A型口蹄疫病毒AF72株病毒样颗粒制备条件优化及鉴定

为了制备A型口蹄疫病毒AF72株病毒样颗粒,本研究通过优化IPTG浓度、诱导时菌液D600值、诱导温度、诱导时间来提高目标蛋白可溶性表达量,在特定酶切组装液中组装颗粒并调整组装液成分以提高其在体外的组装率,利用SDS-PAGE、蔗糖密度梯度离心、动态光散射、DAS-ELISA、透射电镜等多种方法对其进行鉴定。结果显示,经SDS-PAGE鉴定,VP0、VP1、VP3三条带均存在且符合目的条带大小,纳米粒径在30 nm左右符合口蹄疫病毒粒子大小,DAS-ELISA鉴定VP0、VP1、VP3在体外成功组装成病毒样颗粒,电子显微镜也拍出部分病毒样颗粒。上述结果表明,A型口蹄疫AF72株病毒样颗粒成功制备,为后续建立检测口蹄疫病毒中和抗体的液相阻断ELISA奠定了基础。