不同品种(系)马铃薯休眠块茎顶端和茎端芽眼组织马铃薯Y病毒含量分析

马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是马铃薯生产中较常见的病毒之一,马铃薯病毒的检测是生产中保障马铃薯品质和产量的重要基础,收获后批量检测是进行种薯质量评价的主要依据之一。研究针对‘56-2’‘Ivory Russet’‘Clearwater Russet’‘龙薯14号’‘龙薯3号’‘龙薯15号’‘龙育201401-70’‘龙薯7号’‘克新23号’和‘克新28号’马铃薯品种(系)休眠块茎样品,采用TRIzol法提取马铃薯休眠块茎顶端和茎端芽眼组织的总RNA,经qRT-PCR和RT-PCR检测分析,比较块茎的顶端与茎端芽眼组织PVY含量分布的情况。结果表明,上述供试材料的休眠块茎茎端芽眼组织PVY浓度均高于顶端芽眼组织,能够精准的检测到病毒的存在;对‘Ivory Russet’品种的休眠块茎选取100个带病样品通过TRIzol法提取顶端与茎端的总RNA,采用4合1的方法合样后进行PVY RT-PCR检测,所有处理的顶端芽眼组织检测条带亮度低于茎端芽眼组织。可见,马铃薯休眠块茎茎端芽眼组织取样能够更加精准的检测出PVY。研究结果为马铃薯种薯收获后PVY的检测及合理取样提供了科学依据。

四种方法测定伪狂犬病活疫苗病毒含量的稳定性对比试验

分别采用10 mL细胞培养瓶和96孔细胞培养板,采用不同条件培养病毒和不同稀释液稀释病毒,以检测伪狂犬病活疫苗病毒含量和比较结果的稳定性。结果显示,使用A、B、C、D四种方法测定伪狂犬病活疫苗病毒含量,对其稳定性的影响差异不显著;在生产实践中,因其便利性和实用性,采用细胞板测定法逐渐成为生产企业的首选,并有替代细胞瓶测定法的趋势。

黄瓜花叶病毒基因沉默载体的病毒含量和症状分析

病毒诱导的基因沉默(Virus-induced Gene Silencing,VIGS)已被广泛应用于植物基因功能研究,具有操作容易、较短时间内即可观察到沉默效果、成本较低的特性.黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic Virus,CMV)VIGS载体已经应用于沉默辣椒、烟草、大豆等植物基因,对于研究植物基因功能有重要作用.研究以CMV的Fny株系(CMV-Fny)RNA2中2b基因缺失载体CMV-F209△2b和表达2b基因N端61个氨基酸的载体CMV-F2092b61aa为对象,插入不同长度的外源基因gfp片段后,分析CMV VIGS载体在本氏烟植株上的病毒表达含量及诱导产生的病毒症状.结果表明,插入外源基因片段后,病毒外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因RNA表达水平均明显降低.携带不同长度gfp序列的重组病毒CMVF2092b61aa-gfp 100、CMVF2092b61aa-gfp 200和CMVF2092b61aa-gfp 350其CP RNA含量比装载最适长度gfp序列的CMVF209△2b-gfp 350高10倍左右,且同样不引发明显病毒症状.由此可见,CMVF2092b61aa相比CMV-F209△2b更适合作为高效的VIGS载体,且初步探明它的最适插入片段长度为200~350 nt.

乙型肝炎患者血清氧自由基变化与病变程度及病毒含量的关系

目的:研究乙型肝炎患者血清氧自由基与病变程度及病毒含量的关系。方法:103例乙型肝炎患者分为单纯携带组（XD）、急性肝炎组（AH）、慢性活动性肝炎组（CAH）及肝硬化组（LC）,另设对照组20人。分别测定其血清超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）;40例CAH患者行HBV-DNA定量分析后,其中19例予常规保肝、退黄治疗,另21例在此基础上加用抗病毒治疗,疗程6个月后复测血清HBV-DNA、SOD及MDA水平。对各组间SOD、MDA水平及治疗前后HBV-DNA水平、SOD及MDA进行统计分析。结果:各组乙型肝炎患者与正常对照组比较SOD及MDA变化显著（P<0.05）。CAH患者抗病毒治疗后HBV-DNA含量下降,伴随SOD上升及MDA下降。结论:乙型肝炎患者血清氧自由基代谢异常,其水平与病变程度及病毒含量明显相关。

输血后HCV感染血清病毒含量及基因型与临床转归的关系

目的:了解我国输血后HCV感染病毒含量及基因型与疾病转归的关系. 方法:对河北省某农村314例单采浆献血员HCV感染后的现状调查,包括临床表现、血清肝酶、病毒学标志检测以及B型超声检查,其中,HCV RNA的测定采用荧光定量:PCR方法,HCV基因分型采用5’端非编码区限制性酶切长度多态性分析. 结果:本调查组HCV感染的慢性化率为57.6%,自然阴转率为42.4%.314例感染者目前几乎均无症状,总的ALT 的异常率为40.2%.HCV RNA含量变化与ALT水平高低呈正相关性(r=0.346,P<0.001).HCV基因Ⅱ型感染者HCV RNA含量和血清ALT均显著高于HCV基因Ⅲ型感染者(P<0.001).男性感染者的慢性化率高于女陛感染者(66.7%vs 50.4%). 结论:本组输血后HCV感染自然阴转率较高,慢性HCV 感染表现隐匿,肝酶学检查指标大多轻度到中度异常.HCV 基因Ⅱ型感染者HCV RNA含量和血清ALT均显著高于HCV基因Ⅲ型感染者.男性感染者的慢性化率高于女性感染者.

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)病毒含量荧光定量PCR方法的建立

为快速、准确测定高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)活疫苗(JXA1-R株)的病毒含量,根据GenBank中该病毒的保守基因序列设计合成了引物和探针,优化反应条件,建立了其活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法。用该方法测定疫苗样品的病毒含量,每头份稀释100倍后,Ct均值为17.08,病毒拷贝数均值为4.61×107copy/μL。将建立的荧光定量PCR与传统的TCID50方法进行相关性分析,相关系数r=0.83,表明该方法可用于HP-PRRS活疫苗半成品及成品的病毒含量测定。

伪狂犬病病毒HB-98株不同保存条件下病毒含量的比较

将同一批次的伪狂犬病病毒HB-98株病毒液与同一条件下冻干生产的成品分别在2℃～8℃和-20℃以下保存,间隔一定时间分别测定其病毒含量。发现无论在何种环境下保存,随着时间的推移,病毒含量趋于下降。但在一定时期内,病毒液在不同保存条件下病毒含量有明显区别,在2℃～8℃保存明显好于在-20℃以下保存;冻干后的成品在两种存放条件下短期存放则无明显区别。

鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)病毒含量细胞间接免疫荧光方法的建立

为测定鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)的病毒含量,采用Vero细胞建立鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)病毒含量细胞间接免疫荧光方法,测定细胞半数感染量(TCID50)。通过与传统鸡胚半数致死量(ELD50)方法进行敏感性和相关性比较,间接免疫荧光方法具有更高的敏感性,两种方法的相关系数r为0.823。间接免疫荧光方法的建立为该疫苗的检验提供了一种新途径。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗病毒含量测定能力比对的实践

详细介绍了高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗病毒含量测定能力比对实施的全过程,比较了参考值评价法和稳健统计技术在本次能力验证结果评价中的应用情况,为进一步有效开展兽用生物制品行业能力比对工作提供有益参考。

乙肝e抗原与乙肝病毒含量相关性探究分析

目的分析乙肝e抗原(HBeAg)与乙肝病毒(HBV)含量的相关性。方法收集2010年～2011年收治的乙肝表面抗原(HBsAg)阳性的患者并复习文献,共收集1458例病例资料,将与其对应的乙肝DNA检测结果进行比较分析。结果乙肝e抗原阳性血清对应的乙肝病毒DNA的检测结果几乎全部为阳性,且66.4%的患者乙肝病毒含量大于107;HBsAg阳性,HBeAg阴性,抗HBe阳性者有70.6%乙肝病毒含量小于103。结论乙肝e抗原与乙肝病毒含量之间存在明显的相关性,然并非是正相关,所以仅依靠乙肝抗原抗体检测无法对乙肝病毒的复制程度和传染性强弱进行准确的判断。

女性不同年龄段人乳头瘤病毒亚型的分布及病毒含量的分析

宫颈癌是目前常见的妇科恶性肿瘤之一,人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）感染已公认为是引起宫颈癌及其癌前病变的主要原因[1],几乎所有的宫颈癌细胞中均可检测到HPV-DNA存在。

双价苗中马立克氏病病毒含量

用显微镜观察和间接荧光抗体试验 (IFA)分别测定某马立克氏病病毒双价苗中所含两种 814毒株和HVT毒株的空斑数。结果表明 ,IFA检测的空斑数显著大于显微镜观察的空斑数 ,且双价茵中两种病毒的含量与这两种病毒混合前加入的比例基本一致。

黑曲霉病毒含量与寄主葡萄糖淀粉酶产量之间的相关性

我国工业上广泛应用的葡萄糖淀粉酶生产菌黑曲霉(Aspergillus nider)体内含有大量病毒。选择在育种筛选中葡萄糖淀粉酶产量不同的菌株,挑选不同方式保藏传代造成葡萄糖淀粉酶产量不同的菌株,以及经化学试剂处理后葡萄糖淀粉酶产量不同的菌株。分別进行病毒提取,电镜观察、免疫双扩散、~3H标记放射免疫测定病毒在体内的滴定度,~3H标记后提取病毒及病毒核酸测定对体內病毒核酸的参入,及PAS-ELISA(酶联A蛋白夹层酶联免疫吸附法Staphyllococcus protein A sandwich ELISA)与SA-test(病毒葡萄球菌共凝集试验Virus staphlococcal co-aggluintion test)检测病毒含量,并且测定了葡萄糖淀粉酶的产量。证实了黑曲霉细胞内病毒的含量与黑曲霉的葡萄糖淀粉酶产量之间呈正相关性。

模拟应用条件检测小反刍兽疫活疫苗的病毒含量

为确保小反刍兽疫活疫苗在免疫接种时的效果。本试验模拟野外操作环境,在不同稀释液、不同温度和不同放置时间条件下,检测并比较小反刍兽疫活疫苗病毒含量。结果表明,以PBS、含1%冷水鱼明胶的生理盐水、生理盐水分别稀释疫苗,1%冷水鱼明胶的生理盐水更适合作为小反刍兽疫活疫苗的稀释液。疫苗以三种不同的稀释液稀释后,在4 h内,25℃或37℃条件下,不会影响其效价。

宫颈癌患者HPV DNA病毒含量及循环血、组织miR指标的变化研究

目的：研究及观察宫颈癌患者HPV DNA病毒含量及循环血、组织miR指标的变化情况。方法：选取2014年2月~2015年9月本院收治的72例宫颈癌患者为观察组,同时期的72例健康妇女为对照组,比较两组HPV DNA病毒含量及构成、循环血及组织miR指标,并比较观察组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者的检测结果。结果：观察组HPV DNA病毒含量及〉500者比例均高于对照组（P〈0.05）,循环血及组织miR-21均高于对照组（P〈0.05）,而循环血、组织miR-126、miR-143及miR-145则均低于对照组（P〈0.05）,观察组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者的检测结果也存在明显差异（P〈0.05）。结论：宫颈癌患者HPV DNA病毒含量及循环血、组织miR指标的变化情况较大,且其检测水平受宫颈癌分期的影响较大,因此对于疾病的诊断与治疗均有积极的指导意义。

慢性乙型肝炎患者体内病毒含量与TH1／TH2细胞应答的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者体内病毒含量与TH1/TH2细胞应答的关系。方法 以斑点杂交方法检测HBsAg阳性的54例CHB血清中HBVDNA量，根据HBVDNA量将慢性乙型肝炎患者分为3组（A组为DNA量检测限以下，B组为DNA量20-200pg/ml，C组为DNA>200pg/ml），以特异性刺激因子rHBcAg刺激这3组感染者及对照组外周血单个核细胞（PBMC），以又抗体夹心法检测各组PBMC在rHBcAg刺激后所产生的IL-2和IL-10，结果 对照组PBMC所产生的IL-2值显著高于CHB组（P<0.01)，IL-10则相反（P<0.05)；而三组CHB患者中，IL-2值检测值依次为：A组>B组>C组（P<0.01或P<0.05)。IL-10则相反（P<0.01或P<0.05)。结论 HBV感染者体内高病毒量可能增强TH2类细胞因子应答，而低病毒量时则可能以TH1类细胞因子应答为主。

猪瘟兔化弱毒疫苗中病毒含量实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5′非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测的敏感度达1.20×105拷贝/mL;对猪繁殖与呼吸综合征、猪乙型脑炎、仔猪副伤寒和猪伪狂犬病4种活疫苗基因组扩增结果均为阴性;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.29%~0.39%,批间变异系数为0.32%~0.61%。应用此方法对6个不同厂家生产的7种猪瘟兔化弱毒活疫苗中病毒含量进行了检测,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量存在较大差异。结果表明,建立的猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR方法能特异地检测疫苗病毒含量,可用于初步评价猪瘟兔化弱毒疫苗抗原含量。