禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较

为了从怀疑污染禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)的禽痘病毒(Fowlpoxvirus,FPV)活疫苗中分离病毒,将市场上购买的某些厂家的禽痘弱毒疫苗接种7日龄SPF雏鸡。在5d后采其抗凝血浆接种鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF),在连续传2代后,用REV特异性单抗做间接免疫荧光试验,确认REV感染,命名为JS0809。提取感染细胞的DNA,采用PCR扩增env基因。测序分析表明,该毒株的env基因开放阅读框同大部分REV毒株一致,为1 761 bp。JS0809的囊膜蛋白基因(envelope protein gene,env)与国内已发表株的同源性高达96.0%～99.%。相对而言,它与早年分离到的毒株的同源性只有96%～97.3%,但与近几年的分离珠的同源性则均高达99.5%～99.8%。它与整合进FPV野毒株中的全基因组REV的env基因同源性很高为99.8%,而与整合进FPV疫苗株中全基因组REV的env基因同源性较低仅为97.3%。本研究证实了在我国生产的某些FPV疫苗中存在REV污染,所污染的REV的env基因更接近最近的流行野毒,这是国内第一次报道从禽痘弱毒疫苗中分离到REV活毒。

CpG ODN对传染性腔上囊病病毒活疫苗免疫效果的影响

将120只来航系SPF鸡随机分成对照组、注射CpG ODN组、IBDV活疫苗点眼免疫组及IBDV活疫苗+CpG ODN免疫组,每组30只,于7日龄时对试验鸡进行初次免疫,21 日龄时进行加强免疫,28日龄时用IBDV野毒株攻毒。检测不同时间的IBDV特异性抗体效价、血液和脾淋巴细胞的Con A刺激指数(SI)。结果表明,CpG ODN处理后脾细胞的增殖转化能力强于血液淋巴细胞的增殖转化能力;CpG ODN的使用使血清中IBDV特异性抗体产生时间提前7 d,抗体效价升高;与对照组相比,仅用CpG ODN处理就可使1/3的鸡攻毒后迅速产生高效价(约1∶3 000)的特异性抗体,降低了发病率和死亡率,证明CpG ODN能增强IBDV活疫苗的免疫效果。

犬五联病毒活疫苗制备用犬肾细胞系的建库筛选与检定

以人类子宫颈癌细胞系Hela为阳性对照 ,以连传 3代的犬、猫肾原代细胞 (CKC、FKC)作为阴性对照 ,对来自国内外不同单位收集的另外 4株MDCK传代细胞系培养 2 5～ 6 7代的完整活细胞进行裸鼠致癌 /致瘤实验观察 ,筛选出致癌性极低、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的 2株MDCK细胞系用于制苗 ,并建立了相应的细胞种子库和工作库 ,供科研和生产使用 ,4年运转很好。不同代次MDCK细胞系染色体众数所占比率的相差率一般不超过 5 %～ 15 % ,结构畸变率一般为 0～ 3%。研究表明 ,MDCK细胞染色体遗传特征决定致瘤性质 ,并具有种属特异性 ,MD CK细胞不论核型如何 ,始终具有致癌性 ,但其致癌 /致瘤性差 (2 3/ 5 9) ,且一般致上皮源性恶性肿瘤 ,多为高中分化腺癌。降低制苗毒液中细胞系基因含量 ,完全可以将MDCK细胞系 (WB和H株 )用于犬五联苗生产。MDCK细胞超二倍体YB株和亚二倍体与超二倍体KA株不能用作病毒活疫苗培养基质。找出了MDCK细胞系的染色体变异率、软琼脂中克隆形成率、对植物凝集素的凝集性和在裸鼠体内形成癌肿的潜力之间的可能相关性 ,发现细胞系染色体数目增加、克隆形成率增高、凝集性增强 ,则致癌

鸡痘病毒活疫苗污染禽网状内皮组织增生症病毒的间接免疫荧光法检测研究

通过向无外源病毒污染的鸡痘病毒活疫苗中添加不同剂量的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),然后用间接免疫荧光法(IFA)进行检测,确定了该IFA方法的最低检出量为每500羽份疫苗中污染20 TCID_(50)的REV。使用该方法对国内16家企业生产的60批鸡痘病毒活疫苗进行了检验,结果显示2个企业生产的4批疫苗REV检测为阳性。随机选取5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染的检测结果的符合率为100%。

口服轮状病毒活疫苗的社区应用效果评价

目的探讨口服轮状病毒活疫苗在社区卫生服务中的应用效果,以提高预防接种率,促进社区卫生服务疾病预防工作。方法将在社区健康服务中心建立健康档案的2000名6月龄～3周岁的儿童随机分成服苗组和对照组,进行轮状病毒腹泻的发病情况比较。结果服苗组发病率为2.1%,同期对照组的发病率为8.4%,两者差异有统计学意义(P<0.01),且服苗组的发病程度明显低于对照组。结论口服轮状病毒活疫苗预防儿童轮状病毒腹泻效果显著。

新城疫病毒活疫苗的制备、活性和临床前安全性试验研究

目的 :探讨新城疫病毒活疫苗喷雾吸入剂的简便制备方法及其安全性。方法 :用 SPF种蛋传种、扩增病毒 ,经超速离心等方法提纯后制成疫苗 ;以血凝试验等方法测定其滴度和活性 ;按生物制品的要求进行安全性试验。结果 :本疫苗能保持较高的生物学活性 ,并能达到临床前安全性的内控质量标准要求。结论 :用本法制备供肿瘤临床试验用的 NDV活疫苗是可行的。

轮状病毒活疫苗在小儿急性腹泻社区防疫中的应用

目的探讨轮状病毒活疫苗口服在社区小儿急性腹泻中的效果。方法选择本社区小儿874例,根据知情同意的原则,将愿意口服轮状病毒活疫苗的儿童设为观察组,共358例,将不愿意服用轮状病毒活疫苗的儿童设为对照组,共516例。观察组口服轮状病毒活疫苗。比较两组急性腹泻的发病率、患病儿童的严重程度及病程等情况。结果观察组的发病率、重型病例例数、住院例数显著低于对照组,平均病程、平均住院天数短于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论轮状病毒活疫苗口服用于小儿急性腹泻的社区防疫,可以降低发病率、缩短病程、减少重症病例,且无明显的不良反应。

轮状病毒活疫苗预防轮状病毒腹泻的安全性及有效性观察

目的了解轮状病毒活疫苗预防轮状病毒腹泻的安全性及有效性。方法采用面访与自填式相结合的问卷以及电话调查方法,选择2008年—2013年间在大同市新和医院定期接种疫苗的7个月龄~3周岁健康婴幼儿287人及未接种疫苗的对照组207人,分别按年龄分为3组进行观察。结果接种组72 h后发生体温反应的男女间无明显性别差异、年龄无明显差异,且疫苗引起的体温反应较小;发生消化道症状的有7例。对照组发生反应的人数较少,仅为3例;但8个月后,接种组腹泻患病率明显低于对照组。结论口服轮状病毒活疫苗是预防轮状病毒腹泻安全、有效的手段。

荧光抗体技术检测病毒活疫苗中衣原体的污染

本试验将新城疫（ＮＤ）疫苗与Ｂ１１００１株鹦鹉热衣原体混合，用ＮＤ阳性血清中和，每个接种剂量最终含ＮＤ疫苗１０羽份，衣原体浓度分别为１０^（－９）、１０^（－２）、１０^（－３）、１０^（－４），分组接种ＳＰＦ鸡胚进行测定，检测了９株１０^（－４）稀释的衣原体。并以Ｂ１１００１株衣原体试验性污染５批ＮＤ疫苗作检测。试验中取卵黄囊膜涂片，用中科院动物所提供的衣原体萤光抗体试剂盒进行检测，并辅以姬姆萨染色法检查，结果表明用荧光抗体染色可以检查到疫苗中衣原体或包涵体的存在，与姬姆萨染色法基本一致。

细胞和病毒活疫苗中支原体污染的PCR检测方法建立与应用

【目的】在生物学研究及生物制品生产中易发生支原体污染,针对我国当前支原体检验方法在时效性和敏感性上的不足,建立一种简便快速、特异敏感的支原体检验PCR方法。【方法】从SILVA数据库下载包含全部细菌、古菌和真菌的核糖体rRNA小亚基(16S/18S, SSU)参考序列的库文件SILVA_123_SSURef,从中提取全部支原体序列,经去重复后得到181条(种)支原体(包括139个已分类的单一种类和42个未分类的支原体)的16S rRNA序列,经比对后选取高变区V6到V9为检测目标区段,设计筛选出表现最佳的检测引物,建立检测支原体的通用PCR方法。选取12种常见的支原体或2种甾原体作为待检样品对该PCR方法进行检测范围验证;取6种不同动物来源的常用传代细胞和3种常见细菌进行特异性验证;选取了5种最常见的支原体和1种甾原体进行敏感性试验;并将其与经典培养法一同对17批(种)动物病毒活疫苗(分别用于6种动物)和24份8种细胞培养物样本进行对比检测以评价其实际应用效果。【结果】建立了一种通用的支原体PCR检测方法,检测引物由2条上游引物(5′-GCAAARCTATRGARAYATAGYVGAG-3′和5′-GCAAAGGCTTAGAAATAAGTTCGGAG-3′)和1条下游引物(5′-CCARCTCYCATRGTKTGACGG-3′)组成,引物配比为3﹕1﹕4,最佳退火温度为56℃。采用该PCR方法对14个较常见的支原体种类进行检测,结果均能扩增出396—413 bp大小的特异性条带,表明该方法的检测范围符合检测要求;对6种动物传代细胞和3种常见细菌进行检测,结果均未扩增出特异性条带,表明其特异性良好;灵敏度测定结果表明该PCR方法的检测下限可达20—200 CCU的活菌,对应的核酸为1.5—15.0 pg;对共计17批病毒活疫苗和24份细胞样品的检测结果与培养法检测结果基本一致,表明本研究建立的支原体PCR检测方法与培养法有很好的一致性,而且敏感性更高。【结论】建立的支原体PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、简单快速,为细胞及病毒活疫苗中可能的支原体污染提供了一种准确可靠的快速检测方法。

高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查

目的探索高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查的可行性。方法采用高压静电检漏法对口服轮状病毒活疫苗包装密封性进行检查,并观察此方法对疫苗有效成分的影响。结果口服轮状病毒活疫苗经18 000 V和14 000 V高压静电检测显示,导电电流值均极低;病毒滴度结果均在6.0~6.5 lg CCID_(50)/mL之间,热稳定性试验病毒滴度下降值在0.5~1.0 lg之间,均符合质量标准,且与对照组(A组和B组)检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论高压静电检漏法用于口服轮状病毒活疫苗包装无损密封性检查是可行的。

PRRS嵌合病毒活疫苗(PC株)和灭活疫苗联合免疫母猪应用试验

为验证猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)嵌合病毒活疫苗(PC株)和灭活疫苗联合应用于母猪的免疫效果,在天津市某PRRS阳性猪场,对部分母猪实施了两种疫苗联合免疫试验,利用RT-PCR和间接ELISA方法进行病毒和免疫抗体检测。结果显示:接种疫苗后,试验母猪精神、食欲和体温均正常,猪肛拭子和饲养环境样品中均未检测到病毒;免疫后14~70 d,试验母猪PRRS抗体阳性率均为100%;免疫后42 d,试验母猪的抗体IRPC平均值仍维持在较高水平,且免疫后14 d,2个试验组变异系数分别下降31和44个百分点;试验母猪所产仔猪的均匀度、活泼程度均高于对照组。结果表明,PRRS嵌合病毒活疫苗(PC株)和灭活苗联合免疫安全有效,不仅可以很好地诱导机体产生正常的免疫反应,而且还可以提高猪群抗体的整齐度且无排毒风险,免疫保护期较长。本研究为阳性猪场的PRRS防控提供了有效免疫方案。

改变体位在喂服轮状病毒活疫苗中的应用

口服轮状病毒活疫苗是用于预防婴幼儿A群轮状病毒所致的小儿秋季腹泻的一种有效方法。确保疫苗的接种效果是预防接种护士工作中的重点,最近本科护理人员为提高口服轮状病毒疫苗的接种效果,

口服轮状病毒活疫苗预防轮状病毒肠炎效果评价

目的评估口服轮状病毒活疫苗对本地对婴幼儿轮状病毒肠炎的预防效果。方法选择2007年5—8月在本院预防保健科定期预防接种的6个月～3岁健康婴幼儿1248例,分为两组。口服轮状病毒活疫苗742例为服苗组,未服该疫苗506例为对照组。服疫苗2个月后连续观察1年,观察轮状病毒肠炎发生情况。同时对2007—2008年在本院确诊的轮状病毒肠炎患儿进行回顾性调查,把发病前2个月～1年内口服过轮状病毒活疫苗者36例列为服苗发病组,按同性别、同年龄(月龄差异不超过2个月)、同喂养方式配对选择病例72例为对照发病组,比较两组住院天数。结果服苗组轮状病毒肠炎发病率为0.9%,明显低于对照发病组的5.5%(P<0.05);在回顾性调查轮状病毒肠炎病例中,服苗发病组住院天数为(4.33±0.86)d,明显少于对照发病组的(5.61±1.07)d(P<0.05)。结论口服轮状病毒活疫苗能有效预防轮状病毒肠炎,能明显缩短轮状病毒肠炎患儿病程,应在本地区大力推广。

口服轮状病毒活疫苗在社区防疫中的应用价值探讨

目的:探讨口服轮状病毒活疫苗在社区防疫中的应用价值,以促进社区防疫工作,提高预防接种率。方法:选择2008年10月～2009年9月在我社区防保所建立健康档案的儿童326例,根据知情同意原则分为对照组和观察组,观察组儿童174例,给予口服轮状病毒活疫苗;对照组儿童152例,未给予口服轮状病毒活疫苗。随访1年,观察两组儿童的轮状病毒腹泻发病率、平均患病时间、严重病例和住院病例。结果:观察组儿童轮状病毒腹泻发病率、平均患病时间、严重病例和住院病例等指标明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:采用口服轮状病毒活疫苗预防儿童轮状病毒腹泻可以取得显著的效果,有较好的应用前景。