禽用疫苗病毒浓缩技术的研究

采用FILTRON中型盒式超滤系统，分别选用截留分子量为30，50，100及300K4种不同孔径的超滤膜，对NDV，AIV，EDS76V，IBV及IBDV共5种病毒抗原液进行了浓缩试验研究。结果显示，这4种孔径的超滤膜均可用于上述5种病毒液的浓缩，其病毒的截留率可达99．9％～100％；采用各种病毒浓缩液、未浓缩病毒液及超滤液制成各种相应浓缩苗、未浓缩苗及超滤液乳剂免疫试验鸡。试验证明，浓缩苗明显优于未浓缩苗，在病毒浓缩过程中均未出现有效抗原成分的丢失，其抗原性也未发生变化。

水体病毒浓缩条件的优化

病毒浓缩条件的优化是水环境病毒污染监测及灭活去除效率评价的基础,本文开发了在待浓缩水样中预先加入钠化蒙脱石吸附病毒以增加其沉降性能,并在优化絮凝条件下用聚合氯化铝絮凝沉淀蒙脱石钠的水体病毒浓缩方法。该方法对人为污染的脊髓灰质炎病毒(Poliovirus1,PV1)、烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)、大肠杆菌噬菌体(PhageofEcoli,E.cp)在闽江水、生活污水、自来水中分别有高于84.3%的浓缩回收率,说明该浓缩方法具有较广泛的适用性和应用前景,可为水体病毒污染监测及灭活去除评价提供一个简便、回收率高、成本低的浓缩方法。

大容量样本病毒浓缩HCV核酸检测方案的研究

目的对大容量样本中丙型肝炎病毒(HCV)进行浓缩提取,采用自行设计引物进行实时HCV荧光定量检测,验证病毒浓缩的效率以及病毒浓缩对检测的影响。方法采用PEG法高速离心进行病毒浓缩,一步法逆转录荧光定量PCR验证病毒浓缩效果。结果该方案用于HCV RNA检测,能得到良好的扩增曲线,不同病毒载量样本病毒浓缩的效率均在70%以上。结论大容量样本HCV病毒浓缩可提高病毒荧光PCR检测的灵敏度。

气相色谱法检测灭活狂犬病毒浓缩液中残留的β-丙内酯

目的：建立检测灭活狂犬病毒浓缩液中残留的β-丙内酯的方法。方法：采用直接进样的气相色谱法。色谱柱为HP—DB624毛细管柱，程序升温；采用氢火焰离子化检测器（FID），载气为氮气，流速为1．0ml／min；氢火焰离子化检测器温度为250℃，进样口温度为150℃。以乙腈为对照品稀释溶剂，样品溶液经离心后直接进样。结果：乙腈和样品中其他成分对β-丙内酯的测定无干扰。β-丙内酯的检测质量浓度线性范围为1．082-1082．0μg／ml（r=0．9994）；检测限和定量限分别为0．2、1．0ng：方法精密度和耐用性良好。在4批样品中未检出残留的β-丙内酯。结论：建立的方法操作简便、通用性强，可满足灭活狂犬病毒浓缩液中残留的伊丙内酯监控的需要。

PEG-it^(TM)纯化浓缩J亚群禽白血病病毒效果的鉴定

为建立一种不利用超速离心法纯化浓缩J亚群禽白血病病毒(ALV-J)简便、易行的方法,利用PEG-it^(TM)病毒浓缩试剂与病毒培养细胞上清按比例混合,4℃低速离心,最后用无菌的预冷PBS进行重悬,取100μL病毒液进行TCID50的测定,同时利用电镜负染、SDS-PAGE银染及Western blot的方法对浓缩纯化后的病毒进行鉴定。结果表明:经过PEG-it^(TM)浓缩纯化病毒滴度提高10~100倍,滴度可达到1×10~7TCID50/m L;透射电镜负染观察结果表明,病毒粒子呈卵圆形,直径80~120 nm,并清晰可见囊膜上均匀密布的纤突;Western blot和银染结果显示,经过PEG-it^(TM)浓缩纯化的病毒杂蛋白明显减少,且具有良好的抗原性,能够被鸡多抗血清识别。提示在没有超高速离心机的情况下,可以使用PEG-it^(TM)纯化浓缩ALV-J,该方法使用方便,能满足大多数试验的需求。

树鼩粪便中病毒三种浓缩方法的效果比较

目的比较树鼩粪便中病毒的三种浓缩方法,评价各方法的浓缩效果,为病毒浓缩方法的最佳选择提供依据。方法将指示病毒(树鼩呼肠孤病毒,tree shrew’s reovirus,TRV)加入经离心过滤处理后的野生树鼩粪便上清中,采用PEG(聚乙二醇,polyehhylene glycol)沉淀结合超声分离法、铁离子絮凝的化学方法和GBviroFast病毒浓缩试剂盒对树鼩粪便上清分别进行浓缩,经实时荧光定量PCR技术对指示病毒进行绝对定量,比较各方法的浓缩效果。结果 TRV病毒悬液的载量为1.34E+05;铁离子絮凝的化学方法浓缩的TRV载量为1.86E+04,浓缩效率为49.57%;GBviroFast病毒浓缩试剂盒浓缩的TRV载量为0.98E+04,浓缩效率为26.12%;PEG沉淀结合超声分离法浓缩的TRV载量为2.30E+03,浓缩效率为6.13%。结论三种方法均能浓缩粪便上清中低浓度的肠道病毒,铁离子絮凝方法最佳,GBviroFast病毒浓缩试剂盒其次,PEG结合超声分离效果最差。

环境水体中GⅡ型诺如病毒浓缩研究

自行设计一种适合野外现场采样的病毒采集浓缩仪,采用一种新型阳离子膜NanoCeram,进行环境水体中GⅡ型诺如病毒浓缩研究。通过预实验,考察了预处理膜、不同的二次浓缩方法、不同洗脱液对病毒回收率的影响,随后优化整个浓缩过程并确定最佳的病毒浓缩方法。结果显示,预处理膜对病毒回收影响较大,PEG-NaCl沉淀、硅藻土吸附这两种二次浓缩方法的效果相当,选择0.15mol/L Na2HPO4作为硅藻土洗脱液。确定了NanoCeram阳离子膜的病毒回收率为3.02%。最后对北京市丰台区洋桥生活污水进行现场采样,成功检测到GⅡ型诺如病毒,证明该方法有效可行,适合于环境水体中诺如病毒的浓缩分离和检测。

HBV血液大样本浓缩核酸检测方案研究

目的采用实时荧光定量检测方法,验证病毒浓缩的效率以及病毒浓缩对检测的影响。方法模拟48人份样本混和后浓缩提取HBV DNA,聚乙二醇沉淀法进行病毒浓缩,进行HBV DNA实时荧光定量PCR检测,并分析浓缩效率及检测水平。结果 10 mL样本中HBV病毒浓缩的效率近90%,病毒检测水平优于100 copies/mL。结论大样本混样后病毒浓缩效率理想,能有效提高病毒的检出度及血液安全并降低检测成本。

水中病毒的检测方法研究

水中的病毒对人体健康的风险日益受到关注,对环境水体中病毒的检测是预防疾病、评估水源卫生质量、环境卫生状况的一项有价值的工作。现代分子生物学技术的发展为水中病毒快速检测方法的建立提供了可能。对水体中病毒浓缩的几种方法:NaCl-AlCl3.6H2O沉淀法、滑石粉-硅藻土法、絮凝洗脱法进行了介绍与比较,进一步提出理想的浓缩方法应满足的条件。对浓缩后水样中病毒的PCR检测的方法也做了介绍。

重组禽流感病毒灭活疫苗生产工艺的优化

禽流感是禽流行性感冒的简称,它是由甲型流感病毒的一种亚型(也称禽流感病毒)引起禽发生急性出血性的传染性疾病,以引发呼吸道发病或隐性感染为特点。目前疫苗免疫接种是预防本病的主要措施。在产业化灭活疫苗生产过程中,传统灭活工艺(使用2%的甲醛作为灭活剂)存在着局限性,其中甲醛含量虽未超过国家标准,但多余的游离甲醛醛基不断降解病毒的抗原,致使抗体效价降低、保存期缩短以及动物机体副反应的发生。

牛传染性鼻气管炎病毒灭活疫苗

俄学者用牛传染性鼻气管炎病毒的高浓缩半成(制)品制备灭活疫苗取得成功。为了制备具有7.51gTCID50/cm^3活性的高浓缩半成品,是在130L发酵桶(NBS公司,USA)内并集(合并),并添加了无菌的聚乙烯2二醇(当今为了病毒浓缩广泛使用不同分子量和浓度的聚乙烯乙二醇和聚乙烯亚胺),于2—3℃条件下放置2—3昼夜。令自然沉淀,然后弃去上层清液,将已被浓缩为1/20—1/30的病毒物经过虹吸管转移到瓶内,并在2500转/分条件下离心30分钟。

鸡传染性支气管炎血凝抗原不同浓缩方法的比较

鸡传染性支气管炎血凝抗原不同浓缩方法的比较刘长辉田仁位段印祥刘毅（天津市禽病诊断中心３００４０２近年来传染性支气管炎（ＩＢ）给养鸡业造成的损失呈上升趋势，各鸡场普便重视对ＩＢ的防制，开展了ＩＢ抗体监测。我们曾用Ｃ型产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ...

水标本中脊髓灰质炎病毒三种浓缩方法的比较及改进方法的建立

本文用三种浓缩方法对人工污染标本进行了病毒回收率的比较试验,三种方法结果基本相同(47—49％)。在被检脊髓灰质炎Ⅰ型病毒蒸馏水标本中加1％NaCl可提高滤膜法对水中病毒的回收率;在含脊髓灰质炎病毒的河水、污水标本中加1％NaCl及AlCl_3(河水为0.0005mol/L、污水为0.001mol/L),离心沉淀过程中,我们惊奇地发现病毒全在沉渣中,结果表明用该方法病毒回收率竟提高了一倍(92—99％)。

模拟水样中甲肝病毒超滤浓缩和PEG浓缩方法的比较

目的比较模拟水样中甲肝病毒（HAV）超滤浓缩和PEG浓缩方法，为水中HAV检测提供参考。方法向模拟水样中接种已知量的HAV，分别选用Millipore和Sartorius公司的100KD和50KD孔径的微孔超滤管及终浓度为10％聚乙二醇（PEG）-1M氯化钠（NaCl）沉淀的方法对模拟水样进行浓缩，采用荧光定量lit-PCR方法检测浓缩后的病毒量，用SPSS21．0对数据进行统计学分析。结果采用同一孔径不同厂家的超滤管浓缩病毒无统计学差异（P=0．25，P=0．532），对浓缩后的CT值及回收量进行分组比较，结果均表明不同处理方法有统计学差异（P：0．000〈0．05，P=0．000〈0．05），其中50KD组浓缩病毒回收率为（94．57±16．26％），100KD组浓缩病毒回收率为（52．37±14．75％），10％PEG-1．0MNaCl沉淀病毒回收效率为（63．5±8．45％）。结论超滤和PEG沉淀两种方法均可用于水样中HAV浓缩，超滤管浓缩病毒操作简便，耗时更短，选择合适孔径可以提高HAV病毒回收率，本实验中50KD超滤管HAV回收率高于100KD；PEG更适用处理大体积样本。

荷电材料在医药卫生方面的应用

荷电材料是一类新型功能材料。正电性荷电材料表面带有较强的正电荷,对负电性的细菌、病毒和细菌内毒素有较强的亲和作用。本文介绍了将纤维、颗粒、微孔滤膜及深层滤器等各种形式的荷电材料用于纯水与药液除细菌内毒素、血液除菌、败血症治疗以及饮水中病毒浓缩回收等技术,分析了应用前景。

预防乙型肝炎的酵母重组疫苗

预防乙型病毒性肝炎,早年都使用血源性乙肝死疫苗。换句话说,就是将含有乙型肝炎病毒的人血浆中的乙肝病毒浓缩后杀死,再将其注入人体,使接种疫苗者产生抗乙肝病毒的抗体,以达到抗御乙肝病毒攻击以致感染的目的。虽说可获满意结果,但仍存在传播其他血源性疾病的危险性。到1986年酵母重组乙型肝炎疫苗获准正式使用,使上述危险因素得以消除,

用浓缩地鼠肾细胞狂犬病毒抗原免疫马匹获得高效价血浆

目的制备高效价马抗狂犬病免疫血浆。方法通过细胞制备、病毒的接种、培养、收获、浓缩等步骤,研制了浓缩地鼠肾细胞狂犬病毒抗原,并与羊脑狂犬病毒抗原作马匹免疫对比试验。结果浓缩地鼠肾细胞抗狂犬病免疫血浆的效价明显高于羊脑抗狂犬病免疫血浆。试验组血浆平均效价为157IU/ml,对照组为113IU/ml,两组差异有统计学意义。结论已成功制备高效价抗狂犬病免疫血浆。

PSMA-CAR慢病毒颗粒包装浓缩及感染CIK细胞的研究

目的:探讨前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)-嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)慢病毒颗粒的浓缩方法及提升感染CIK细胞效率的方法。方法:本研究通过超速离心法、超滤管浓缩法、PEG-8000浓缩法三种方法浓缩PSMA-CAR慢病毒颗粒,通过比较三种方法获得的PSMA-CAR慢病毒颗粒感染CIK细胞的效率,确定其最佳浓缩方法;其次,通过比较CIK细胞的感染效率,确定联合室温+长时间+低速离心的方法是否可以提高PSMA-CAR慢病毒颗粒感染CIK细胞的效率。结果:测定PSMA-CAR慢病毒颗粒感染CIK细胞的效率,超滤管浓缩法为6.98%±0.77%,超速离心法为32.04%±1.66%,PEG-8000浓缩法为53.47%±4.72%(F=189.70,P<0.01),3种方法的感染效率差异有统计学意义;室温(26℃)+长时间(4 h)+低速离心(150 g)的方法可使CIK细胞的感染效率提高至32.04%±1.66%,而常规方法感染CIK细胞的感染效率仅为2.73%±0.75%。结论:PEG-8000浓缩法为制备PSMA-CAR慢病毒颗粒的最佳浓缩方法,室温+长时间+低速离心的方法可提高其对CIK细胞的感染效率。

贝类中诺如病毒的研究进展

从贝类中诺如病毒的污染现状、检测组织靶点、病毒浓缩方法及效率、检测方法有效性等多个方面评述贝类中诺如病毒的研究现状、进展、急需解决的问题和未来的发展方向,以期为制定诺如病毒检测技术标准及我国贝类进出口贸易提供参考。