朝鲜淫羊藿多糖对HIV-1包膜蛋白质gp120的免疫佐剂活性

目的评价淫羊藿总多糖(EKP)中组分B(EKP-B)和均一多糖B-1(EKP-B-1)对人类免疫缺陷病毒HIV-1 gp120蛋白的免疫佐剂活性。方法 EKP-B(150μg)、EKP-B-1(150μg)、铝佐剂(200μg)和生理盐水分别与HIV-1gp120(20μg)配伍肌内注射免疫小鼠1次。免疫后2和4周收集小鼠血清,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度。4周后处死小鼠,MTT法测定小鼠脾T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测免疫小鼠血清干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)含量,流式细胞术测定脾细胞中CD4+/CD8+和CD3+/CD19+T细胞亚群百分比。结果免疫后2周,与HIV-1gp120单独免疫组相比,EKP-B-1与HIV-1gp120配伍可提高小鼠血清特异性抗体滴度(P<0.05),EKP-B无明显作用。免疫后4周,EKP-B和EKP-B-1与HIV-1gp120配伍均能明显提高小鼠血清特异性抗体滴度(P<0.05),还能明显促进B细胞增殖反应和IFN-γ的分泌(P<0.01),对小鼠脾T淋巴细胞增殖以及胸腺IL-4的分泌无明显影响,同时EKP-B还能提高脾细胞CD3+/CD19+细胞百分率(P<0.01),EKP-B-1提高脾细胞CD4+/CD8+细胞百分率(P<0.05)。结论 EKP-B和EKP-B-1(每只鼠150μg)对HIV-1gp120抗原显示良好的佐剂活性,能明显提高HIV-1gp120免疫小鼠的体液免疫和细胞免疫功能,提示EKP-B和EKP-B-1有可能作为艾滋病疫苗的佐剂。

芽胞杆菌及其代谢物抑制包膜病毒感染的研究进展

包膜病毒指具有一层脂质双层膜的病毒,如流感病毒、冠状病毒等,这些包膜病毒每年在世界范围内导致许多严重的疾病,严重威胁人类健康。使用抗病毒药物是预防与治疗病毒感染的主要策略,芽胞杆菌(Bacillus)及其代谢物能够抑制多种包膜病毒的感染。本文综述了芽胞杆菌代谢的粗提物、肽、酶、胞外聚合物、小双链RNA和热灭活的枯草芽胞杆菌孢子在抗包膜病毒感染中发挥的重要作用,其机制是通过直接破坏病毒包膜、阻止膜融合、与病毒基因组RNA直接配对、催化裂解病毒RNA、激活天然免疫反应等对抗病毒,期望为包膜病毒的持续预防和治疗提供参考。

蛋白质类可食性涂膜保鲜果蔬技术的研究进展

近年来,可食性涂膜保鲜技术因其成本低廉、安全无毒、保鲜效果良好而备受关注且得到广泛的研究和应用。果蔬含有丰富的碳水化合物、维生素、矿物质和膳食纤维,是保证人类膳食营养均衡的必要物质,且在保障人体健康上发挥着重要作用。然而,大多数果蔬经采摘后仍进行旺盛的呼吸代谢,运输及常温贮存过程中易被霉菌、细菌等感染而发生腐败变质,失去其原有食用价值且造成巨大经济损失。目前,果蔬的保鲜方法主要有低温贮藏、

丙型肝炎病毒(HCV)广东株包膜蛋白区cDNA的序列测定

采用微粒吸附法从广东省一慢性丙型肝炎病人血清中提取丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，经随机引物逆转录为ｃＤＮＡ，再经聚合酶链反应（ＰＣＲ），获得包膜蛋白区（Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１）两个部分重叠的产物片段，分别为４８９ｂｐ和８０６ｂｐ。其中，４８９ｂｐ片段主要位于Ｅ１区，小部分位于Ｃ区；８０６ｂｐ片段位于Ｅ２／ＮＳ１区。将４８９ｂｐ片段插入ｐＵＣ１９载体，再亚克隆进ｐＵＣ１８质粒载体。８０６ｂｐ片段则插入到ｐＢＶ２２０质粒及Ｍ１３ｍｐ１８、Ｍ１３ｍｐ１９噬菌体。将所测定的序列（共为１２４６ｂｐ）与多个已知分离株相应序列比较后发现，核苷酸同源性介乎６１．００％－８９．４１％，与Ⅱ（１ｂ）型同源性最大，超过８６％；推导的氨基酸同源性为６０．２４％－８７．２３％。与其它株比较，ＨＣＶ广东株（ＨＣＶ－ＧＤ）较大变异区包括２５１－２５８、３８３－４０６、４３４－４４６及４７５－４８０位氨基酸。其中两个与公认的高变异区（３８３－４０８、４７５－４８０）相对应。

蛋白质构象设计人类免疫缺陷病毒1型穿入的抑制物

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)属于包膜病毒,它通过包膜糖蛋白gp120/gp41复合体与CD4受体结合后吸附在宿主细胞膜上,然后通过gp41 N端的3个α-螺旋与C端的3个α-螺旋相互靠拢,以反式平行方式卷曲,形成'三聚体-发夹'结构,促使其包膜与宿主细胞膜发生融合,最终使核衣壳进入细胞质内。已知一种能够与N端结合的蛋白质(C-pep-tides),可作用于前发夹中间体,从而阻止'三聚体-

重组汉坦病毒包膜糖蛋白G1、G2基因体内外表达的评价

目的 构建分别编码汉坦病毒浙 37(Z37)株包膜糖蛋白G1、G2的真核表达质粒 ,并在离体及活体内评价重组汉坦病毒 (HV)包膜糖蛋白G1、G2基因的表达。方法 将编码G1、G2的基因片段分别插入至真核表达载体 pcDNA3.1(+) ,获重组质粒pcDNA3.1 G1、pcDNA3.1 G2。在体外转录翻译系统和真核细胞中表达重组基因 ,并在BALB/C小鼠中评价包膜糖蛋白G1、G2所激发的特异性体液免疫应答效果。结果 重组质粒pcDNA3.1 G1、pcDNA3.1 G2转染COS 7细胞后 ,IFA法可检测到细胞内有特异性荧光分布 ;在体外蛋白质转录、翻译系统 ,重组质粒 pcDNA3.1 G1、pcDNA3.1 G2所表达的蛋白质分子量分别约为 70KD及 5 5KD ;在免疫的部分小鼠体内可检测到特异性抗体。结论 成功地构建了分别编码HVZ37株包膜糖蛋白G1、G2的重组质粒 。

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白的研究进展

本文概述了近年来利用体外表达系统对丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白的翻译后加工、折叠、装配的研究进展。目前的研究表明:HCV E1、E2蛋白通过非共价键相连形成的异源二聚体代表了HCV糖蛋白的天然构象;E1和E2 C末端的跨膜区能使其锚定于内质网;HCV包膜糖蛋白在内质网中完成其加工及成熟的过程;分子伴侣及E1、E2蛋白的旁侧序列对形成天然HCV包膜糖蛋白复合物起重要作用。

基于Ⅰ类包膜病毒膜融合机制的肽类抗病毒药物研究进展

病毒性疾病已成为影响人类健康的重大威胁之一,其中,由Ⅰ类包膜病毒引起的疾病传播甚广,危害极大。研究表明,Ⅰ类包膜病毒如1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)、中东呼吸综合征冠状病毒和流感病毒等在进入宿主细胞的过程中会形成六股螺旋结构,特异性地抑制其形成过程可阻断病毒与宿主细胞膜的融合,从而达到抑制病毒增殖的效果。基于Ⅰ类包膜病毒膜融合机制的肽类抗病毒药物具有生物活性高、副作用小及特异性强等优点,正逐渐成为肽类抗病毒药物研究的热点。本文对近年来基于Ⅰ类包膜病毒膜融合机制的肽类抗病毒药物的研究进展进行了较为系统的综述。

乙型肝炎病毒外膜大蛋白与HBV DNA的关系研究

目的:探讨乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)与HBV DNA的关系。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR法,检测320例乙型肝炎患者血清中的HBV-LP水平及HBV DNA载量。结果:HBV-LP水平与HBV DNA拷贝数变化相一致,两者呈正相关(r=0.949);不同模式的HBeAg血清中HBV-LP与HBV DNA阳性率,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:血清HBV-LP水平能反映乙型肝炎患者体内HBV复制程度,是判断HBV复制的血清学指标。

EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞P53蛋白表达的影响

目的研究EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)对鼻咽癌细胞P53蛋白表达的影响。方法将LMP1基因真核表达质粒转染至鼻咽癌CNE1细胞,脂质体介导端粒酶反义核酸处理转染细胞,MTT法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测LMP1和P53蛋白表达,原位杂交技术检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达。结果对照组,转染并表达LMP1基因的细胞的增殖能力、P53蛋白和hTERTmRNA表达水平均显著高于未转染细胞和转染空载质粒的细胞。端粒酶反义核酸作用组,LMP1基因转染细胞的LMP1蛋白表达水平显著低于对照组(P<001);LMP1基因转染细胞与未转染细胞和转染空载质粒的细胞的增殖能力、P53蛋白和hTERTmRNA表达水平均显著低于对照组(P<001),但LMP1基因转染细胞的增殖能力和P53蛋白表达水平仍显著高于未转染细胞和转染空载质粒的细胞(P<001)。结论EB病毒LMP1可促进鼻咽癌细胞P53蛋白的表达。

EB病毒潜伏膜蛋白和肿瘤的关系

EB病毒（EBV）是人类疱疹病毒，与淋巴系统、上皮细胞肿瘤相关。其编码潜伏性膜蛋白（LMP）包含LMP1、LMP2A和LMP2B。特别是LMP1，是众多EB病毒编码蛋白质中唯一被明确证明能恶性转化原代B细胞、鼠成纤维细胞和人上皮细胞的蛋白质。研究LMP与肿瘤的关系将为防治EB病毒相关肿瘤提供新的策略。

HCV包膜蛋白E2的表达及其抗原性的检测

为研究丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2在原核细胞和真核细胞中的表达 ,并对表达蛋白的抗原性进行检测。将HCVE2区N端的一段基因分别克隆入原核表达载体pQE30和真核表达载体pEF1/HisC中进行E2蛋白的表达 ,采用ELISA和WB对表达蛋白的抗原性进行检测。结果在原核细胞和真核细胞中均表达了预期大小的蛋白 ,能同HCV感染者血清发生特异性反应。提示该段E2基因在原核表达系统和真核表达系统均能表达出具有抗原活性的蛋白 ,其中真核细胞表达的蛋白可被糖基化。

EB病毒-潜伏膜蛋白1致瘤机制的研究进展

EB病毒的感染与B细胞及上皮细胞来源的肿瘤密切相关,尤以致瘤基因潜伏膜蛋白1较为重要,其分子致瘤作用及机制的探讨一直是EB病毒致瘤机制研究领域中令人关注的焦点,而在临床上的应用也取得了颇具意义的进展。现就EB病毒-潜伏膜蛋白1致瘤的主要分子机制及进展作一综述。

慢病毒介导的RNA干扰技术构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型

目的:构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型,为进一步研究EMP-1在椎间盘退变中的作用机制提供理想的研究平台。方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72h后收集病毒上清并感染人胚椎间盘髓核细胞,Western blot、RT-PCR鉴定基因干扰效果,凝胶成像分析软件对条带显色程度进行分析,得到EMP-1/GAPDH的平均值。结果:重组慢病毒滴度测定约为1×107U/ml,感染靶细胞后得到EMP-1基因低表达细胞模型,EMP-1mRNA表达水平比正常细胞下降了50%。半定量RT-PCR结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.46±0.03降至0.32±0.01,Westernblot结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.50±0.01降至0.25±0.01。结论:通过慢病毒包装技术,成功构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型。

丙型肝炎病毒E2蛋白结合蛋白的酵母双杂交筛选研究

HCV的包膜蛋白E2 (E2 )的生物学特性与HCV感染的慢性化和抗病毒免疫关系极为密切。为了进一步阐明这个多功能蛋白质与宿主蛋白的关系 ,采用酵母双杂交系统 3,在酵母细胞融合蛋白表达型人肝cDNA文库中进行筛选 ,得到 76个与E2特异性结合的阳性克隆 ,包括人类肝细胞癌相关抗原、硒结合蛋白、核苷传送系统、果糖磷酸激酶等 2 6种已知功能蛋白质基因和 14个未知功能基因。本研究结果为阐明E2在HCV致病中的作用提供了重要研究线索。

外源突变型p53和潜伏膜蛋白1基因在转基因鼠不同器官组织中的表达

目的:观察转基因小鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中外源突变型p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达情况。方法:实验于2005-03/04在湖南中医学院中西医结合系基础研究室完成。选取4月龄转p53m t和潜伏膜蛋白1基因F0代小鼠1只,以正常同龄未转基因C57BL/6J小鼠4只作为对照。采用免疫组化分别检测转基因鼠和对照鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物的平均灰度值。系统设定白色最大灰度为256,黑色最小灰度为0。灰度值越小,代表阳性反映程度越高。结果:实验纳入转基因鼠1只,对照鼠4只,均进入结果分析。①蛋白质阳性表达信号的定位分布:转基因鼠p53m t和潜伏膜蛋白1基因的免疫组化阳性信号均为棕黄色的颗粒或斑块,表达量高,p53m t蛋白绝大部分分布于细胞膜和胞浆内,少数位于细胞核中。对照鼠p53mt蛋白在组织中呈弱表达,潜伏膜蛋白1的蛋白阳性信号主要位于上皮细胞的细胞膜和胞浆中。②转基因鼠和对照鼠不同组织部位中p53m t基因表达的平均灰度值:转基因鼠食道、肝、脾中平均灰度值较高(131.75±17.25,135.15±13.14,139.42±11.55),在鼻腔黏膜、鼻咽组织、大肠中平均灰度值较低(96.61±12.43,109.26±9.90,109.45±6.72)。除了胃、脾外,各组织部位与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。③转基因鼠和对照鼠不同组织部位中潜伏膜蛋白1基因表达的平均灰度值:转基因鼠鼻咽部平均灰度值最低(106.75±19.57),其次为鼻腔、食道、肺、胃,而在大肠、肝、脾中表达水平较高(152.29±12.17,134.98±17.79,158.35±10.75)。除鼻腔、大肠、肝、脾外,各组织部位中潜伏膜蛋白1基因的表达水平与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。④转基因鼠不同组织部位中p53mt基因与潜伏膜蛋白1基因表达水平的相关性分析:转基因鼠鼻腔黏膜、鼻咽组织、食道、肺、胃、大肠、肝、肾、脾中潜伏膜蛋白1基因表达水平和p53m t基因表达水平无相关性(相关系数｜r｜分别为0.744,0.459,0.589,0.722,0.258,0.252,0.337,0.111,0.209)。结论:外源突变型p53m t基因在转基因鼠鼻腔、鼻咽和大肠中表达水平较高,潜伏膜蛋白1基因在鼻咽组织中表达呈最高。两种基因在不同器官组织部位的表达均存在显著性差异,尤以潜伏膜蛋白1基因表达的组织特异性较强,但两种基因的表达不存在相关性。

霍奇金淋巴瘤潜伏膜蛋白1、p53及bcl-2蛋白的表达及意义

目的探讨EB病毒潜伏膜蛋白(LMP1)、p53、bcl-2的蛋白表达在霍奇金淋巴瘤(HL)致病机制中的作用及其意义。方法对收集的31例石蜡包埋的HL组织进行LMP1、p53、bcl-2蛋白免疫组化染色。结果LMP1、p53、bcl-2的阳性率分别为58.1%、61.3%、35.5%。LMP1与p53相关性分析具有统计学意义。结论p53可能参与LMP1在HL致病机制中的作用,bcl-2可能与HL的致病关系不大。

风疹病毒E1膜抗原的原核表达与纯化鉴定

①目的 重组表达风疹病毒 (RV)E1膜蛋白的抗原决定簇多肽 ,探索制备用于RV血清学检测的基因工程抗原。②方法 通过反转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增RVE1膜蛋白 2 12～ 2 4 1位氨基酸的编码基因片段nt8886～ 8976 ,将此片段重组于质粒载体 pGEX4T 2上 ,在大肠杆菌中表达目的多肽片段与谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)的融合蛋白 ,纯化融合蛋白并经Western Blot鉴定其抗原性。③结果 有效地表达出相对分子质量约为330 0 0的融合蛋白 ,经Western Blot检测结果证实可与RV的单克隆抗体发生特异性结合反应。④结论 在原核表达系统中有效地表达了保留风疹病毒抗原性的融合蛋白 ,为今后进一步研制RV重组抗原提供了方法学和实验室基础。

登革2型病毒重组E蛋白的生物学特性分析

[目的]检测重组 D2V全长 E蛋白纯化后的免疫反应性与抗原性,为其亚单位疫苗研制奠定基础.[方法]酵母表达上清超滤浓缩后用金属螯合亲和层析(MCAC)法过柱,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术观察蛋白条带.将纯化蛋白与组氨酸抗体、 D2V E单抗进行斑点印迹和蛋白印迹,以确定纯化物是否为含组氨酸尾的 D2V E融合蛋白,并用 ELISA检测纯化 E蛋白与不同 DV抗体的结合反应.用纯化的重组 D2V E蛋白免疫小鼠后测定其产生的抗体类型与滴度,以分析其抗原性.[结果]表达产物经 MCAC柱纯化获得单一的相对分子质量为 69× 103的蛋白,组氨酸抗体与 D2V E单抗的印迹试验证实该条带就是含多聚组氨酸尾型特异的重组 E蛋白(rEgp) , ELISA显示纯化的 rEgp保留有免疫反应性及型特异性,内糖苷酶 H消化证实其含有 N联高甘露糖残基.接种 rEgp可诱生针对 D2V抗原与重组 E蛋白的高效抗体.[结论]纯化的 D2V全长 E蛋白保留其免疫原性和免疫反应性,并具有型特异性.