本文运用RT-PCR方法克隆了黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)湖南邵阳株系的基因组MP(CGMMV-HuNSY movement protein)片段,测序并进行了分析。结果显示,片段全长共有803bp(KC684977),编码由264个氨基酸组...本文运用RT-PCR方法克隆了黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)湖南邵阳株系的基因组MP(CGMMV-HuNSY movement protein)片段,测序并进行了分析。结果显示,片段全长共有803bp(KC684977),编码由264个氨基酸组成的蛋白质,推测分子量约28.87kD,理论等电点pI为9.06,ProtParam预测显示为不稳定蛋白,与已报道的辽宁分离物病毒的MP作比较,核苷酸相似性为99.6%,氨基酸相似性为98.9%;湖南邵阳株系CGMMVMP蛋白无高度卷曲螺旋部位,有跨膜结构区域,该部位表现为疏水性,可能为蛋白互作位点;磷酸化位点均匀分布于整个多肽链中,存在5个主要的B细胞抗原表位预测位点;对烟草花叶病毒属病毒MP氨基酸序列进行了motif查找,发现了该属病毒氨基酸序列的3个保守区段,还进行了密码子偏向性分析。此外,发现了1个酰胺化位点和1个依赖于cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,可能与病毒的侵染机制有关。展开更多
目的对分离的人博卡病毒WLL-1株进行全基因组测序和生物信息学分析。方法运用NCBI提供的blastp分析各编码蛋白质的同源性;用SIB提供的ProtParam和ScanProsite推测计算蛋白质的各种物理特性参数。蛋白进行结构域分析采用SIB提供的ScanPro...目的对分离的人博卡病毒WLL-1株进行全基因组测序和生物信息学分析。方法运用NCBI提供的blastp分析各编码蛋白质的同源性;用SIB提供的ProtParam和ScanProsite推测计算蛋白质的各种物理特性参数。蛋白进行结构域分析采用SIB提供的ScanProsite。对具有同源序列和无同源序列的蛋白分别采用SwissProt和Scratch Protein Predictor预测其三级结构。蛋白质功能分析采用CBS Prediction Servers提供的ProtFun软件。结果WLL-1病毒株与其它微小病毒不存在亲缘关系,与目前报道的其他几株人博卡病毒有高度同源的基因组序列。WLL-1病毒株与其它已报道的病毒株有一定的进化距离,具有一些独特的突变位点。在NS1蛋白中发现调节DNA复制的超家族3结构域,在衣壳蛋白VP1、VP2中发现了在病毒的自组装中起重要作用的"β桶"拓扑基序。发现NP1蛋白具有多个N-糖基化及磷酸化修饰位点。结论经基因顺序分离病毒为人博卡病毒,这些位点参与病毒基因的翻译调控。展开更多
为研究大熊猫轮状病毒(Giant Panda Rotavirus,GPRV)CH-1株外衣壳蛋白VP7基因的结构及功能,用MA-104细胞(恒河猴胎猴肾细胞)增殖GPRV,提取总RNA,运用RT-PCR扩增VP7基因,并测序,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果显示...为研究大熊猫轮状病毒(Giant Panda Rotavirus,GPRV)CH-1株外衣壳蛋白VP7基因的结构及功能,用MA-104细胞(恒河猴胎猴肾细胞)增殖GPRV,提取总RNA,运用RT-PCR扩增VP7基因,并测序,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果显示成功获得了长1042bp的GPRV VP7蛋白基因(GenBank登录号GU188284)。经生物信息学分析,此序列包含1个981bp的完整开放阅读框,编码326个氨基酸;预测GPRV VP7蛋白理论相对分子质量为37354.8u,等电点为4.76,半衰期为30h,不稳定系数为26.71,总平均亲水性为-0.015,疏水性介于-2.344~3.567;1—24位氨基酸可能是信号肽序列;跨膜结构分析表明VP7蛋白有2个跨膜区,其N端和C端都位于病毒膜外区;抗原表位预测显示VP7蛋白有12个抗原决定簇;结构预测显示其可能包含2个N-糖基化作用位点,5个蛋白激酶C磷酸化作用位点、4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点、1个酪氨酸激酶磷酸化作用位点、4个N-豆蔻酰化位点、1个原核膜脂蛋白脂附着点和1个革兰氏阳性球菌表面蛋白‘锚’六肽。系统进化树分析显示GPRV VP7基因与人A组轮状病毒VP7基因的进化距离最近。本研究成功获得了GPRV VP7基因,为今后研究此基因的生物学功能以及建立该病毒的诊断方法奠定基础。展开更多
文摘本文运用RT-PCR方法克隆了黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)湖南邵阳株系的基因组MP(CGMMV-HuNSY movement protein)片段,测序并进行了分析。结果显示,片段全长共有803bp(KC684977),编码由264个氨基酸组成的蛋白质,推测分子量约28.87kD,理论等电点pI为9.06,ProtParam预测显示为不稳定蛋白,与已报道的辽宁分离物病毒的MP作比较,核苷酸相似性为99.6%,氨基酸相似性为98.9%;湖南邵阳株系CGMMVMP蛋白无高度卷曲螺旋部位,有跨膜结构区域,该部位表现为疏水性,可能为蛋白互作位点;磷酸化位点均匀分布于整个多肽链中,存在5个主要的B细胞抗原表位预测位点;对烟草花叶病毒属病毒MP氨基酸序列进行了motif查找,发现了该属病毒氨基酸序列的3个保守区段,还进行了密码子偏向性分析。此外,发现了1个酰胺化位点和1个依赖于cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,可能与病毒的侵染机制有关。
文摘目的对分离的人博卡病毒WLL-1株进行全基因组测序和生物信息学分析。方法运用NCBI提供的blastp分析各编码蛋白质的同源性;用SIB提供的ProtParam和ScanProsite推测计算蛋白质的各种物理特性参数。蛋白进行结构域分析采用SIB提供的ScanProsite。对具有同源序列和无同源序列的蛋白分别采用SwissProt和Scratch Protein Predictor预测其三级结构。蛋白质功能分析采用CBS Prediction Servers提供的ProtFun软件。结果WLL-1病毒株与其它微小病毒不存在亲缘关系,与目前报道的其他几株人博卡病毒有高度同源的基因组序列。WLL-1病毒株与其它已报道的病毒株有一定的进化距离,具有一些独特的突变位点。在NS1蛋白中发现调节DNA复制的超家族3结构域,在衣壳蛋白VP1、VP2中发现了在病毒的自组装中起重要作用的"β桶"拓扑基序。发现NP1蛋白具有多个N-糖基化及磷酸化修饰位点。结论经基因顺序分离病毒为人博卡病毒,这些位点参与病毒基因的翻译调控。