海南地区输血传播疾病病毒核酸检测窗口期残余风险评估

目的分析11年来海南地区无偿献血人群核酸检测(NAT)结果、评估HBV、HCV和HIV的NAT检测后残余风险。方法收集本中心2012年1月-2022年12月的无偿献血者NAT检测结果数据,利用新发感染率-窗口期残余风险模型对献血者进行HBV、HCV和HIV窗口期残余风险评估。结果2012年1月-2022年12月,海南地区无偿献血者捐献的血液中,来自初次献血者的占比45.02%(522684/1161042)、重复献血者(含固定献血者)占54.98%(638358/1161042),固定献血者占30.48%(354227/1162042);NAT总阳性率为0.19%(2151/1161042);NAT检测后HBV窗口期残余风险为62.54/百万,HCV残余风险为0.431/百万,HIV残余风险为0.791/百万。结论海南地区无偿献血者开展NAT检测明显降低HCV残余风险,输血传播HBV、HCV、HIV的窗口期残余风险处于较低的水平。

基于核酸适体LYGV1c的酶联吸附法检测石斑鱼虹彩病毒感染

【目的】利用核酸适体LYGV1c构建可快速、准确识别石斑鱼虹彩病毒(Grouper iridovirus Guangxi strain,SGIV-Gx)感染的酶联吸附法(Aptamer LYGV1c-based enzyme-linked apta-sorbent assay,LYGV1c-ELASA),为提高水产疫病检测及防控效率提供理论支持。【方法】基于生物素标记的LYGV1c(Bio-LYGV1c)开发核酸适体酶联吸附法(LYGV1c-ELASA)检测SGIV-Gx,通过对Bio-LYGV1c特异性、灵敏性、稳定性等实验评估其检测性能。通过珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂)SGIV-Gx感染试验进行活体验证,同时用荧光定量PCR(qPCR)测定衣壳蛋白基因(MCP)的表达,与LYGV1c-ELASA进行比较,验证该酶联吸附法检测的可信度。【结果】LYGV1c-ELASA的方法可特异性地识别SGIV的感染,Bio-LYGV1c识别SGIV感染的最适工作浓度为500 nmol/L,最适孵育时间为20 min,最适结合温度为4~28℃,LYGV1c-ELASA最低检测限为5×103 mL-1。活体验证结果表明,随着注射的SGIV-Gx浓度的升高,LYGV1c-ELASA检测出的石斑鱼体内病毒450 nm处的光密度(OD450)的值升高;qPCR结果表明,SGIV-Gx的MCP的表达量升高,与LYGV1c-ELASA检测结果相一致。【结论】建立的LYGV1c-ELASA技术不仅可用于体外检测,同时也适用于活体检测。LYGV1c-ELASA技术可实现对石斑鱼养殖过程中石斑鱼虹彩病毒病的快速诊断、实时监控。

猪伪狂犬病毒荧光重组酶介导核酸扩增快速检测方法的建立与应用

【目的】基于荧光重组酶介导核酸扩增(Recombinase-aided amplification,RAA)技术,建立一种猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)快速检测方法。【方法】根据PRV gE基因序列,设计特异性引物及探针,优化扩增体系,建立PRV荧光重组酶介导核酸扩增检测方法,检验其特异性、敏感性和重复性,应用该方法对临床样品进行检测。【结果】该方法在43℃恒温反应23 min即可完成PRV核酸扩增,最低检出限为111 copies·μL^(-1);与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemicdiarrheavirus,PEDV)、猪轮状病毒(Porcinerotavirus,PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)、猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)均无交叉反应。重复性试验显示,组内和组间变异系数均小于5%;40份临床样品检测结果显示PRV阳性率为15%(6/40),检测结果与常规聚合酶链式反应(PCR)一致。【结论】成功建立了简便快速、高效准确的PRV实时荧光RAA检测方法,为PRV的快速检测和流行病学调查提供了新的检测手段。

乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品的研制

目的建立乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对24份病原体培养物的复核、确证,全基因组测序及基因分型,组成乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品由10份阴性、14份阳性、1份最低检出限和1份精密度样品组成。质量标准为10份阴性参考品应均检出阴性;14份阳性参考品应至少检出13份阳性;精密度考品重复检测10次,要求均为乙型脑炎病毒阳性,且其检测值的CV应不大于5.0%;最低检出限参考品要求1∶102倍稀释及以上浓度时应为乙型脑炎病毒阳性。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论该参考品可用作乙型脑炎病毒核酸检测试剂的质量控制及评价。

酶联免疫吸附法与核酸检测技术在血站血液标本乙肝病毒筛查中的应用

目的探究酶联免疫吸附法(ELISA)与核酸检测(NAT)技术在血站血液标准乙肝病毒(HBV)筛查中的应用。方法选取2022年1月—2022年12月血站采集的血液标本12282份作为研究对象,所有标本均接受ELISA、NAT检测,以电化学免疫发光法(ECLIA)检测结果作为金标准,对两种检测方法的检测结果做一致性分析,并比较两种检测方法的窗口期、准确度、灵敏度、特异度2、阳性率、漏诊率差异,比较不同HBV感染状态患者HBV-DNA阳性率差异。结果ELISA检测HBV的窗口期高于NAT(P<0.05),准确度、灵敏度低于NAT,漏诊率高于NAT(均P<0.05);ELISA、NAT检测HBV的特异度、阳性检出率比较,无明显差异(均P>0.05);大三阳的HBV-DNA阳性率均高于小二阳、小三阳(均P<0.05);小二阳、小三阳两者的HBV-DNA阳性率比较,无差异(P>0.05)。结论ELISA与NAT均可良好应用于HBV检测,且NAT具备更高的准确度、灵敏度和更低的漏诊率,可良好反映HBV的传染性,是ELISA的有效补充。

基于变性泡介导的加速链交换扩增技术在新型冠状病毒核酸检测中的性能分析

运用变性泡介导的加速链交换扩增技术,建立一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测的新方法。收集潍坊市第二人民医院检验科1492例疑似SARS-CoV-2样本,以荧光定量PCR结果为参考,计算ASEA-SARS-CoV-2核酸检测试剂盒检测新型冠状病毒样本结果的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果表明:ASEA可在30min内完成核酸扩增,检测限为1000拷贝·mL^(-1)。敏感性为96.7%,特异性为99.9%。该方法可在30min内检测SARS-CoV-2,而之前报道的传统qPCR方法需要数小时。建立了一种基于变性泡介导的加速链交换扩增技术检测新型冠状病毒的新方法。

丙型病毒性肝炎抗体检测与HCV高敏核酸检测对病毒性丙型肝炎的筛查价值研究

目的通过对本院2019年1月至2022年9月需进行手术、输血或其他侵入性医疗服务的住院患者的HCV血清学抗体及高敏HCV RNA筛查结果进行回顾性分析,探讨丙型病毒性肝炎抗体检测与HCV高敏核酸检测对病毒性丙型肝炎的筛查检测价值。方法对本院相关住院患者进行Elecsys Anti-HCV II或(和)高敏HCV RNA检测,统计分析其检测结果。结果HCV血清学抗体检测22443人次,阳性率为0.68%,阳性COI中位数为38.4(1.0~165)。高敏HCV RNA检测34628人次,阳性率0.30%,阳性病毒载量中位数为1.00×10^(6)IU/mL(3.50×10^(1)~4.00×10^(7)IU/mL)。两种方法学均显示45~59岁人群阳性率显著高于其他人群(P<0.001)。两种检测有重合的样本共17785人次,HCV抗体血清学阳性率为0.70%。高敏HCV RNA阳性率0.22%,如以高敏HCV RNA为丙型肝炎现症感染的标准,HCV抗体血清学检测HCV现症感染的灵敏度为100.00%(95%CI 89.09%~100.00%),特异性为99.52%(95%CI 99.41%~99.61%),现症感染阳性预测期PPV为32.00%(95%CI 23.82%~40.18%),阴性预期值为100.00%。HCV抗体血清学检测COI值与高敏HCV RNA检测的病毒载量无线性相关性,COI<10和COI>100的HCV RNA阳性率低。结论HCV抗体检测和高敏HCV RNA均为有效的丙型肝炎筛查手段,需进一步加强对重点人群的丙型肝炎感染管理。

核酸等温扩增技术在病毒检测中的应用

病毒是引发人类疾病的主要病原体之一.传统的聚合酶链式反应(PCR)技术虽然被广泛应用于病毒分子诊断,但其对温度的要求较为严格,限制了其在现场诊断中的应用.为了满足现场快速诊断的需求,核酸等温扩增技术得到快速发展,其无需热循环,可以在恒定温度下实现核酸扩增,可适应不同的应用场景.本文综合评述了等温扩增技术在病毒检测领域的最新进展,从病毒样本采集、核酸提取、等温扩增检测等几个方面分别进行阐述,探讨了酶辅助等温扩增技术、无酶等温扩增技术以及与多体系串联的级联扩增技术的原理、关键参数及其病毒检测应用,并对比了市场上相关试剂盒的特点.此外,讨论了当前核酸等温扩增技术在病原体检测应用中面临的一些难题,如提取效率、稳定性和成本等,提出了未来的发展方向,为进一步改善现场诊断效率提供了新的思路.

预测澳大利亚用HIV和Clive R HCV核酸检测(NAT)筛选献血员的结果准确性的3种病毒风险模型及将来应用HCV NAT的前景

背景 在发达国家,风险模型现在是用以评估献血中病毒传播的剩余危险度的最常用工具,而评价风险模型准确度的方法之一,是在运用一种新的筛选方法后,测量与用模型预测的结果。本文的主要目的是,用三种已发表的模型预测在澳大利亚应用HIV和HCV NAT的结果后,评估其预测的准确性。设计和方法 作者回顾性分析澳大利亚 2000年和 2001年献血者病毒筛选资料,应用三模型分析这些资料,估计病毒传播的危险度。

实时荧光定量PCR检查在献血者乙型肝炎病毒核酸检测中的应用

目的探究献血者乙型肝炎病毒(HBV)核酸检测中,实时荧光定量PCR检查的应用价值。方法选取2022年10月至2023年9月宁德市中心血站10403份献血者标本,对其进行乙型肝炎病毒检测。ELISA检测用A、B两种不同试剂进行初检、复检,对检测阴性的血液标本进一步行核酸检测。结果经ELISA检测,A试剂初检乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性率为0.57%(59/10403);B试剂复检HBsAg阳性率为0.65%(68/10403)。对阴性血液标本进一步核酸检测,A试剂初检HBsAg阴性标本的阳性率为0.261%(27/10344);B试剂复检HBsAg阴性标本的阳性率为0.174%(18/10335)。结论献血者HBV检测使用核酸检测有助于提高血液筛查的准确性,保障用血安全。

新型冠状病毒核酸检测复阳患者102例分析

目的分析新疆乌鲁木齐市新型冠状病毒肺炎(COVID-19)核酸检测复阳患者的临床特征。方法2020年9月至2021年10月,乌鲁木齐国际医院健康管理中心对本土742例COVID-19患者(2020年7~10月)进行随访,选取其中102例核酸检测复阳患者,收集临床资料进行回顾性分析。结果SARS-CoV-2复阳率13.75%。其中男性39例,女性63例,平均年龄36.89岁。首次住院分型:轻型20例,普通型64例,重型+危重型3例,无症状感染者15例。出院后至复阳平均19.04天。合并基础疾病:高血压病11例,糖尿病8例,冠心病4例,慢性支气管炎+哮喘4例,恶性肿瘤2例。实验室检查,血常规淋巴细胞计数及比例降低4例,其余生化指标无明显异常。恢复期胸部CT多表现为胸膜下磨玻璃渗出、胸膜下小结节、纤维索条、纤维灶,多在发病1-2个月后基本吸收。IgM抗体在出院2月后转阴,IgG抗体水平随出院时间的延长逐渐下降,至出院7月时稳定。复阳患者中,N基因单靶标阳性28例(27.4%)。复阳患者中相当一部分核酸检测间歇性阳性直至转阴。复阳患者共居人员随访期间未发现感染病例。结论复阳患者常合并基础疾病。核酸检测相当一部分为单靶标阳性,呈间隙性阳性直至转阴。IgG抗体水平较急性期未出现4倍及以上升高。胸部CT纤维化病灶多在发病后1-2月后吸收好转。复阳患者可能处于新冠病毒感染后恢复期,并不具有传染性。

血站酶联免疫检测技术与核酸检测技术在乙肝病毒筛查中的应用比较

探讨血站酶联免疫吸附检测技术与核酸检测技术在乙肝病毒筛查中的应用效果差异。方法 本研究选取的研究中心为呼伦贝尔中心血站,选取的对象为在血站进行乙肝病毒筛查的献血者100例,收集的周期为一年即2022年6月份至2023年的6月份。所有献血者收集基本信息后进行血液采集,分别采取酶联免疫吸附法和核酸检测法进行乙肝病毒的筛查,所有献血者筛查结束后进行结果统计分析,本研究采用SPSS23.0数据分析软件对结果进行统计,统计的指标包括不同检测技术在乙肝病毒筛查中的诊断效能,灵敏度、特异度,并分析不同检测技术筛查窗口期、漏诊率等。结果 在100例献血者中,采用酶联免疫吸附法检测的乙肝病毒表面抗原阳性有2份血液样本,而采用核酸技术检测的乙肝病毒表面抗原阳性有6份血液样本,两种检测方法的阳性诊断率分别为2.0%和6.0%;追踪1个月后,采用酶联免疫吸附法检测的诊断灵敏度为68.37%、特异度为75.61%,而核酸检测技术在乙肝病毒中的诊断灵敏度为87.56%、特异度为90.38%;两种检测技术在检测抗原中的窗口期分别为29.67±1.05d和24.52±1.01d,而在检测乙肝病毒中的漏诊率则分别为3.0%和1.0%;与酶联免疫吸附检测技术比较,核酸检测技术在乙肝病毒表面抗原中的阳性诊断率明显更高(P<0.05),诊断灵敏度、特异度明显更短,窗口期和漏诊率均明显更低(P<0.05)。结论 两组目标检测方法在目标病毒中的应用效果存在明显差异,且核酸检测法效果更佳,在目标病毒检测及感染预防中的应用更具有临床推广的价值。

荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果分析

目的分析浅析荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果。方法在2021年5月至2022年11月期间,120例流感病毒感染样本进行研究。对这些样本的流感病毒RNA进行了核酸抽提,并利用PCR实时荧光定量技术进行检测以评估其效果。结果运用该技术检测到乙型流感病毒44例,甲1型40例,以及甲3型36例。所有检测结果均符合分子生物学操作的质控标准,合格率达到100.0%。结论实时核酸PCR技术在临床流感病毒检测中被广泛应用。PCR实时荧光定量检测法在流感病毒核酸检测中的表现精确且迅速,适宜作为应对突发公共卫生事件的首选检测手段。

婴幼儿呼吸道感染中尿液巨细胞病毒核酸检测的临床意义

研究婴幼儿呼吸道感染中尿液巨细胞病毒核酸检测的意义。方法 选取的研究时间是2023年02月~2024年02月,研究对象为79例呼吸道感染患儿和79名健康体检婴幼儿,分别纳入观察和对照组别中,所有研究对象均进行巨细胞病毒核酸检测,分析监测结果。结果 (1)巨细胞病毒核酸检测结果显示,有27例阳,阳性率为34.18%,比对照组的阳性检出率22.78%更高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)巨细胞病毒核酸检测阳性患儿按照相关治疗标准对症治疗,均好转出院。结论 巨细胞病毒核酸检测在儿童呼吸道感染早期检测中,有较高的临床应用价值,可以提高阳性检出率,能够促使巨细胞病毒核酸检测阳性患儿尽早得到科学的治疗,对疾病预后改善有重要的意义。

化学发光法与核酸检测法对疑似乙肝人群乙肝病毒的诊断价值

目的:探讨化学发光法与核酸检测法对疑似乙肝人群乙肝病毒的诊断价值。方法:选取2020年12月31日至2023年12月31日期间于本院就诊的疑似乙肝患者60例作为研究对象。所有研究对象入院后均采用化学发光法与核酸检测法对乙肝病毒进行检测。以肝脏穿刺活检结果为“金标准”,比较化学发光法与核酸检测法对乙肝病毒单独、联合诊断结果、诊断效能。结果:经肝脏穿刺活检结果显示,60例疑似乙肝人群中阳性35例,阴性25例。经化学发光法检查显示,阳性25例。经核酸检测法检查显示,阳性24例。经联合诊断结果显示,阳性34例。化学发光法与核酸检测法联合诊断灵敏度为88.57%、准确度为88.33%,显著高于单独化学发光法检查(灵敏度为65.71%、准确度为76.67%)及核酸检测法(灵敏度为60.00%、准确度为71.67%),联合检测的漏诊率为11.43%,显著低于化学发光法检查的34.29%及核酸检测法检查的40.00%(P<0.05)。结论:化学发光法联合核酸检测法可提高疑似乙肝人群血液标本乙肝病毒诊断准确率。

无偿献血者乙型肝炎病毒核酸检测的应用效果研究

研究无偿献血者监测乙型肝炎病毒(HBV)采取核酸检测法的效果。方法 选取90例无偿献血者血液样本为研究对象,均采取核酸检测以及酶联免疫吸附法检测(ELISA)进行HBV感染情况筛查,以金标试纸检测为HBV检测金标准,对比两种方式检测结果和金标准检测结果的差异,分析核酸检测的应用效果。结果 核酸检测阳性率34例(37.78%),阴性率48例(62.22%),漏诊率3例(3.33%),误诊率5例(5.56%),和金标准对比无统计学差异(P>0.05)。ELISA检测阳性率27例(30.00%),阴性率40例(44.44%),漏诊率10例(11.11%),误诊率13例(14.44%),和金标准对比存在统计学差异(P<0.05)。核酸检测符合率(91.11%),灵敏度(91.89%),特异度(90.57%),均显著高于ELISA检测结果[符合率(74.44%),灵敏度(72.97%),特异度(75.47%)],组间存在显著差异(P<0.05)。结论 在无偿献血HBV检测中采取核酸检测法更能提高检测结果准确率、特异度以及敏感度,受到HBV感染后存在窗口期的影响,ELISA检测存在误漏诊风险,血液具备一定传染能力,威胁到临床用血的安全性,而核酸检测法能够有效缩短HBV感染后的窗口期,提高HBV感染血液样本检出率,检测结果接近于金标准,在无偿献血检测HBV中使用具有明显优势。

核酸检测技术在无偿献血者乙型肝炎病毒筛查中的应用

研究核酸检测技术的实施价值,分析该措施在无偿献血者乙型肝炎病毒筛查中的效果,进而为后续筛查工作提供科学依据。方法 本次研究样本选取为梧州市中心血站检验科无偿献血者乙型肝炎病毒筛查者,样本数量为15300例,选取时间为2023年01月-2023年03月,分别进行核酸检测(NAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA),数据均纳入SPSS26.0系统,分析上述措施在疾病筛查中的价值。结果 15300例无偿献血者乙型肝炎病毒筛查者中,NAT阳性16例,ELISA阳性为2例;结果显示NAT阳性检出率高于ELISA(P<0.05)。结论 NAT的阳性检出率较高,可以实现疾病的早期诊断及治疗,对保障输血安全、预防控制输血传染病的传播起到非常重要的作用。

HBV、HCV、HIV血筛多中心研究免疫学灰区的核酸检测分析与临床特征研究

目的分析化学发光灰区标本的临床特征及核酸检测对化学发光灰区标本结果判断的指导性意义。方法收集2021年7月—12月全国不同地区的5家综合医院入院患者术前/输血前血源性传播疾病样本检测结果,对化学发光灰区检测结果的标本进行核酸检测结果及临床特征分析。结果5723例样本中总计检出HBV免疫灰区样本28例(占比0.49%),HCV灰区样本20例(占比0.35%)。经核酸检测验证,28例HBV灰区样本中,15例HBV样本核酸检测为阳性(占比53.5%),其HBcAb也均为阳性;13例HBV样本核酸检测为阴性(占比46.5%),其中HBcAb阳性4例。HBV与HCV免疫检测灰区在临床各个科室均有发现,出现HBV灰区样本最多的前三科室为骨科、妇科、泌尿科,灰区样本核酸验证假阳性最多的临床科室为妇科与骨科。HCV灰区样本最多的前三科室为泌尿、肾内、外科,且均为假阳性。HBV灰区样本患者临床诊断结果有35.7%(10/28)为肿瘤类疾病,HCV灰区样本患者临床诊断结果有40%(8/20)为肿瘤类疾病。结论化学发光法容易造成假阳性结果,应注意复检验证,且设置灰区并非必要。灰区样本可见于多个临床科室,具有一定的临床分布特征。核酸检测可以提高检测灵敏度并且更大限度保证结果的准确性,能够验证免疫检测灰区。

4例新型冠状病毒感染病例咽拭子与痰标本病毒核酸检测的比较

目的比较分析新型冠状病毒病例咽拭子与痰标本的病毒核酸检测效果。方法对4例新型冠状病毒确诊病例的咽拭子与痰标本分别进行人体细胞GAPDH管家基因、病毒ORF 1ab基因、N基因及S基因Real time RT-PCR核酸检测与比较。结果4例病例的咽拭子和痰标本中,人体细胞管家基因GAPDH均呈现明显典型的扩增信号曲线;病毒ORF 1ab基因、N基因及S基因核酸检测中,痰标本的扩增曲线信号均比咽拭子强,扩增曲线的CT值均低于咽拭子,在病例1和4表现更加明显,而病例4的咽拭子标本检测中,商品化试剂呈现阴性结果,而痰标本则呈现明显的阳性结果。结论在开展新型冠状病毒实验室核酸检测中,痰标本的病毒含量高于咽拭子标本,其检测效果优于咽拭子标本。