自新疆不同地区的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)分离物进行比较研究,结果表明:12个BNYVV分离物在甜菜、番杏和昆诺阿藜上的症状反应无明显区别,均以黄斑为主;利用RT-PCR进行的核酸组分分析却有一定差异,不... 利用症状反应和RT-PCR技术对12个采自新疆不同地区的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)分离物进行比较研究,结果表明:12个BNYVV分离物在甜菜、番杏和昆诺阿藜上的症状反应无明显区别,均以黄斑为主;利用RT-PCR进行的核酸组分分析却有一定差异,不同地区的BNYVV分离物含有不同的RNA组分,塔城地区、奇台地区及石河子145团的BNYVV分离物核酸组分为RNA1、RNA2、RNA3和RNA4;库尔勒地区的BNYVV分离物核酸组分还含有RNA5;石河子有些地区的BNYVV分离物核酸组分只有RNA1和RNA2。 展开更多
关键词 新疆 甜菜 坏死黄脉病毒分离物 症状反应 核酸组分分析
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一个马铃薯X病毒分离物的外壳蛋白基因序列分析与株系鉴定 被引量:15
3
作者 曲静 朱常香 +2 位作者 温孚江 郭兴启 宋云枝 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期358-364,共7页
对山东省侵染马铃薯的一个马铃薯X病毒(PVX)分离物PVX-SD_1的外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和序列分析。以提纯的病毒RNA为模板,应用RTPCR扩增目的基因,通过常规的基因克隆法将扩增的CP基因导入pUC19载体,测序。结果表明,PVX-SD_1的CP基因... 对山东省侵染马铃薯的一个马铃薯X病毒(PVX)分离物PVX-SD_1的外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和序列分析。以提纯的病毒RNA为模板,应用RTPCR扩增目的基因,通过常规的基因克隆法将扩增的CP基因导入pUC19载体,测序。结果表明,PVX-SD_1的CP基因长719bp,可编码248个氨基酸;与Gen-Bank中报道的15个有代表性的株系或分离物相比较,核苷酸同源性在80.1%~99.7%,氨基酸同源性在89.8%~100%;与欧洲株系UK_3仅1个核苷酸不同,同源性为99.7%,氨基酸同源性达100%,表明它们可能为同一株系,属于X^3细。 展开更多
关键词 马铃薯 X病毒分离物 外壳蛋白基因 序列分析
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我国大麦黄花叶病毒主要分离物对大麦品种致病性的研究
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作者 阮义理 邹皖和 +1 位作者 王卉 黄水淼 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期348-348,共1页
大麦黄花叶病是我国长江中下游和东部沿海大麦的重要病害,造成严重减产。我们以往初步研究认为,我国各地大麦黄花叶病毒对大麦品种的致病性存在差异。近年日本和西欧等报道,本病毒具有不同株系。为了探明我国该病毒致病性的分化,进行本... 大麦黄花叶病是我国长江中下游和东部沿海大麦的重要病害,造成严重减产。我们以往初步研究认为,我国各地大麦黄花叶病毒对大麦品种的致病性存在差异。近年日本和西欧等报道,本病毒具有不同株系。为了探明我国该病毒致病性的分化,进行本研究,现将结果报道于后。一。 展开更多
关键词 大麦 黄花叶病 病毒分离物 致病性
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烟草花叶病毒辽宁分离物Northern杂交检测体系的建立 被引量:2
5
作者 李艳丽 安梦楠 +1 位作者 王冠中 吴元华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期137-142,共6页
为了建立烟草花叶病毒辽宁分离物(TMV-LN)的高特异性、高灵敏度的分子杂交检测体系,从粗提纯的TMV-LN粒子中提取RNA,设计特异性引物通过RT-PCR扩增TMV-LN的CP和3'端非翻译区域,将片段连至p UC119载体获得重组质粒p UCTMV-PP,体外转... 为了建立烟草花叶病毒辽宁分离物(TMV-LN)的高特异性、高灵敏度的分子杂交检测体系,从粗提纯的TMV-LN粒子中提取RNA,设计特异性引物通过RT-PCR扩增TMV-LN的CP和3'端非翻译区域,将片段连至p UC119载体获得重组质粒p UCTMV-PP,体外转录获得地高辛(DIG)标记的TMV-LN正义链RNA杂交检测探针,同时构建DNA检测探针作为对照。采用点印迹(Dot-blot)杂交和Northern杂交对比RNA探针和DNA探针对TMV-LN的检测特异性和灵敏性。检测结果表明,RNA探针和DNA探针在点印记杂交和Northern杂交中均表现出良好的检测特异性,RNA探针在检测灵敏度方面要略好于DNA探针,且点印迹杂交体系在病毒定性方面较为快捷,Northern杂交体系在病毒基因组RNA的定量方面具有明显优势。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒辽宁分离 RNA探针 DNA探针 点印迹杂交 NORTHERN杂交
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香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA4非编码区启动子活性的研究 被引量:1
6
作者 魏红艳 孙德俊 +2 位作者 李云 孙卉 蔡文启 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期34-37,共4页
应用PCR方法亚克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (BananabunchytopvirusChineseZhangzhouisolate ,BBTV ZZ)DNA 4非编码区 (Po1)、主要共同区缺失片段 (Po2 )和主要共同区及茎环共同区都缺失片段 (Po3) ,分别插入到植物表达载体pCAMBI... 应用PCR方法亚克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (BananabunchytopvirusChineseZhangzhouisolate ,BBTV ZZ)DNA 4非编码区 (Po1)、主要共同区缺失片段 (Po2 )和主要共同区及茎环共同区都缺失片段 (Po3) ,分别插入到植物表达载体pCAMBIA 130 4的gfp::gus基因上游 ,替代椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S) ,得到重组质粒pTA2、pC2 6和pC45 .通过Agroinfiltration法 ,将含pTA2、pC2 6、pC45和pCAMBIA 130 4的根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtu mefaciens)注射进烟草 (NicotianatabacumL .cv .XanthiNC)叶片 ,进行 β 葡糖苷酸酶 (GUS)和绿荧光蛋白 (GFP)含量的瞬间表达分析 .含有pTA2、pC2 6、pC45、pCAMBIA 130 4和未注射的烟草叶片其GUS活性分别为 1 0 0 7、0 85 2、0 939、2 0 6 9和 0 0 2 1pmol·MU (μg·min) ;间接酶连免疫试验 (ELISA)结果表明每毫克总蛋白中的GFP于 490处的吸收值 (A490 )分别为 89 5 77、6 5 184、72 0 96、10 0 4 40和 3 2 87.以上表明Po1、Po2和Po3具有较强的启动子活性 .此外 ,转基因烟草的GUS组织化学定位检测试验进一步表明Po1、Po2和Po3具有维管组织特异性 . 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒中国漳州分离 DNA 4 启动子活性 GUS GFP
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甘薯潜隐病毒莲藕分离物辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备
7
作者 王凌琪 董婷婷 +5 位作者 陈雯 甘海锋 徐小伟 秦朗 李良俊 贺振 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期319-325,共7页
根据已报道的甘薯潜隐病毒莲藕分离物sweet potato latent virus-lotus(SPLV-lotus)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR从感病莲藕样品中扩增获得SPLV-lotus辅助成分-蛋白酶基因(HC-Pro),大小为1375 bp。通过序列测定和分析后,将其克隆到原... 根据已报道的甘薯潜隐病毒莲藕分离物sweet potato latent virus-lotus(SPLV-lotus)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR从感病莲藕样品中扩增获得SPLV-lotus辅助成分-蛋白酶基因(HC-Pro),大小为1375 bp。通过序列测定和分析后,将其克隆到原核表达载体pGEX4T-1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导并纯化获得大小为74 kD的融合蛋白pGEX4T-1-HC-Pro^(SPLV-lotus)。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白获得过量表达。以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清,采用ELISA和Western blot对抗血清效价和特异性进行检测,当HC-Pro抗血清稀释比为1∶256000时,ELISA显色后OD_(450)读数仍高于0.6,表明所制备抗血清合格;Western blot结果显示,在感染SPLV-lotus植株样品中仍能检测到单一目的条带。这些结果表明,制备的抗血清效价合格且可用于SPLV-lotus的特异性检测。 展开更多
关键词 甘薯潜隐病毒莲藕分离 辅助成分-蛋白酶 原核表达 抗血清
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香蕉束顶病毒Haikou2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备
8
作者 谭老喜 王洪星 +5 位作者 张雨良 王健华 章绍延 周朋 余乃通 刘志昕 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第12期2246-2251,共6页
香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产。BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究。本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2... 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产。BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究。本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2 ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备。结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3 h。融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清。Western blot实验表明抗血清具有特异性;酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954μg/mL浓度的表达纯化蛋白。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒Haikou2分离 BBTVDNA2 原核表达 抗血清制备
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杨凌番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因的克隆与其核心序列分析 被引量:2
9
作者 李云洲 梁燕 +3 位作者 王巧丽 李翠 崔霞 秦蕾 《中国蔬菜》 北大核心 2013年第02X期38-45,共8页
以陕西杨凌番茄生产基地感病(TYLCV症状)番茄植株为材料,分离得到杨凌番茄黄化曲叶病毒分离物,命名为TYLCV-Yl(GenBank序列号:KC293824,未公布);克隆该病毒外壳蛋白全基因序列CP及其核心序列tCP;分析核心序列tCP的特征、进化特征;运用DN... 以陕西杨凌番茄生产基地感病(TYLCV症状)番茄植株为材料,分离得到杨凌番茄黄化曲叶病毒分离物,命名为TYLCV-Yl(GenBank序列号:KC293824,未公布);克隆该病毒外壳蛋白全基因序列CP及其核心序列tCP;分析核心序列tCP的特征、进化特征;运用DNAMAN多重比较了该病毒外壳蛋白序列与其他18个TYLCV-CP核苷酸序列并且构建了基于CP基因核苷酸序列的进化树。结果表明:获得杨凌番茄黄化曲叶病毒(TYLCV-Yl)分离物,确定杨凌番茄黄化曲叶病毒源;获得TYLCV-YlCP全基因序列核心序列tCP,为基于CP抗TYLCV奠定基础;tCP核心序列非常保守,长度为419bp,编码137个氨基酸,其中在79~97个氨基酸之间具有1个跨膜结构;基于CP基因构建的进化树可将番茄黄化曲叶病毒分为3个亚组:TYLCV亚组Ⅰ,TYLCV亚组Ⅱ,TYLCV亚组Ⅲ,其中杨凌番茄黄化曲叶病毒(TYLCV-Yl)属于TYLCV亚组Ⅰ。 展开更多
关键词 番茄黄化曲叶病毒 杨凌番茄黄化曲叶病毒分离物 克隆 序列分析
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柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因原核表达及多抗血清制备 被引量:3
10
作者 尹跃艳 董家红 +3 位作者 岳建强 栗艳琼 陈伟 张仲凯 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期77-80,共4页
在云南发现的柑橘衰退病毒柠檬分离物对云南省德宏州的柠檬产业造成较大危害.通过用NdeⅠ和XhoⅠ对柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因进行双酶切,定向插入到表达载体pET-28a中,并转化大肠杆菌BL21,经IPTG在28℃下诱导6 h后,SDS-PAGE... 在云南发现的柑橘衰退病毒柠檬分离物对云南省德宏州的柠檬产业造成较大危害.通过用NdeⅠ和XhoⅠ对柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因进行双酶切,定向插入到表达载体pET-28a中,并转化大肠杆菌BL21,经IPTG在28℃下诱导6 h后,SDS-PAGE电泳显示,在25 kDa处有特异表达谱带,回收特异蛋白带作为抗原免疫家兔,制备出特异抗血清.间接ELISA测得效价为1∶3000,并且与CTV具有良好的特异性反应. 展开更多
关键词 柑橘衰退病毒柠檬分离 外壳蛋白 原核表达 抗血清
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大豆花叶病毒沈阳分离物全基因测序及系统进化分析 被引量:1
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作者 单宇航 高维达 +4 位作者 于曼 李睿 夏子豪 安梦楠 吴元华 《中国植保导刊》 北大核心 2020年第2期17-21,共5页
对采自辽宁省沈阳市大豆生产田的大豆花叶病毒沈阳分离物(SMV-SY)进行了基因全序列的克隆及序列分析。经提取叶片总RNA,进行了RT-PCR鉴定。结果表明,其SMV-SY整条基因组由9 587个碱基组成,编码多聚蛋白的开放阅读框位于第132~9 335 nt,... 对采自辽宁省沈阳市大豆生产田的大豆花叶病毒沈阳分离物(SMV-SY)进行了基因全序列的克隆及序列分析。经提取叶片总RNA,进行了RT-PCR鉴定。结果表明,其SMV-SY整条基因组由9 587个碱基组成,编码多聚蛋白的开放阅读框位于第132~9 335 nt,得到全基因序列上传至NCBI数据库,获得登录号为MK350280;BLAST比对结果显示,SMV-SY与其他分离物全基因组核苷酸序列之间的一致性在90.94%~96.86%;与国内外SMV不同分离物构建全基因组核苷酸序列系统进化树。分析表明,其与中国哈尔滨、江苏、以及伊朗和美国的分离物亲缘关系较近,与中国河北、重庆、南昌、广西、以及韩国和加拿大的分离物关系较远。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒沈阳分离 RT-PCR 全基因组测序 系统进化分析
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Cloning of Banana Bunchy Top Virus Chinese Zhangzhou Isolate DNA 4 and the Promoter Activity of Its Non_coding Region
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作者 孙德俊 魏红艳 +1 位作者 蔡文启 田颖川 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第8期941-945,共5页
Banana bunchy top virus Chinese Zhangzhou isolate (BBTV-ZZ) DNA 4 was amplified by PCR and cloned. Sequence analysis showed that BBTV-ZZ DNA 4 is 1 039 nucleotides (nts) in length and this virus could be one member of... Banana bunchy top virus Chinese Zhangzhou isolate (BBTV-ZZ) DNA 4 was amplified by PCR and cloned. Sequence analysis showed that BBTV-ZZ DNA 4 is 1 039 nucleotides (nts) in length and this virus could be one member of BBTV Asian group. Transcriptional initiation site A, which is at the 269 nucleotide, was preliminarily determined by using 5' RACE method. BBTV-ZZ DNA 4 non-coding region was sub-cloned by PCR and inserted into upstream of gfp : : gus plant expression vector pCAMBIA 1304 to construct recombinant plasmid pTA2. Agrobacterium tumefaciens harboring pTA2 was injected into leaves of the tobacco (Nicotiana tabacum L. cv. Xanthi NC) via Agrobacterium-infiltration procedure. Transient expressions of GUS and GFP were determined in injected leaves 3 - 5 d later. GUS activities of pTA2, pCAMBIA 1304 injected and non-injected tobacco leaves respectively were 1.007 0 pmol MU(.)mug(-1.)min(-1), 2.069 0 pmol MU(.)mug(-1.)min(-1) and 0.021 4 pmol MU(.)mug(-1.)min(-1). Indirect ELISA for GFP in 1 mg total protein from pTA2, pCAMBIA 1304 injected and non-injected leaves showed an A(490 nm) value of 89.577, 100.440 and 3.287, respectively. These results showed that the non-coding region of BBTV-ZZ DNA 4 has a promoter activity not only in the virus replication in monocot, but also in driving the expression of a foreign gene in dicot plants. 展开更多
关键词 banana bunchy top virus Chinese Zhangzhou isolate DNA 4 5 ' RACE PROMOTER GFP GUS
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Cloning and Sequence Analysis of HN and F Protein Genes from a Strain of Goose Paramyxovirus 被引量:2
13
作者 易春华 潘杰 +3 位作者 付薇 颜健华 徐贤坤 熊毅 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第4期75-78,共4页
[ Objective] The study was to clone HN and F genes from GX1 strain of goose paramyxovirus and analyze their sequences. [ Method] According to the full nucleotide sequence of GPV-SF02 strain of goose paramyxovirus, two... [ Objective] The study was to clone HN and F genes from GX1 strain of goose paramyxovirus and analyze their sequences. [ Method] According to the full nucleotide sequence of GPV-SF02 strain of goose paramyxovirus, two pairs of pdmers were designed to amplify the HN and F genes from GX1 strain of goose paramyxovirus isolated from diseased goose in Guangxi Zhuang Autonomous Region; the amplified products were ligated into pMD18-T vector and sequenced. [ Result ] HN and F genes of this strain tested were 1 716 and 1 662 bp in full nucleotide length, respectively; both showed the homologues of about 97.3% with GPV- SF02 strain, of 80.3% -97.5% with strains LaSota, F48E9 and JS, of just 84.8% with Miyadera strain. [ Conclusion] The results show that isolated strain BX1 matches to virulent APMV-1 strain, belonging to genotype Ⅶ of APMV-1 strain. 展开更多
关键词 Goose paramyxovirus HN protein gene F protein gene CLONING Sequence analysis
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Structures and Antiviral Activities of Butyrolactone Derivatives Isolated from Aspergillus terreus MXH-23 被引量:2
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作者 MA Xinhua ZHU Tianjiao +3 位作者 GU Qianqun XI Rui WANG Wei LI Dehai 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2014年第6期1067-1070,共4页
A new butyrolactone derivative,namely butyrolactone Ⅷ (1),and six known butyrolactones (2-7) were separated from the ethyl acetate (EtOAc) extract of the fermentation broth of a fungus,Aspergillus terreus MXH-2... A new butyrolactone derivative,namely butyrolactone Ⅷ (1),and six known butyrolactones (2-7) were separated from the ethyl acetate (EtOAc) extract of the fermentation broth of a fungus,Aspergillus terreus MXH-23.The chemical structures of these metabolites were identified by analyzing their nuclear magnetic resonance (NMR) and mass spectrometry (MS).Known butyrolactone derivatives contain an α,β-unsaturated γ-lactone ring with α-hydroxyl and y-benzyl,and butyrolactone Ⅷ (1) was the first butyrolactones contains α-benzyl and γ-hydroxyl on α,β-unsaturated lactone ring.All of the butyrolactone derivatives were tested for their anti-influenza (H 1N 1) effects.Derivatives 4 and 7 showed moderate antiviral activities while the newly-identified,derivative 1,did not. 展开更多
关键词 sponge-derived fungus secondary metabolite butyrolactone anti-influenza activity
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