伪狂犬病病毒宿主关闭蛋白的基因克隆及结构分析

为研究伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvires ,PRV)UL4 1基因编码的病毒宿主关闭蛋白 (VHS)的结构与功能 ,通过PCR扩增得到含UL4 1基因完整编码区的 1174bp片段 ,将该片段克隆到表达载体pGEX KG中GST下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中实现了GST VHS融合蛋白的高效表达 .序列分析发现VHS蛋白具有 4个保守区 ,并且第 3个保守区与核酸内切酶结构域FEN 1(1A76 )高度同源 .PROSPECT软件预测的伪狂犬病病毒VHS蛋白三维结构中含有 10个α螺旋和 2 2个β折叠 ,与单纯疱疹病毒Ⅰ型的VHS蛋白三维结构十分相似 .

VHS蛋白,一种具有mRNA剪切活性的多种功能蛋白质

单纯疱疹病毒UL41基因编码的病毒宿主关闭蛋白(VHS蛋白)是一种核酸酶,具有mRNA剪切活性,可引起宿主细胞蛋白质合成的快速关闭。通过干扰IFN-α/β介导的抗病毒免疫反应、降低宿主细胞MHCⅠ和MHCⅡ类分子的表达、减少免疫系统中病毒抗原的提呈以及抑制宿主先天免疫反应等,VHS蛋白在α疱疹病毒的发病机制和免疫逃避过程中发挥重要作用。

马立克病病毒宿主关闭蛋白pUL41多克隆抗体的制备及应用

为了研究马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)宿主关闭蛋白pUL41的表达,制备了特异性多克隆抗体。首先,对MDV pUL41氨基酸序列进行生物信息学分析,发现245~345 aa区段最适合表达抗原。通过PCR扩增部分UL41基因序列,构建原核表达载体pET-UL41s-SUMO,转化感受态大肠杆菌后进行诱导表达,表达产物纯化后免疫日本大耳白兔,获得多克隆抗体。通过间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测抗体特异性及评估pUL41蛋白的表达属性。结果显示,菌液经0.8 mmol/L IPTG诱导4 h后,截短蛋白pUL41s大量表达,分子质量为28 ku。间接ELISA测定的抗血清效价达1∶128000。IFA和Western-blot试验表明,该抗体特异性良好。用PAA和ACV处理感染的细胞后,p UL41蛋白表达明显受到抑制,表明pUL41蛋白是MDV的晚期基因编码产物。本研究为今后探索MDV pUL41蛋白与宿主分子的潜在相互作用提供了必要的试验材料和数据积累。