流感病毒脑病

最近30年来,冬季流行的流感病毒没有较大变异。但2003年,亚洲发生了高致病性禽流感,致使家禽大量死亡,在越冬的候鸟中,也有感染这种H5N1病毒。在泰国、越南、柬埔寨等亚洲国家已有10多人感染了H5N1病毒,且致死率在50%以上。在此背景下,流感病毒感染性疾病和相关疫苗临床应用的研究备受瞩目。本文选译自《日本医师会杂志》2006年134卷第10期“インフルエンザウイルス感染症と阌連するワクチンの臨床”专辑,选文11篇,对流感病毒的预测、诊断、治疗及各种相关疾病进行详细阐述,内容较新,有很高的参考价值。

康复护理在小儿重症病毒脑性脑炎护理中的应用效果评价

分析在小儿重症病毒脑性脑炎护理中应用康复护理所取得的临床价值。方法:在2019年1月~2021年1月期间医院收治的重症病毒脑性脑炎患儿中选取32例作为研究对象并随机分为两组,其中,对照组给予常规护理,研究组给予康复护理,分析患儿护理质量。结果:研究组护理效果优于对照组;研究组临床症状改善用时短于对照组;经护理,患儿生活质量均有改善,且研究组评分更高,差异存在统计意义(P<0.05)。结论:康复护理有利于提升重症病毒脑性脑炎患儿护理质量,该模式值得推广。

脑心肌炎增强型绿色荧光蛋白嵌合病毒的构建

携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)的脑心肌炎(Encephalomyocarditis virus, EMCV)嵌合病毒是研究该病毒体内外生物学特性的有力工具。因此,本研究基于前期构建的巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)感染性克隆,在EMCV基因组2A蛋白序列之后插入EGFP基因片段,并将重组质粒转染BHK-21细胞,获得携带EGFP的嵌合病毒。通过荧光定量PCR(real-time PCR)、间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay, IFA)及半数组织细胞感染量测定(Median tissue culture infective dose, TCID50)等方法对拯救病毒的基因组复制、蛋白表达及病毒粒子的感染性进行测定,结果证实嵌合病毒能够在BHK-21细胞上成功表达EGFP并产生完整的病毒粒子。然而,相较于野生型亲本拯救病毒,嵌合病毒在BHK-21细胞上的复制能力降低,并且在连续传代后逐渐失去绿色荧光信号,表明嵌合病毒中EGFP基因的插入对EMCV病毒粒子的组装释放具有不良影响,并在传代过程中逐渐累积导致EGFP功能丧失的缺失和突变。

新型冠状病毒感染相关急性坏死性脑病1例

报告1例成人新型冠状病毒感染相关的急性坏死性脑病(COVID-19-associated acute necrotizing encephalopathy,ANEC)病例。患者在新型冠状病毒感染后12 d出现意识障碍、癫痫发作,脑MRI上显示双侧丘脑、脑干、小脑半球为主的信号改变,与急性坏死性脑病(acute necrotizing encephalitis,ANE)特征性影像表现一致。早期给予甲泼尼龙冲击联合大剂量人免疫球蛋白治疗,但患者一直处于持续昏迷状态并最终死亡。ANEC往往起病急,进展快,以意识障碍、癫痫等为主要表现,影像学丘脑及幕下对称性、多灶性病灶对诊断具有特异性,但治疗及预后仍面临挑战,需要深入研究。

禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用

为获得禽脑脊髓炎病毒(Avian Encephalomyelitis virus,AEV)VP1蛋白的单克隆抗体,通过原核表达AEV VP1蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。经ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆获得两株杂交瘤细胞株,命名为4#、19#,并进行了抗体亚类的鉴定、Western-blot和IFA检测。结果显示:制备的两株单克隆抗体亚型分别为IgG2b、IgG2a,Western-blot和IFA试验结果表明单克隆抗体均能与AEV发生特异性反应而与其他家禽常见病毒均无交叉反应。采用建立的IFA方法对单抗进行了初步运用,在疫苗外源病毒检测AEV时,与经典方法的符合率100%。本研究成功制备了AEV单克隆抗体,为进一步建立AEV检测方法和深入研究AEV的生物学特性奠定了基础。

基于网络药理学和分子对接探讨莪术醇抗脑心肌炎病毒的作用机制

【目的】利用网络药理学和分子对接技术发现莪术醇抗脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)的作用靶点及机制。【方法】利用PharmMapper、GeneCards数据库获得莪术醇抗EMCV的相关靶点;通过Cytoscape 3.7.2软件、STRING和DAVID数据库构建靶蛋白互作(PPI)网络并筛选关键靶点,对靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析,并构建莪术醇抗EMCV靶点-通路网络;通过AutoDock Vina 1.1.2分析莪术醇与靶蛋白的结合能及结合模式。【结果】网络药理学分析结果显示,莪术醇抗EMCV的潜在靶点有9个,其中丝裂原活化激酶14(mitogen-activated protein kinase 14,MAPK14)、信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)、白蛋白(albumin,ALB)、白细胞介素2(interleukin 2,IL2)可能是莪术醇抗EMCV的核心靶点,所得靶点参与C型凝集素受体信号通路、神经营养素信号通路和JAK-STAT信号通路等代谢通路,功能涉及调节炎症反应细胞因子的产生、蛋白激酶活性和药物结合等;分子对接结果显示,4种核心靶蛋白与莪术醇之间存在较强的结合能,均存在疏水形式的结合,其中ALB、STAT1和IL2与莪术醇之间还存在氢键结合。【结论】本研究结果表明,MAPK14、STAT1、ALB和IL2是莪术醇发挥抗EMCV作用的潜在靶点,本研究为莪术醇作为抗EMCV药物的研发提供理论依据和线索。

猪血凝性脑脊髓炎病毒N蛋白单克隆抗体制备及表位鉴定

为制备猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)N蛋白的单克隆抗体,本研究构建了pET-32a-N重组质粒,原核表达并纯化重组N蛋白,免疫BALB/c小鼠,细胞融合后利用间接ELISA进行筛选,获得了3株稳定分泌的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为2C3、4F3、5C6。Western blot与间接免疫荧光试验表明,3株单抗均能与293T细胞中表达的N蛋白产生特异性反应。经测定,3株单抗的效价均为1×10^(6),重链类型均为IgG1,轻链类型均为κ。利用一系列表达的部分重叠的N截短蛋白片段,经Western blot鉴定单抗所识别的抗原表位,结果显示,^(267)KPRQK^(271)为单抗2C3、4F3、5C6所识别的表位。本研究为PHEV临床检测方法的建立和表位疫苗的研发奠定了基础。

禽脑脊髓炎病毒Luminex xTAG检测方法的建立

为了建立一种灵敏快速检测禽脑脊髓炎病毒(AEV)的Luminex xTAG技术方法,本试验针对AEV高度保守的VP 1基因设计了1对特异性引物,在上游引物的5′端通过Spacer18间隔添加Tag序列,下游引物的5′端标记生物素,进行反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,构建质粒标准品,通过优化反应体系建立Luminex xTAG检测方法。用所建立的Luminex xTAG方法进行特异性、敏感性和重复性试验,并与SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法同时对45份脑组织临床样品进行检测。结果显示,所建立AEV Luminex xTAG检测方法与传染性法氏囊病毒、禽传染性贫血病病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、马立克病毒和禽传染性支气管炎病毒无交叉反应;灵敏度可达1×10^(2)copies/μL;批内和批间重复性试验的变异系数均小于4.0%;对45份临床样品的Luminex xTAG检测结果与SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测结果一致。结果表明,所建立的AEV Luminex xTAG检测方法特异性好、灵敏度高、重复性和稳定性好,可用于AEV的快速检测。

脑心肌炎病毒VP3蛋白抑制I型干扰素信号通路促进病毒体外增殖的研究

天然免疫是抵抗病原微生物感染的第一道防线,为探究病毒蛋白在脑心肌炎病毒感染引起的天然免疫应答过程中的作用机制以及对病毒体外复制的影响,本研究应用分子生物学技术构建结构蛋白VP3的表达载体pCMV-Myc-VP3,转染HEK293细胞后,使其在细胞内过表达;感染病毒后,通过实时荧光定量PCR和TCID50分别检测病毒的基因组拷贝数和病毒滴度,以此验证VP3蛋白表达对EMCV体外增殖的影响;另通过荧光定量PCR检测VP3过表达对EMCV引起的IFN-β和信号通路相关因子mRNA转录水平的影响。结果表明,VP3蛋白可促进EMCV在HEK293细胞内的增殖,初步探索发现VP3蛋白可显著抑制IFN-β的表达。WesternBlot检测发现体外表达VP3后,MAVS蛋白的表达明显减少,但对MDA5表达无影响。试验数据初步表明,VP3蛋白可以通过抑制MAVS的表达拮抗I型IFN信号通路的活化,进而促进病毒增殖。

脑心肌炎病毒(EMCV)感染昆明小鼠模型的建立

目的:建立EMCV感染昆明小鼠模型。方法:6~8周龄昆明小鼠,雌雄各半,分为空白对照组和EMCV高(100TCID50/20 g)、中(10 TCID_(50)/20 g)、低(1 TCID50/20 g)剂量组。分别于EMCV感染5 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d称重,眼眶采血后,断颈处死。取心、脑、肝和脾组织,计算各器官脏器指数;qRT-PCR检测心、脑、脾、肝和外周血病毒载量;qRT-PCR检测心和脑IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达量;取心和脑,HE染色后观察组织病理损伤。结果:与空白对照组相比,高剂量的EMCV感染小鼠5 d时,能显著提高心脏指数(P<0.05)和极显著提高脾脏指数(P<0.01);qRT-PCR结果显示EMCV感染9 d时,小鼠心、脑、肝、脾和外周血病毒载量最高,中、低剂量EMCV感染小鼠各脏器中的病毒载量很低;高剂量的EMCV感染小鼠9 d时,心和脑IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.001)和TNF-α(P<0.01)极显著升高;9 d时,高剂量EMCV引起心脏组织炎症细胞浸润和空泡化病变;5~9 d时,高剂量EMCV引起脑组织脑膜增厚、脑膜下血管扩张和出血、脑白质血管扩张形成血管套。结论:EMCV攻毒剂量为0.2 ml 100 TCID_(50)/20 g时,成功建立EMCV感染昆明小鼠模型。

PGRN缺失对猪血凝性脑脊髓炎病毒脑内感染小鼠的影响

已有研究表明溶酶体与β冠状病毒复制密切相关,为研究调控溶酶体功能的关键蛋白颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)对β冠状病毒猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)复制的影响,本研究以PGRN缺失及其对照小鼠为研究对象,探究PGRN在PHEV脑内感染小鼠过程中的作用。研究发现,与PHEV脑内感染野生型小鼠相比,PGRN缺失小鼠脑内感染病毒后其存活时间延长,同时脑内病毒含量显著降低,细胞因子IFN和TNF-a的含量升高;此外,神经退行性病变相关蛋白TDP-43表达显著升高,表明PGRN缺失能减缓病毒的复制,增强免疫反应,并影响病毒的致病性。研究结果为进一步揭示溶酶体蛋白PGRN在PHEV复制过程中的作用机制提供研究基础,并为β冠状病毒致病机制研究提供参考。

河南省猪血凝性脑脊髓炎的流行病学调查

为了解河南省猪血凝性脑脊髓炎(PHE)的流行病学情况,从河南省各地区采集850份猪血清样本和29份PHE疑似病例的脑组织样品,进行猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)抗体检测和病原学检测。结果显示,阳性血清样本470份,阳性率为55.29%;不同地区猪血清样本HEV抗体检测结果差异较大,其中安阳市样本的HEV阳性率最高,为82.00%,洛阳市样本HEV阳性率最低,为28.00%。仔猪血清样本的HEV阳性率高达73.88%,种母猪血清样本HEV阳性率次之,为60.89%。29份PHE疑似病例的RT-PCR结果显示,HEV阳性率为79.31%,其中HEV与PRRSV的混合阳性率最高,为62.07%。综上所述,河南省各地区普遍存在HEV感染情况,45日龄以下的仔猪发病率最高,呈隐性感染,且多与PRRSV等病原混合感染。

猪血凝性脑脊髓炎的研究进展

1957年秋,加拿大安大略省报道了一种以高发病率、呕吐、厌食症、便秘和严重进行性消瘦为特征的种猪疾病。仔猪在6~7日龄前临床表现正常,之后开始出现临床症状,包括不哺乳、颤抖、蜷缩和尖叫,随后出现神经学症状,包括呕吐、共济失调、感觉亢奋和不协调。出现临床症状2~3天后死亡,该临床综合征的病原因其血凝特性被命名为“血凝性脑脊髓炎病毒”。该病毒从7~8日龄仔猪的原代猪肾细胞中分离出来,显示出病毒性脊髓灰质炎和脑脊髓炎的组织病理,包括神经元变性和胶质瘤等。

猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定

从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1h可被灭活，二价阳离子对病毒没有明显的保护作用。用EMCV多克隆抗体作间接免疫荧光，分离毒株感染的BHK-21细胞的胞浆中可见特异性荧光。对分离毒株进行了VP1和3D基因的扩增和序列测定，结果表明，2个毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为99．49％，氨基酸序列的同源性为98．46％，与GenBank中EMCV毒株的核苷酸序列同源性介于81．61％～99．59％，氨基酸序列同源性在95．5％以上；3D基因扩增片段序列与其它毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100％。基于VP1基因的系统进化树表明，2株分离毒均位于进化树的主干上，变异度不大。由此表明，EMCV感染已在我国猪场存在。

更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗加早期干预对新生儿巨细胞病毒感染脑损伤的影响

目的:探讨更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗加早期干预对新生儿巨细胞病毒感染(CMVI)脑损伤预后的影响。方法:97例CMVI脑损伤患儿分干预组44例(甲组),未干预组53例(乙组),并以正常足月儿30例(丙组)为对照。甲、乙两组的基本情况无明显差异(P均>0.05)。甲组予更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗加早期干预。结果:18个月时身长、体重、头围、智力发育指数(MDI)、心理运动发育指数(PDI)甲组高于乙组(P<0.01),运动落后、听力障碍、语言落后甲组均低于乙组(P<0.01)。结论:更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗及早期干预可以改善新生儿CMVI脑损伤的预后。

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体的调查

应用血凝和血凝抑制试验检测了从吉林省部分地区采集的猪血清中血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)抗体。结果,212份样品中有94份呈现HEV抗体阳性反应,阳性率高达44.3%。被采集血清的猪未表现临床症状,说明该地区的猪群中存在HEV隐性感染。

猪脑心肌炎病毒NJ08株基因组序列测定与分析

为测定猪源脑心肌炎病毒(EMCV)NJ08分离株全基因序列,本研究应用RT-PCR方法分5个基因片段扩增NJ08分离株的基因组,同时应用3'-RACE和5'-RACE技术扩增3'-UTR和5'-UTR,分别克隆于pMD18-T载体中进行测序,获得EMCVNJ08株全基因组cDNA序列,并将全基因组及其推导的氨基酸序列与GenBank中登录的国内外参考病毒株进行同源性比较及系统进化分析。结果表明:EMCVNJ08分离株基因组全长7724bp;属于Ia亚群;与GXLC、GX0602、BJC3、HB1等国内分离株以及BEL-2887A、CBNU、K3、K11、EMCV-R、PV21等国外分离株同源性达99%以上;EMCV流行株的非结构蛋白中3D最为保守,2A变异最大,结构蛋白中VP2最为保守,VP1变异最大。本研究丰富了我国EMCV分子流行病学资料。