辛德毕斯病毒装配及其6K蛋白与中间纤维的关系

用温和的选择性抽提方法与整装细胞电镜技术、DGD包埋-去包埋剂电镜技术相结合,对辛德毕斯病毒的装配与宿主细胞中间纤维的关系进行了探讨。电镜观察清晰地显示了病毒'装配中心'被中间纤维所网络,病毒的装配过程显然是以中间纤维为支架;正在装配的核壳体与已装配的核壳体紧密结合在中间纤维丝上。根据电镜照片分析,核壳体可能是沿中间纤维由装配中心向外扩散。应用人工合成6K 蛋白所得抗体进行胶体金标记,证明辛德毕斯病毒非结构性6K 蛋白也与中间纤维紧密结合。

猴艾滋病病毒(SRV)的装配及释放与细胞内骨架系统关系的电镜观察

将猴艾滋病 Ｄ 型逆转录病毒（ Ｓｉｍｉａｎ Ａ Ｉ Ｄ Ｓｔｙｐｅ Ｄｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ ， Ｓ Ｒ Ｖ１） 感染的 Ｒａｊｉ 细胞进行选择性抽提制备成“核骨架中间纤维”这一细胞内骨架系统，再结合常规电镜技术和 Ｄ Ｇ Ｄ 包埋去包埋剂电镜技术，对此病毒在宿主细胞内的装配和释放与这一骨架系统的关系进行了研究。结果表明 Ｓ Ｒ Ｖ１ 病毒核壳体的装配是在细胞核附近的胞质中进行的，其“装配中心”是结合在胞质骨架的中间纤维上，正在装配的和已装配好的病毒核壳体都是紧密结合在中间纤维上的。而在核内骨架系统中未观察到病毒粒子。这表明 Ｓ Ｒ Ｖ 的装配可能是依赖于胞质中的中间纤维作支架，且装配好的核壳体可能沿着中间纤维被运送至质膜内侧或胞质内病毒感染后形成的空泡膜上。

菜粉蝶野田村病毒感染宿主的病理学变化及病毒的装配

应用光学组织切片和电镜超薄切片技术对菜粉蝶新的野田村病毒感染菜青虫幼虫的组织病理学和超微病理 学变化以及菜青虫颗粒体病毒混合感染后的病理学变化进行了研究。结果表明该病毒只在菜青虫中肠细胞质内 增殖。病毒侵染时,线粒体、内质网等细胞器均发生显著病变。该病毒与前人报告的能侵染菜青虫的其它病毒均 有所不同。本文还讨论了野田村病毒的装配。

慢病毒载体的构建及优化

目的:针对慢病毒载体的基因组装、转导及基因表达的优化论述,及不同种属的慢病毒载体的最低活性加以说明,同时对慢病毒遗传体系的产生、转导效率和生物安全性进行总结。资料来源:应用计算机检索Pubmed以及美国SCI和Medline数据库2000-01/2004-12有关慢病毒载体的论文,检索词“lentivirusvectors,immunodeficiency”,并限定文章语言种类为English。同时应用计算机检索中国期刊网数据库1995-01/2005-12有关慢病毒载体构建的文章,限定文章语言种类为汉语,检索词“慢病毒载体”。资料选择:对检索到的相关信息及文章进行整理,选取针对性强的文章。纳入标准:①临床研究性文章。②基础研究文章。排除标准:①其他病毒载体的结构文献以及重复性资料。②诸多病毒实验应用性文献。③重复同一研究。资料提炼:共收集到198篇关于慢病毒结构原理的相关文献,其中包括英文文献150篇,中文文献48篇,有21篇符合纳入标准。资料综合:介绍不同源慢病毒载体的构建和慢病毒的基因位点。影响基因转移的一个主要因素是细胞的基因表达。人类转基因载体的一个重要特点是可以调节转基因的表达。调节转基因信号的另一个途径是运用可切割的前病毒产物。转基因载体是建立在逆转录病毒之上,主要包括肿瘤逆转录病毒和慢病毒,这些病毒载体系统是哺乳动物细胞外源基因传递、整合和表达的有效途径。结论:蛋白酶、rev.慢病毒蛋白和VSV/G糖蛋白均具有细胞毒性和抑制细胞的作用,当连续表达时要求使用诱导表达系统。

水稻矮缩病病毒粒子装配模型

水稻矮缩病病毒(RDV)具有多种蛋白质和RNA构成的核衣壳结构,但是特异性的RNA与蛋白质、蛋白质与蛋白质之间的相互作用和结合,即有关病毒粒子的装配机理还没有完全阐明。从细胞内和细胞外两个研究层次详细研究了RNA与蛋白质相互结合情况,研究发现,P7蛋白能特异并牢固地与RDV基因组的全部12条双链RNA结合;推定为RNA聚合酶的P1蛋白、鸟苷酰转移酶的P5蛋白和P7蛋白被包裹在病毒核内,根据体外结合实验,它们能与病毒转录产物mRNA结合;从病毒感染的组织中能够提取得到完整的、有感染活性的病毒粒子,以及缺失P1,P5,P7蛋白和基因组双链RNA,没有感染活性的空壳病毒粒子;在病毒粒子中P7蛋白能够与P1蛋白和P3内衣壳蛋白形成蛋白复合物。这些结果揭示了RDV病毒粒子装配的一种可能的模型,即核心蛋白和病毒mRNA首先相互结合形成一个整体,以筛选和富集病毒RNA,接着包装成为完整的、具有感染活性的病毒粒子。

Expression and Assembly Mechanism of the Capsid Proteins of a Satellite Virus (XSV) Associated with Macrobrachium rosenbergii Nodavirus

The extra small virus （XSV） is a satellite virus associated with Macrobrachium rosenbergii nodavirus （MrNV） and its genome consists of two overlapping ORFs, CP17 and CP16. Here we demonstrate that CP16 is expressed from the second AUG of the CP17 gene and is not a proteinase cleavage result of CP17. We further expressed CP17 and several truncated CP17s （in which the N-or C-terminus or both was deleted）, respectively, in Escherichia coli. Except for the recombinant plasmid CP17^AC10, all recombinant plasmids expressed soluble protein which assembled into virus-like particles （VLPs）, suggesting that the C-terminus is important for VLP formation.

疱疹病毒VP16研究进展

疱疹病毒VP16蛋白是疱疹病毒重要的皮层蛋白,参与病毒立即早期基因转录的激活、病毒在宿主细胞内的装配与释放等过程,与许多病毒蛋白和宿主蛋白都存在蛋白相互作用,且部分疱疹病毒VP16具有去泛素活性以及帮助病毒抵御宿主免疫的功能。本文将以疱疹病毒VP16蛋白的结构特点为基础来阐述VP16的功能及其复杂的相互作用,为深入研究疱疹病毒的成熟过程以及VP16涉及的相互作用提供参考。

耐核糖核酸酶内含长片段嵌合体RNA的病毒样颗粒的构建和表达

目的通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量及亲和力，构建新的原核表达系统，探讨表达内含长片段（达到理论上的1900bp）RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性。方法首先设计含HindⅢ和NotⅠ酶切位点的引物，扩增ms2包膜蛋白的编码成熟酶蛋白和衣壳蛋白的1700bp序列，并将原来的19mer的包装位点序列改变为C-5变异体（19 bp stem-loop结构中-5位的尿嘧啶改变为胞嘧啶），HindⅢ和NotⅠ酶切后，与用同样酶切的表达载体pET-28（b）相连接，得到重组载体pET-ms2-pac。应用重叠PCR扩增3种病毒的5段嵌合体序列（包括3段SARS-CoV基因、一段HCV基因和一段H5N1基因），并在SARS-CoV3和HCV序列之间插入一个19mer的变异体包装位点序列，在设计引物时，使嵌合体两端含有NotⅠ酶切位点，与NotⅠ酶切的重组载体pET-ms2-pac相连接，构建得到具有2个变异包装位点的表达载体pET-ms2-3V。同时构建3种对照重组表达载体，分别测定N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3 V 4种重组表达质粒表达产物的260nm吸光度（A260）值，根据公式A260=0．125mg／ml计算4种表达产物的表达效率。结果成功构建了4种原核表达载体：pET-ms2-3V、P-3V-pET-P、N-P3V-pET-P和N-P3V-pET-C。pET-ms2-3V和P-3V-pET-P经原核表达后得到含全长为1891的5段嵌合体RNA的病毒样颗粒；N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C其原核表达产物病毒样颗粒中仅包装了1200bp的目的嵌合体RNA。N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V的表达效率分别为0．23、0．35、0．35和0．51mg／ml。N-P3V-pET-C比N-P3V-pET-P表达效率高52％，而pET-ms2-3V比P-3V-pET-P表达效率高38％。所包装的RNA具有耐RNase和DNase消化的特性以及良好的不同温度条件下的稳定性。结论通过改变噬菌体ms2 RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量，可构建能表达内含达到理论上的约1900bp外源RNA的耐RNase病毒样颗粒的原核表达载体平台。通过应用包装位点的变异体C-变异体，可以增加病毒样颗粒的表达效率。

1983-2013年B型流感病毒的重配研究

目的 研究1983-2013年间B型流感病毒的重配变异情况.方法 对GenBank数据库中1983-2013年间具有8个片段全基因组序列的B型流感病毒进行分析,利用Simplot软件筛选重配病毒,利用MEGA软件进行系统进化分析验证重配病毒.结果 获得432株B型流感病毒的全基因组序列,在66株代表病毒中,共计发现了22株重配株,其中9个为系内重配,13个为系间重配.在9个系内重配病毒中,2个B/Vic-87系内重配,7个B/Yam-88系内重配.Simplot软件结果和MEGA软件验证结果相似.结论 B型流感病毒间的重配事件频繁发生,既存在系内重配,也存在两系间的重配.Simplot软件可以用于快速筛选B型流感重配病毒.

河北省卢龙地区猪与人G9型A组轮状病毒进化关系研究

目的 了解河北省卢龙地区猪与人G9型A组轮状病毒（GARV）主要基因的分子特征及进化关系.方法 选取1株2008年河北卢龙地区G9型GARV阳性的腹泻仔猪粪便标本LLP48及4株2009年至2011年卢龙地区G9型GARV阳性的5岁以下住院腹泻患儿粪便标本进行主要基因片段的扩增,测序后对获得的基因序列通过MEGA、DNAStar等生物软件进行序列比对、同源性分析和系统进化分析.结果 卢龙猪GARV LLP48与4株卢龙人GARV编码的VP7、VP6、NSP2和NSP4基因具有高度同源性,核苷酸和氨基酸同源性分别是89.4％～94％和94.8％ ～98.2％;VP4片段的核苷酸（氨基酸）同源性较低,为71.4％～71.6％（68.2％～69.0％）.系统进化分析表明,LLP48编码的VP7、VP6、NSP2和NSP4基因与人来源的毒株关系密切,而VP4基因与猪来源的毒株关系密切.结论 卢龙猪GARV LLP48可能是猪的VP4与人的VP7、VP6、NSP2和NSP4自然重组.

病毒包涵体在病毒感染细胞中的作用

病毒包涵体(viral inclusion bodies,IBs)是病毒蛋白在胞质或核内的聚集体,许多病毒能够形成病毒包涵体。早期研究认为,病毒包涵体只是病毒复制及组装的重要起始位点,然而最近研究发现,一些病毒形成的病毒包涵体在宿主细胞抗病毒免疫反应中具有一定作用。本文主要就病毒包涵体在病毒感染细胞中的作用进行综述。

结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在HIV-1晚期复制的作用及其抑制剂

人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiencyvirus type1,HIV-1)复制的晚期阶段是整个复制周期中的关键环节。该阶段HIV-1经装配、出芽释放和成熟过程产生能感染新靶细胞的成熟病毒颗粒。结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在此阶段发挥着重要作用,它通过协同自身不同区域,有利于蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA和蛋白质-脂质相互作用,从而促进成熟感染病毒颗粒的产生。针对此阶段设计的药物,可有效地阻断HIV-1成熟,从而抑制病毒感染。本文综述了结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在HIV-1晚期复制的作用及其抑制剂的研究进展。