评价HIV-1抗病毒药物的重组假病毒法的建立及其初步应用

目的:探讨重组似病毒方法应用于评价抗病毒药物的可行性。方法:采用 pSG3△env/TZM-bl 系统,制备假病毒毒种,在不同细胞,不同重组假病毒接种量的条件下,血用重组假病毒法测定 AZT 的抗病毒效果,以此选择最适的细胞接种量、病毒接种量,砰价检测方法的重复性,用建立的假病毒检测法测定 AZT、3TC、d4T、ddI 的抗病毒效果。结果:细胞接种量对检测结果有一定的影响,最适细胞接种量为每孔10~4个细胞;重组假病毒接种量对检测结果没有明显的羞异;重复性检测结果显示,该方法的 RSD 为11.52%;用该法检测 AZT、3TC、d4T、ddI 的50%抑制浓度(IC_(50)值)分别为0.0074 μmol·L^(-1)、0.5312 μmol·L^(-1)、0.0868 μmol·L^(-1)、3.4364 μmol·L^(-1)。结论:重组假病毒法可用于评价抗 HIV-1约物,具有快速、简便的优点。

突发公共卫生事件下的紧急立法研究——以英国《新冠病毒法》为对象

对英国《新冠病毒法》的立法背景及主要内容进行介绍,并结合该法具有特色的紧急志愿服务制度,分析英国防疫失灵的影响因素。该法确立的制度与体现的法治精神具有一定借鉴意义,在疫情防控常态化的背景下,我国可完善相关法律,借鉴其紧急志愿者制度。

用逆转录病毒法制作鸡输卵管生物反应器的研究

本文综述了鸡的生物反应器和逆转录病毒法的研究 。

重组病毒法:一种快速检测HIV药物敏感性方法

目的建立一种快速检测所有HIV病毒株药物敏感性的新方法(重组病毒法)。方法用逆转录-聚合酶链法(RT-PCR)扩增HIV/AIDS患者血浆中的HIVRNA,得到全长HIV逆转录酶(RT)的编码序列,然后与无感染性的前病毒克隆pHIV△RTBstEⅡ经过同源重组产生活的、具有诱导合胞体(SI)表型的重组HIV,再用HelaCD4+细胞蚀斑减少法检测HIV对核苷类药物的敏感性。结果用这种方法检测了7株不同表型的HIV,重组病毒与原始HIV病毒具有相同的基因型,药物敏感性结果与标准化外周血单个核细胞(PBMC)培养法的结果相同。结论重组病毒法是一种快速、准确检测所有表型HIV病毒株的药物敏感性方法。

光照灭活病毒法对血浆成分的免疫活性及生物指标的影响

目的 探讨光照灭活病毒法对血浆成分的免疫活性及生物指标的影响.方法 采集44例经体检合格的献血浆者的新鲜血浆,分离处理后分为两试管,一试管对凝血因子水平及血糖进行测定,另一试管对血液生化指标及体液免疫和补体C3、C4水平进行测定,在可见光下,以ZBK-TBM-01仪器室温照射30min.结果 光照射30min后,血浆凝血因子活力较光照射前明显改善,结果有显著性差异(P<0.05);光照射前、光照射30min后,血浆电解质K+、Na+、CI-含量对比,结果无显著性差异(P>0.05);光照射前、光照射30min后,血浆免疫球蛋白IgG、IgA、IgM及补体C3、C4水平对比,结果无显著性差异(P>0.05);光照射前、光照射30min后,血浆葡萄糖、白蛋白含量对比,结果无显著性差异(P>0.05);光照射前、光照射30min后,血浆酶活性各指标对比,结果无显著性差异(P>0.05);光照射前、光照射30min后,pH值无显著性差异(P>0.05).结论 光照灭活病毒法对大多数血浆成分的免疫活性及生物指标影响不显著,值得进行深入研究和推广.

英国《新冠病毒法》主要争议与思考

尽管英国民众对《新冠病毒法》内容颇有微词,但通过快速立法通道制定的英国《新冠病毒法》为英国政府采取隔离、切断病毒传播链条等限制人身自由的措施提供了法律依据。借鉴英国的临时性快速立法制度,发挥我国成文法制度优势以及优先保障公共安全的法制传统,创新适合我国国情的临时性快速立法制度,为依法应对未来日趋频发的公共卫生突发事件创造条件。

流式病毒检测法的应用进展

流式病毒检测法(flow virometry,FVM)是一种利用流式细胞仪检测单个病毒颗粒及其特征的前沿技术。通过FVM,可以精确测量样本中完整病毒颗粒的浓度、表面靶抗原的丰富度以及相对直径等关键参数,进而实现对单个病毒颗粒的高效分析和表征。随着仪器设备、荧光染料和标记策略的不断发展和优化,FVM得到了广泛的应用和研究。该方法不仅被用于实现对单个病毒颗粒的精确分析,还被用于细胞外泌体和微囊泡的检测。本文总结了FVM的发展历程以及病毒等微颗粒的常用标记方法和应用领域,旨在为FVM在病毒学、免疫学、生物医学等研究领域的进一步应用提供参考和借鉴。

HSV/AAV嵌合病毒法制备rAAV/hFⅨ及其安全性检测

构建了由CMV启动子调控的人凝血因子Ⅸ小基因的重组腺相关病毒载体, 并通过HSV/AAV杂合辅助病毒的方法大量制备成重组腺相关病毒颗粒(rAAV/hFⅨ). 经Southern dot blot及QC-PCR法测定, 滴度达到3.6 × 1012 vg(病毒基因组)/mL. 将rAAV/hFⅨ病毒以7.5 × 1011 vg/只直接注射到血友病B小鼠股四头肌中, 检测到人Ⅸ因子最高表达量达到387 ng/mL血浆, 持续表达时间12周. 血浆中产生的抗体情况与表达曲线相吻合. 实验结果表明, 采用HSV/AAV杂合辅助病毒法能够有效解决AAV载体的大量制备问题, QC-PCR法检测重组腺相关病毒的滴度比传统的点杂交法更加快速准确. RT-PCR检测表明重组AAV中没有野生型HSV的污染, PCR检测表明重组AAV注射后, 重组AAV病毒仅存在于注射点附近的肌肉中, 未见扩散.

重组假病毒与活病毒法在评价抗HIV-1病毒药物中的比较

目的对比重组假病毒法与活病毒法在评价抗HIV-1药物中的效果。方法将pSG3△env质粒和带有ENV基因的质粒B01共转染获得重组假病毒。用重组假病毒分别与不同稀释度的药物共孵育，根据相对荧光单位的不同分析计算EC50、ED50。在P3实验室用活病毒分别与不同稀释度的药物共孵育，根据细胞病变程度的不同分析计算EC50。结果用重组假病毒法和活病毒法分别检测抗HIV-1药物奈维拉平（NVP），其EC50。分别是88．9nmol／L、89．5nmol／L，CV值分别是0和0．6％。用重组假病毒法和活病毒法分别检测抗HIV-1药物茚地那韦（IDV），其EC50。分别是0．36umol／L、0．23umol／L，CV值分别是0和60％。用重组假病毒法检测抗HIV-1药物可以定量计算出ED50，IDV和NVP的ED50分别是70．6nmol／L和0．62umol／L，CV值分别是14．3％和9．7％。结论重组假病毒法可以用于对抗HIV-1药物的评价。计算EC50时，重组假病毒法与活病毒法的结果相差不超过2倍，但活病毒具有生物危害，而重组假病毒法的重复性较好，并且还可以定量计算出药物的ED50.

以“毒”攻“毒”,一种通用的查病毒新方法

计算机病毒的危害众所周知,及时查到病毒尤其是新病毒,以防止其继续传播和破坏,并采取针对性的措施具有重要的意义.而对病毒知识稍有了解便知,常规的杀病毒软件是采用国际上普遍使用的特征值扫描法来查、杀病毒的.这种查找方法是建立对已知病毒了解的基础上,查到的病毒种类局限性很大.笔者在上机时,根据计算机的运行情况看,分明有病毒的存在,用常见的SCAN、KILL、KV200及CPAV等均查不到病毒的存在.因此研究新的查病毒方法迫在眉睫.

一种通用的硬盘分区及软件的防病毒方法

DOS作为一种开放的操作系统,给用户的使用提供了很大的便利,但同时也给病毒提供了活动的条件。如何保护自己的数据免受侵害,一直为许多人所关注。分析一下受感染的情况不难发现:被感染者多为应用软件,如DOS,WPS,C^(++)等的可执行文件,而用户自己的程序多为ASCII文件,不至于被感染,即使被感染了,只要重新编译,又可以得到干净的可执行文件。而现在的应用软件越来越大,被感染了以后如果没有有效的杀毒软件,那么就只能重新安装,因此花费很多的时间。所以我们的着眼点应该放在保护系统和应用软件上。 我们知道,一个硬盘可以有4个分区。根据这一点我们可以将软件分类存放在各分区上。假设第一个物理盘上有C∶和D∶两个逻辑盘,从分区信息表上可以知道C∶的结束磁道号。于是我们可以修改INT13H,如发现有程序试图对小于C∶盘结束磁道号的区域进行写操作。

超滤法去除抗乙肝转移因子中病毒工艺的验证

目的对超滤法去除病毒工艺进行验证。方法以猪细小病毒 (PPV)为指示病毒 ,观察用截留相对分子质量 (Mr)为 5 0 0 0的超滤膜在进压 0 .14MPa、回流压 0 .0 7MPa和进压 0 .2MPa、回流压 0 .1MPa条件下去除抗乙肝转移因子原液中病毒的效果 ,并以淋巴细胞提取液为供试品 ,在上述条件下超滤 ,用高效液相色谱法测定滤过液中各组分的Mr,以检查膜的完整性。结果PPV滴度为 6 .4logTCID50 /ml时 ,滤过液中未检测出PPV ,经盲传三代 ,亦未发现特异性细胞病变 ;滤过液中各组分Mr 均小于 10 0 0 0 ,表明超滤膜完整。

肌氨肽苷制备工艺及其病毒去除方法的验证

目的研究肌氨肽苷制备工艺并对超滤法去除病毒工艺进行验证。方法以家兔心脏和肌肉为原料,制得肌氨肽苷原液。并以猪细小病毒(PPV)为指示病毒,观察用截留相对分子质量为10 000的超滤器在进压0.12MPa、回流压0.05 MPa和进压0.20 MPa、回流压0.12 MPa条件下去除肌氨肽苷原液中病毒的效果,并以牛血清白蛋白为对照品,20%磺基水杨酸作为指示剂的条件下,对超滤膜的完整性进行验证。结果滤过液中未检测出PPV,经过盲传3代,也未发现特异性细胞病变;磺基水杨酸检测未变浑浊,表明膜完整性好,超滤设备可用。结论制备肌氨肽苷的方法可行,且所采用的超滤法去除PPV是1种有效去除病毒的方法。

慢病毒载体法制备遗传工程猴和小型猪的现状及应用前景展望

较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程大动物可以更深入地解析人类疾病,并可为器官移植和新药研发提供更充分的实验材料。基于慢病毒介导的转基因方法近几年已越来越多地被用来制备遗传工程猴和小型猪。与传统的原核显微注射方法和体细胞核移植法相比,慢病毒介导的转基因方法转基因效率高,操作更简单。因此,构筑基于慢病毒介导的转基因方法制备遗传工程猴和小型猪的技术平台将对生物医学研究产生巨大推动作用。

慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠

目的利用慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠,并建立转基因小鼠的技术平台。方法将携带mRFP基因的慢病毒注入ICR鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP转基因鼠。结果移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2只假孕母鼠,共获得仔鼠6只;利用体视荧光显微镜检测mRFP表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2只(R3和R4)鼠耳高表达mRFP,其余的弱表达mRFP(R1、R2和R5)或荧光强度(R6)与野生型ICR鼠无明显差别,而DNA水平检测证实,6只F0代中,5只(R1、R2、R3、R4和R5)基因组中整合有外源转基因hUb-mRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果。此外,mRFP转基因首建鼠基因组中整合的mRFP基因可稳定遗传和表达。结论建立了慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉(RNAi),并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础。

血凝抑制和病毒中和法在大流行流感疫苗临床血清学评价中的应用和比较

在大流行流感疫苗临床试验的免疫效果评价中,分别采用血凝抑制(HI)和病毒中和(VN)法检测血清中抗体滴度,并对结果进行比较。在中和试验中,分别以观察细胞病变法和血球凝集法确定中和法终点,两种方法得到的结果相近。376份血清(63.4%)以VN法和HI法检测获得结果相同。经统计学分析证明两种方法有很好的相关性,r值为0.85,HI 1∶40对应的VN滴度为1∶33。因此,在大流行流感疫苗免疫效果评价中,两种抗体检测方法有较好的一致性。

应用细胞病毒抑制法测定干扰素生物学活性

目的：应用细胞病毒抑制法进行干扰素生物学活性测定时,影响因素较多,掌握影响因素,可控制实验结果的准确性。方法：应用MEM培养基、WISH细胞、VSV病毒,进行干扰素生物学活性测定,应用倒置生物学显微镜进行实验观察,应用酶标仪进行实验结果的测定。结果：针对细胞状态、病毒滴度等影响因素,经过反复的实验摸索,掌握了影响干扰素生物学活性测定准确性的因素。结论：在进行此法实验时,操作者只要掌握各项影响因素,规范操作,干扰素的生物学活性测定结果可以控制在其标准活性的80%~150%范围内。

中国部分地区传染性法氏囊病病毒分子流病学调查

为调查我国鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的流行情况,从我国11个省(市、自治区)采集法氏囊病料,分离鉴定鸡传染性法氏囊病病毒20株,运用RT-PCR方法对分离株的VP2基因进行扩增、测序和序列分析。研究表明,20株分离毒株中有19株具有IBDV超强毒株的分子特征,即222A、256I、294I和299S,与我国IBDV超强毒Gx株的核苷酸同源率在96.7%～99.4%,推导氨基酸同源率在98.2%～100%。遗传进化分析表明,所有分离毒株具有共同的祖先。