番茄斑萎病毒侵染辣椒后病毒积累量动态变化

为探究番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)侵染感病辣椒品种‘萧新19’后病毒积累量变化规律,本研究将TSWV人工摩擦接种于‘萧新19’植株,通过症状学观察、血清学及半定量RT-PCR三者结合的方式监测接种后第1、7、14、21、28、35天(days post inoculation, dpi)的‘萧新19’新叶的发病情况。利用实时荧光定量PCR技术对6个时期样品的病毒积累量进行定量检测分析。症状学观察发现在14 dpi‘萧新19’才开始表现症状,随后病症逐渐明显,伴随有同心环纹、坏死斑点、褪绿等症状,随时间推移病症逐渐加重。血清学及半定量RT-PCR检测均表明TSWV接种成功。RT-qPCR病毒积累量的检测结果显示,在14 dpi‘萧新19’叶片病毒的积累量达到最高,在1~14 dpi里辣椒叶片病毒积累量呈上升趋势,14 dpi后病毒积累量呈下降趋势。研究表明只有当‘萧新19’新叶的TSWV量积累到一定水平时,寄主才会显症,这为下一步辣椒的早期诊断和防控提供了新思路。同时感病辣椒品种‘萧新19’的TSWV积累量整体呈现“先增后降”的变化规律,也为后续辣椒TSWV感病机制相关研究提供了理论基础。

病毒载体介导的基因沉默体系对朱顶红褪绿环斑病毒NSm基因的沉默效应

为探讨烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)载体介导的基因沉默技术对朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)运动蛋白基因NSm的沉默效应,以本氏烟Nicotiana tabacum为材料,构建靶向HCRV NSm序列的基因沉默表达载体pTRV2-NSm,经农杆菌Agrobacterium介导侵染烟苗,检测其侵染效率,人工接种HCRV到沉默表达载体处理过的烟苗,通过观察发病症状、统计病情并应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测TRV介导的基因沉默体系对HCRV侵染的沉默效应。结果表明,pTRV2-NSm沉默表达载体对本氏烟植株的侵染率达到95.00%,并且对本氏烟的生长无明显影响;与对照相比,经沉默载体处理的烟草植株接种HCRV后发病率显著降低,在接种后14 d发病率下降了90个百分点,病毒积累量明显下降,随着时间延长pTRV2-NSm对病毒的抑制效果持续升高,在接种后14 d对病毒病的防治效果最高,达93.13%;qRT-PCR检测发现基因沉默表达载体在21 d内能持续有效表达。表明本研究构建的基因沉默体系能有效沉默HCRV NSm的表达,同时降低HCRV在烟草上的发病率和积累量。