理化因素对非洲猪瘟病毒灭活效果的研究

[目的]了解我国非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的生物学特性及理化抗性,提高猪场生物安全水平以防控非洲猪瘟。[方法]通过红细胞吸附试验和qPCR试验验证不同理化因素(包括静置、温度、UVC照射、室内外干燥、阳光暴晒和消毒剂)对ASFV的灭活效果。[结果]UVC照射30 min即可灭活病毒,照射时间越长,ASFV核酸降解越严重;室内干燥2.5 d、室外干燥1.5 d、阳光暴晒30 min均可灭活ASFV,但不能降解ASFV核酸;常见消毒剂对ASFV的杀灭效果良好,各消毒剂按照推荐稀释浓度室温作用15或30 min,除碘酸混合溶液外均能使ASFV完全失活;温度升高(4、25和37℃)会增强消毒剂的消毒作用;有机物FBS的存在会削弱消毒剂的作用,且随FBS体积分数增加(0、10%和30%)消毒剂的消毒效果会降低。[结论]本文系统研究了常见的理化因素对ASFV灭活效果的影响,有助于全面了解ASFV生物学特性,对非洲猪瘟的防控具有重要指导意义。

高速列车空调系统车下风道内病毒灭活的数值模拟

以新型冠状病毒为灭活对象,在CRH2型动车组空调系统车下风道内布置紫外线灯管。基于计算流体力学(CFD)建立了耦合空气流动、灯管发热、紫外辐射与颗粒物辐射剂量的数值计算模型,对不同布管方式下的病毒灭活效果进行了对比。结果表明:布置紫外线灯管可以延长颗粒物在车下风道内的平均过流时间,同时通过改变车下风道内灯管的布置方式,可以有效地改善车下风道内辐射场的分布并提高颗粒物受到的辐射剂量;在所研究的4种布管方式中,波浪状分布(D型分布)的车下风道内辐射场更加均匀,颗粒物接收的辐射剂量明显增大,远高于新冠病毒的D90灭活标准。

病毒灭活和滤除白细胞对冷沉淀凝血因子质量的影响

目的 探讨亚甲蓝光化学法病毒灭活和(或)滤除白细胞对冷沉淀凝血因子质量的影响。方法 选取陕西省血液中心2020年2月采集的400 ml全血60袋,随机分成冷沉淀组(对照组)、去白冷沉淀组、灭活冷沉淀组和去白灭活冷沉淀组,每组15袋,采用单因素方差分析比较4组凝血因子Ⅷ和FIB含量。结果 对照组、去白冷沉淀组和灭活冷沉淀组Ⅷ因子含量[(141.76±32.66)IU,(135.23±33.78)IU和(117.06±32.39)IU]均高于质量标准(≥80 IU),且符合率均>75.0%;去白灭活冷沉淀组凝血因子Ⅷ含量低于对照组[(101.09±37.47)IU比(141.76±32.66)IU],差异有统计学意义(P <0.05),符合率(73.3%)低于75.0%。4组FIB含量[(315.21±23.34)mg,(298.87±30.62)mg,(228.33±49.44)mg,(213.62±41.82)mg]均高于质量标准(≥150 mg),且符合率均>75.0%。结论 病毒灭活或滤除白细胞制备的凝血因子Ⅷ和FIB含量均符合国家相关标准,值得在临床推广应用。

脱细胞、病毒灭活与灭菌组合工艺对猪真皮基质理化性能的影响

背景:脱细胞、去抗原、病毒灭活与终端灭菌工艺的组合优化是制备符合临床要求组织再生材料的关键技术。目的:系统比较分析两种脱细胞、去抗原、病毒灭活与灭菌组合工艺对猪真皮基质理化性能的影响。方法:取新鲜猪皮,分两组工艺制备猪真皮基质:①方法A:采用1%Triton X-100、DNase和RNase、1%磷酸三丁脂进行脱细胞处理,1%过氧乙酸+25%乙醇病毒灭活,伽马射线辐照终端灭菌;②方法B:采用中性蛋白酶、0.5%Triton X-100和DNase进行脱细胞处理,α-半乳糖苷酶去除抗原,0.1%过氧乙酸病毒灭活,伽马射线辐照终端灭菌。对两种方法制备的猪真皮基质进行表征。结果与结论:①A组胶原蛋白含量低于B组,弹性蛋白、糖含量高于B组,材料硬度值高于B组;A组基质材料的悬垂性较差,B组基质材料的柔韧性较好;②A组脱细胞处理不影响基质材料的热稳定性,B组脱细胞略降低基质材料的热稳定性;伽马射线灭菌后,A组基质材料的热稳定性大幅度下降,B组基质材料的热稳定性下降很小;③与B组相比,A组基质材料的拉伸强度和弹性较小;体外酶降解实验显示,A组基质材料对胶原酶降解具有很强的抗性,对胰蛋白酶敏感、易降解,B组基质材料则相反;④扫描电镜显示,伽马射线灭菌后,A组基质材料基本看不到胶原三维结构,胶原纤维排列致密,胶原纤维之间存在非纤维结构性凝胶样物质;B组基质材料胶原纤维结构清晰,胶原纤维之间不存在非纤维结构性胶样物质。苏木精-伊红和三色染色显示,伽马射线灭菌后,A组基质材料可见少量细胞核,胶原纤维排列紧密,材料致密;B组基质材料无细胞核,保留了较好的胶原纤维三维空间结构;⑤结果表明,不同组合的制备工艺对脱细胞基质材料的理化性能影响极大,方法B在有效脱细胞和去抗原的同时较完整地保留了天然组织结构,方法A对材料的破坏性较大,制备的基质材料胶原成分含量、柔软度、热稳定性和力学性能均不如方法B。

病毒灭活输血过滤器插袋针长度对血浆袋刺破率的影响研究

目的探讨病毒灭活输血过滤器穿刺钢针(简称插袋针)长度对血浆袋刺破率的影响。方法20000袋冰冻血浆,按随机分配法分为长针组和短针组,各10000袋。两组均采用手工无菌穿刺法和智能穿刺仪法各穿刺5000袋,长针组采用长度为17 mm的插袋针(简称长针)进行血浆病毒灭活穿刺连接,短针组采用改良后长度为14.5 mm的插袋针(简称短针)进行血浆病毒灭活穿刺连接。比较两组血浆袋刺破率及手工无菌穿刺法和智能穿刺仪法血浆袋刺破率。结果短针组血浆袋刺破率0.05%明显低于长针组的0.79%,差异有统计学意义(P<0.05)。短针组手工无菌穿刺法及智能穿刺仪法血浆袋刺破率分别为0.02%、0.08%,明显低于长针组的0.34%、1.24%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缩短插袋针的长度对血浆袋刺破率有明显影响,采用14.5 mm的插袋针进行手工无菌穿刺法和智能穿刺仪法时均能明显降低血浆袋刺破率,值得推广使用。

5种常用病毒灭活剂的应用概述

病毒灭活是利用物理或化学方法使病毒失去感染性的过程。病毒的灭活效率常受到病毒特性、灭活剂种类、灭活目的等多个因素的影响。通常病毒特性和病毒灭活后的用途决定了灭活剂的选择,疫苗研制需病毒完全灭活的同时保持病毒保护性抗原表位结构完整,以诱导有效的宿主免疫反应;分子生物学检测则需要病毒基因组完整等。因此选择适宜的灭活剂对高致病性病原进行灭活是病原分子诊断、血清学分析以及疫苗开发等后续工作的重要保障。目前越来越多的病毒灭活剂被开发和利用,本文选择5种实际工作中常用的化学类病毒灭活剂:甲醛(Formaldehyde)、β-丙内酯(β-propiolactone)、胍基离序盐(Guanidium based chao-tropicsalts)、补骨脂素(Psoralen)、过氧化氢(Hydrogenperoxide),对其灭活机理、病毒灭活特点以及灭活病毒在后续工作中的应用进行如下概述。

病毒灭活血浆的临床应用探讨

病毒灭活血浆是在严格的操作条件下通过特殊处理之后的血浆,用一些特殊的方式,比如物理化学等方式,破坏病毒的蛋白质,使其失去繁殖能力。该文从病毒灭活等离子体在输血安全性、临床应用效果,病毒灭活血浆与新鲜血浆的优势对比,病毒灭活等离子体的原理、方法等方面展开了详细的论述,确定了一条更简单、更高效,能够安全输血的途径,进一步说明了病毒灭活血浆对血浆中的病毒灭活,可有效降低病毒感染的概率,还可以通过正确的使用方式大幅度降低因输血而传染疾病的风险,可以有效预防输血传播疾病,可以指导临床安全用血。

病毒灭活血浆制备的质量控制方法研究

目的:探讨质量控制对病毒灭活血浆制备的影响。方法:选取2020年3月—2021年4月于普洱市中心血站无偿献血采集标本400 mL制备出病毒灭活冰冻血浆200 mL为研究对象,根据质量控制实施方式的不同,将2020年3—9月抽取的病毒灭活冰冻血浆500份作为实施持续质量改进(CQI)前组,2020年10月—2021年4月抽取的病毒灭活冰冻血浆500份作为实施CQI后组,比较两组血浆制备过程中的质量监控结果与质量监测的总体结果。结果:实施CQI前组质量监控总合格率低于实施CQI后组,差异有统计学意义(P=0.001);实施CQI后组外观、标签、容量、无菌试验、血浆蛋白含量和亚甲蓝残留量质量监测结果总体合格率高于实施CQI前组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:质量监测控制能有效提高病毒灭活血浆制备的合格率,具有较好的临床意义,值得推广。

动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺的验证

目的对动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺进行验证。方法针对不同动物源性制品,选择相关的指示病毒,对4个厂家不同的病毒灭活/去除工艺进行效果验证。结果各工艺均可灭活/去除指示病毒4Logs以上,均为有效的灭活/去除病毒工艺。结论4个厂家的灭活/去除病毒工艺均可保证制品的安全性。

不同光源照射含亚甲蓝血浆的病毒灭活实验

用口炎疱疹病毒 (VSV)和 Sindbis病毒作为指示病毒 ,观察了盛装在国产 PVC储血袋内含亚甲蓝的血浆经 5种不同光源 (荧光、红光、自然光、卤素光、白灼光 )照射后的病毒灭活效果及对血浆中的凝血因子的影响 ,实验证实亚甲蓝配合上述可见光照射均对血浆中的病毒灭活有效 ,其中荧光的照射效果尤为突出。用荧光照射 30 min,可使 VSV和 Sindbis病毒的致病剂量降低 >7log TCID5 0 /m l,且血浆中的 :C、 :C、纤维蛋白原的回收率均 >75 % ,提示亚甲蓝 /荧光照射对单袋血浆的病毒灭活具有一定的实用性和可行性。

去白细胞输血过滤器在血浆病毒灭活中的应用

利用特制的去白细胞并吸附亚甲蓝血浆过滤器 ,对经亚甲蓝光照处理后的血浆进行过滤 ,观察其去除亚甲蓝和白细胞的效果 ,并比较过滤前后血浆中部分凝血因子活性和主要血浆蛋白的变化 ,结果差异均无显著意义。

人脐带血血红蛋白的分离纯化与病毒灭活研究

建立了一套通过热敏法分离纯化及病毒灭活人脐带血血红蛋白的工艺。对该工艺条件的优化,使得纯化血红蛋白产品纯度及回收率等得到提升,并建立了一套较为完善的纯化血红蛋白质量检测指标。与现有的纯化方式相比,热敏法操作简便,仪器设备造价低廉,纯化与病毒灭活同时进行,得到的纯化产品损失少,纯度高,各项理化指标达到国际水平,为规模制备纯化及病毒灭活的血红蛋白以及血液代用品的研发创造了有利条件。

亚甲蓝血浆病毒灭活对凝血因子的影响

目的探讨亚甲蓝(MB)光化学法血浆病毒灭活对主要凝血因子活性的影响,以及血浆病毒灭活后制备冷沉淀的可行性。方法将16袋400mL全血成分分得的新鲜血浆均分为两份,分别归为实验组和对照组;实验组加入MB进行病毒灭活,对照组不加MB但仍然进行病毒灭活光照过滤,检测各阶段标本凝血因子Ⅷ(FⅧ):C及纤维蛋白原(Fib)。结果实验组与对照组之间FⅧ:C及Fib差异有统计学意义(P<0.05),经过病毒灭活后实验组血浆中FⅧ及Fib损失较大且含量未达制备冷沉淀的理论要求。结论血浆病毒灭活对血浆中FⅧ及Fib均有较为显著的影响,且其损耗主要来自MB光化学反应,血浆病毒灭活后不宜用于制备冷沉淀。

维生素C对病毒灭活中血浆蛋白活性的保护效应

本研究探测在亚甲蓝(methyleneblue,MB)光化学法处理单份血浆过程中,加入维生素C(vitamineC,VitC)是否影响病毒的灭活效果,是否对血浆蛋白活性成分具有保护作用。用水泡性口炎病毒(vesicularstomatitisvi-rus,VSV)作为指示病毒,在人血浆中加入不同浓度VitC和终浓度为1μmol/L的亚甲蓝,应用40000lx荧光强度照射并于不同时间取样检测。以细胞病变效应评价对VSV的灭活效果,用RT-PCR检测病毒核酸的变化,并采用Clauss法、一期法和微量免疫电泳等方法对亚甲蓝光化学法处理前后的血浆蛋白含量和活性进行分析。结果发现,VSV血浆在加入240μmol/LVitC并经MB-光照60分钟后,病毒滴度下降>8lgTCID50/ml;RT-PCR法也检测不到病毒核酸;血浆中的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ的回收率分别为83.55%和81.67%,与不加VitC进行亚甲蓝光化学法处理结果相比有显著提高(P<0.05);微量免疫电泳显示,血浆中的大部分蛋白成分含量没有明显改变,免疫原性也未受到明显影响。结论:血浆中加入一定量的VitC不仅不影响亚甲蓝光化学法对病毒的灭活效果,而且有效地保护了血浆蛋白活性成分,因此VitC可作为亚甲蓝光化学法处理血浆时的保护剂,能有效地提高单份新鲜冷冻血浆的质量。

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆的质量控制

目的探讨亚甲蓝光化学(MB)法病毒灭活血浆在制备过程中质量控制的方法和标准。方法(1)建立MB法病毒灭活血浆制备操作规程;(2)用血凝仪检测病毒灭活前后血浆内FⅧ、Fib的含量(n=16);(3)电子秤称量病毒灭活前后血浆容量(n=25);(4)1%比例抽查并进行细菌培养,观察输注后的不良反应。结果病毒灭活后血浆内FⅧ、Fib含量和血浆容量与灭活前比较差异有统计学意义(P<0.05),但Fib、血浆容量仍符合国家质量标准要求;血培养检测未见细菌生长;临床输注后无不良反应。结论MB法病毒灭活血浆制备过程中,需要进行全过程质量控制,严格无菌操作。

荧光与亚甲蓝联用对血浆中病毒灭活的研究

以细胞感染试验、凝血法、交叉免疫电泳等技术 ,观察荧光与亚甲蓝联用对血浆中水泡性口炎病毒 (VSV)和辛德比斯病毒 (SV)的灭活效果及血浆蛋白的变化。结果 ,向盛装在聚氯乙烯袋内的血浆中加 1μmol/L亚甲蓝并经荧光 (30 0 0 0Lux)照射 30min ,可将血浆中滴度 >7TCID50 (lg)的VSV和SV灭活。消毒后 ,血浆中的Ⅷ :C、Ⅸ :C、纤维蛋白原的回收率 >75% ,白蛋白、球蛋白的回收率 >85% 。

α_1-抗胰蛋白酶制剂的制备及其病毒灭活

目的 从Ｃｏｈｎ ＦⅣ中提纯α１－抗胰蛋白酶（α１－Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ α１－ＡＴ，制备较高纯度α１－ＡＴ制剂。方法 对Ｃｏｈｎ ＦⅣ抽提液经沉淀、超滤、离子交换及凝胶过滤，提纯 α１－ＡＴ用巴氏法（液态，６０℃，１０ｈ加热）作病毒灭活， 并考察其效果。用免疫单扩散、双向交叉免疫电泳、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及合成基质法检测α１－ＡＴ蛋白及生物活性。用区带 扫描法测定α１－ＡＴ制剂的纯度。结果３批试制的α１－ＡＴ制剂的纯度为９１．３±１．５２％，比活０．４９±０．０８μ／ｍｇ，比活性 比抽提液提高了２７．４倍。巴氏法处理可使ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ、Ｐｏｌｉｏ Ｉ型疫苗病毒分别降低１０．０±０．３，１０．０±０．３１及７．１１ ±０．３ｌｇＴＣＩＤ５０／ｍｌ，但仍能检出Ｐｏｌｉｏ型疫苗病毒。结论 可从 Ｃｏｈｎ ＦⅣ中制得较高纯度的 α１－ＡＴ制剂，巴氏法能对 α１－ＡＴ制剂作有效的病毒灭活处理。