羊传染性脓疱病毒口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白基因差异分析及原核表达

[目的]克隆羊传染性脓疱病毒(ORFV)口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白(CBP)基因并进行生物信息学分析及原核表达,为后续研究CBP基因在ORFV免疫逃逸机制中的作用提供基础数据。[方法]以患病羔羊口唇结痂和小肠提取的DNA为模板设计特异性引物,进行PCR扩增并克隆测序,对表达的CBP基因遗传进化关系及蛋白理化性质、结构特点进行分析;利用原核表达系统pGEX-4T-1构建重组质粒pGEX-4T-1-CBP-K、pGEX-4T-1-CBP-N并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blotting对蛋白进行抗原性分析。[结果]经测序,ORFV口唇感染株CBP基因全长873 bp,内脏感染株CBP基因全长846 bp,且后者在第217 bp处有24 bp碱基的丢失。系统进化树显示,口唇与内脏感染株不属于同一进化分支,遗传距离较远;口唇感染株CBP基因与中国吉林分离株亲缘关系最近;内脏感染株CBP基因与马来西亚分离株亲缘关系最近。口唇感染株CBP基因编码291个氨基酸,内脏感染株CBP基因编码282个氨基酸,蛋白二级结构均主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构有5处差异,主要是α-螺旋和β-折叠的变化。试验成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,其在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中以包涵体形式表达CBP融合蛋白,分子质量约为60 ku。[结论]本研究内脏感染株与口唇感染株相比,存在24 bp的缺失,并成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,可在大肠杆菌中表达CBP融合蛋白。本研究结果为揭示CBP在ORFV与宿主互作中发挥的作用提供参考,也可为寻找新的羊传染性脓疱防治方法提供依据。

病毒巨噬细胞炎性蛋白与趋化因子受体结合的效应分析

目的:探讨人疱疹病毒8 K6基因编码的产物病毒巨噬细胞炎性蛋白(viral m acrophage inflamm atory prote in,vM IP)是否具有结合趋化因子受体以及趋化作用。方法:受体配体交联试验检测vM IP与受体结合能力。趋化实验及细胞内钙流检测判断vM IP的生物学活性。结果:vM IP可与外周血单个核细胞(PBMCs)膜上的趋化因子受体结合,抑制hM IP-1α对PBMC的趋化能力,EC50为3.39 ng/m l。其本身只有较弱的趋化能力。钙流实验证实vM IP轻度升高胞内钙离子浓度,但可明显抑制hM IP-1α所引起的胞内钙离子高峰。结论:重组vM IP与hM IP-1α受体(CCR5)结合后,可有效的阻断人源性趋化因子的结合与信号传导,但其本身对细胞未有明显的激活作用,因此可作为趋化因子受体的天然阻断剂,可用于免疫移植中的排斥反应或H IV-1病毒感染等。

羊痘病毒G蛋白偶联趋化因子受体基因序列分析及其在鉴别病毒种属上的作用

为明确G蛋白偶联趋化因子受体(GpCR)基因在羊痘病毒种属鉴别中的作用,本实验对3株绵羊痘病毒(SPV)和2株山羊痘病毒(GPV)弱毒疫苗株的GpCR进行了克隆测序,并与GenBank中登录的21个羊痘病毒属成员相关序列进行了比对。核酸同源性分析表明SPV不同毒株之间同源性达到99.5%～99.8%;GPV之间同源性达到98.8%～99.8%;GenBank上公布的疙瘩皮肤病病毒(LSDV)之间同源性达到100%。而GPV、SPV和皮肤疙瘩病毒两两比对的同源性仅达到94.2%～95.9%。对GpCR的系统进化树分析可以看出GPV、SPV和LSDV分别位于不同的进化分枝上,而GPV与LSDV具有更近的亲缘关系。GpCR基因在鉴别GPV属和流行病学分析中具有重要价值。

分泌型卷曲相关蛋白5、CXC趋化因子受体4、8-异构前列腺素水平与支气管哮喘病儿气道炎症、气道重塑的关系

目的探究支气管哮喘病儿血清分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、CXC趋化因子受体4(CXCR4)、8-异构前列腺素(8-iso PG)水平与气道炎症、气道重塑的关系及联合评估病情程度的价值。方法选取2018年1月至2020年8月攀枝花市中心医院收治的支气管哮喘病儿113例作为研究对象,按照病情程度分为轻度组、中度组、重度组,比较三组一般资料、血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG水平、气道炎症指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性人基质裂解素2(sST2)、白细胞介素-17(IL-17)]、气道重塑指标[痰液转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、骨桥蛋白(OPN)],分析血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG与气道炎症、气道重塑指标及病情程度的关系,评价血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG对病情程度的评估价值。结果ACT评分、FEV_(1)占预估值、PEF占预估值、FEV_(1)/FVC:重度组<中度组<轻度组(P<0.05);重度组血清CXCR4、8-iso PG水平分别为(10.69±3.56)μg/L、(37.58±12.14)ng/L,高于中度组[(5.34±1.77)μg/L、(24.19±8.06)ng/L]和轻度组[(2.16±0.72)μg/L、(16.32±5.40)ng/L],且中度组血清CXCR4、8-iso PG高于轻度组(P<0.05);重度组血清SFRP5为(6.05±1.93)μg/L,低于中度组[(8.56±2.05)μg/L]、轻度组[(10.63±2.11)μg/L],且中度组血清SFRP5低于轻度组(P<0.05);血清TNF-α、sST2、IL-17、TGF-β1、MMP-9、OPN:重度组>中度组>轻度组(P<0.05);在调整ACT评分、FEV_(1)占预估值、PEF占预估值、FEV_(1)/FVC、气道炎症、气道重塑指标等其他因素后,血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG仍与支气管哮喘病儿病情程度显著关联(P<0.05);ROC分析显示:血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG及其联合应用对支气管哮喘病儿病情程度的评估价值,AUC(95%CI)分别为0.72(0.51,0.94)、0.81(0.69,0.93)、0.75(0.51,0.99)、0.87(0.83,0.92)。结论血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG可通过调控支气管哮喘气道炎症、气道重塑,影响病情程度,联合检测三者水平有望为病情程度的评估提供一种新的方法。

CXC趋化因子9在冷球蛋白血症慢性丙型病毒性肝炎患者血清中表达水平及其对抗病毒疗效的影响

目的探讨CXC趋化因子9在冷球蛋白血症慢性丙型病毒性肝炎(CHC)患者血清中表达水平及其对抗病毒疗效的影响。方法我院收治的100例冷球蛋白血症CHC患者(观察组)和60例同期我院体检正常者(对照组),观察组予聚乙二醇干扰素ɑ-2ɑ联合利巴韦林治疗,所有研究对象均进行CXC趋化因子9等相关指标的检测,分析影响CHC患者抗病毒治疗效果的相关因素。结果观察组血清CXC趋化因子9水平高于对照组(P <0. 001)。观察组快速病毒学应答率(RVR)为32%、完全早期病毒学应答率(c EVR)为66. 00%,持续病毒学应答率(SVR)为64. 00%。存在CHC家族史及总胆红素(TBIL)、CXC趋化因子9和HCV RNA水平过高为导致冷球蛋白血症CHC患者未能出现SVR的独立危险因素(P <0. 05)。结论在冷球蛋白血症CHC患者中血清CXC趋化因子9以较高水平表达,且为影响其抗病毒治疗效果的独立影响因素,可将CXC趋化因子9的检测作为临床上预测冷球蛋白血症CHC患者抗病毒治疗效果的有效指标。

高迁移率族蛋白B1巨噬细胞转移抑制因子联合CXC亚家族趋化因子16对高危型HPV感染患者诊断价值

目的:探究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、巨噬细胞转移抑制因子(MIF)联合CXC亚家族趋化因子16(CXCL16)在高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染患者中的表达意义及诊断价值。方法:纳入本院2020年10月至2023年10月期间接诊的150例HPV感染患者作为研究组,根据患者核酸检测结果分为高危型HPV感染组(n=40)和低危型HPV感染(n=110)。另选取同期于本院接受经阴道镜活检检查的健康女性作为对照组(n=100)。对研究组患者均采用HPV-DNA分型试剂盒检测;对研究组和对照组人员采用酶联免疫吸附法检测HMGB1和CXCL16水平,免疫组化检测MIF染色强度。对比对照组和研究组HMGB1、MIF和CXCL16差异;对比低危型和高危型HPV感染组HMGB1、MIF和CXCL16差异;采用受试者特征曲线(ROC)分析HMGB1、MIF和CXCL16联合检测对高危型HPV感染诊断价值;Spearman相关性分析HMGB1、MIF和CXCL16与不同HPV感染分型相关性。结果:与对照组相比,研究组血清HMGB1、CXCL16水平和MIF阳性细胞占比得分显著更高(均P<0.05);与低危型HPV感染组相比,高危型HPV感染组血清HMGB1、CXCL16水平和MIF阳性细胞占比得分显著更高(均P<0.05);ROC工作曲线分析结果显示HMGB1、MIF和CXCL16单独及联合诊断高危型HPV感染的AUC分别为0.748、0.684、0.791和0.934,联合检测诊断价值显著高于单独检测(Z=2.577、3.152、2.096,均P<0.05);Spearman相关性结果显示HMGB1、MIF和CXCL16与不同HPV感染分型存在显著正相关(r=0.615、0.633、0.649均P<0.05)。结论:高危型HPV感染患者血清HMGB1、CXCL16水平和MIF阳性细胞占比得分显著高于低危型和对照组,临床检查中应用HMGB1、MIF和CXCL16联合检测可提升高危型HPV感染临床诊断率,为临床提供一种新型检测方法和治疗依据。

病毒趋化因子结合蛋白

病毒趋化因子结合蛋白分为 3型 ,Ⅰ型为可溶性IFN rR ,Ⅱ型为T1/ 35kD蛋白家族 ,Ⅲ型为M3蛋白 ,它们都能结合多种趋化因子 。

索非布韦联合利巴韦林治疗基因2和3型的丙型肝炎过程中炎症细胞因子/趋化因子的时间动力学

【据《Hepatology》2015年7月报道】题：索非布韦联合利巴韦林治疗基因2和3型的丙型肝炎过程中炎症细胞因子/趋化因子的时间动力学（作者Carlin AF等）对HCV感染患者的炎症细胞因子和趋化因子进行分析,增加对病毒-宿主相互作用的理解,并且确定治疗应答的预测因子。很难解释干扰素（IFN）治疗过程中免疫活化的生物标志物。无IFN的直接作用的抗病毒药物方案目前用来治疗丙型肝炎具有优越的疗效。为了观察治疗前、治疗期间和治疗后HCV-宿主的相互作用,

作为人艾滋病毒进入细胞的辅助受体的趋化因子受体

作为人艾滋病毒进入细胞的辅助受体的趋化因子受体贲昆龙李劲光（中科院昆明动物研究所免疫学实验室，昆明６５０２２３）有囊膜的病毒进入细胞时，首先是病毒表面的囊膜蛋白（ＥＮＶ）与细胞表面的专一受体结合，然后病毒的糖蛋白介导病毒膜与靶细胞的膜发生融合。人艾滋...

程序性死亡受体-配体1、叉头蛋白3、趋化因子配体22和人乳头瘤病毒在宫颈病变免疫微环境调节中的表达特征

目的探讨程序性死亡受体-配体1(PD-L1)、叉头蛋白3(FoxP3)、趋化因子配体22(CCL22)和人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈病变免疫微环境调节中的表达特征。方法选取2020年1月至2021年12月于上饶市人民医院手术切除的28份宫颈癌癌组织、17份宫颈上皮内瘤样变(CIN)的宫颈上皮内瘤样变组织、15份子宫肌瘤而无宫颈病变进行全子宫切除术的组织标本作为研究对象。分析组织标本中PD-L1、FoxP3、CCL22和HPV的阳性表达率。结果宫颈癌组织中PD-L1、FoxP3、CCL22表达量均高于宫颈上皮内瘤组织,宫颈上皮内瘤组织高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织HPV阳性率与宫颈上皮内瘤组织比较差异无统计学意义。宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤组织HPV阳性率均高于正常组织,宫颈癌组织HPV阳性率高于宫颈上皮内瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织高表达FOXP3蛋白、PD-L1、CCL22,检测上述指标能为判断HPV感染和宫颈病变及癌变预后提供新的参考依据。

趋化因子受体和干扰素诱导蛋白10与HCV、HIV感染相关性的研究

目的:探讨趋化因子受体3(CXCR3)及配体干扰素诱导蛋白10(IP-10)在丙型肝炎病毒(HCV)感染,艾滋病病毒(H IV)感染和HCV/H IV合并感染过程中的表达及意义。方法:采用流式细胞术,检测HCV感染组、H IV感染组、HCV/H IV感染组及正常对照组人外周血CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞表面CXCR3的表达。ELISA方法检测IP-10浓度。结果:除正常对照组外,血清IP-10水平均明显升高,以合并感染升高最为明显;H IV组及合并感染组CD4+T淋巴细胞表面CXCR3表达显著降低(P<0.01),CD8+T淋巴细胞表面CXCR3表达显著升高(P<0.01);HCV感染组CD4+和CD8+T细胞表面CX-CR3表达轻度升高。结论:趋化因子IP-10及淋巴细胞表面受体CXCR3与丙型肝炎病毒/艾滋病病毒感染密切相关。

人疱疹病毒8编码的趋化因子vMIP-II在大肠杆菌的优化表达

目的:探讨优化vMIP-II/MBP融合蛋白表达载体pMal在原核细胞中的表达条件,并对其表达产物进行纯化。方法:通过接菌、诱导表达,实验了解诱导时不同的温度、诱导时间、IPTG浓度对蛋白表达量的影响,并进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶(SDS-PAGE)电泳分析。结果:发现该菌在含0 3mmol/LIPTG的TB培养基中,28℃诱导表达4h,可使诱导蛋白表达量占菌体蛋白总量的10%。结论:vMIP-Ⅱ/MBP的表达受温度条件影响较大,低温诱导时表达水平较高。从而为该工程菌的中试提供了实验基础。

新城疫病毒感染通过蛋白激酶激活NF-κB信号通路诱导干扰素和炎症因子的表达

[目的]本文旨在探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染过程中细胞因子显著上调的机制。[方法]NDV感染He La细胞,用RT-PCR法检测IFN-β、IL-6、IL-8 mRNA水平。Western blot分析和免疫荧光分析检测NDV对双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)与NF-κB信号通路的影响。[结果]与未感染组相比,IFN-β、IL-6、IL-8 mRNA水平显著上调。NF-κB信号通路在感染后12~24 h被激活,转录因子p65入核,而使用NF-κB信号通路抑制剂IKK16则显著降低了干扰素和炎症因子的表达,证明NF-κB信号通路介导NDV感染过程中的细胞因子表达和炎症反应。另外,在病毒感染过程中,病原模式识别受体PKR被诱导表达并且被磷酸化激活。使用抑制剂2-氨基嘌呤抑制PKR活性后,能够抑制p65的入核,并减少由NDV诱导的干扰素和炎症因子表达。[结论]NDV感染能够通过PKR调控NF-κB信号通路,引起细胞因子显著上调。

支气管哮喘患者血清骨桥蛋白和嗜酸细胞趋化因子表达及临床意义

支气管哮喘是慢性气道炎症性疾病,嗜酸性粒细胞在气道炎症反应中起重要作用。现认为细胞因子网络失衡是发病的基础,而Th2细胞因子、嗜酸细胞趋化因子（eotaxin）共同诱导的嗜酸性粒细胞募 集与浸润，进而引起气道炎症则可能是发病的关键。骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）是一种分泌性糖基化磷蛋白，近来认为它既归为细胞外基质蛋白又属于细胞因子。

参苓白术散治疗急性轮状病毒感染性腹泻的疗效及对患儿免疫球蛋白、炎症因子的影响

目的观察参苓白术散治疗急性轮状病毒感染性腹泻的疗效,并探讨其对患儿免疫球蛋白(Ig)、炎症因子的影响。方法选择2021年3月至2022年3月陕西中医药大学附属医院儿科收治的150例急性轮状病毒感染性腹泻患儿作为研究对象,按照随机数表法分为观察组和对照组各75例。对照组患儿给予常规治疗,观察组患儿在对照组治疗的基础上联合参苓白术散治疗,均持续治疗4~7 d。比较两组患儿的临床疗效、症状改善时间以及治疗前后的IgA、IgM、IgG、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10水平及治疗期间的不良反应发生情况。结果观察组患儿的临床治疗总有效率为92.00%,明显高于对照组的80.00%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患儿的体温恢复时间、大便性状及大便次数正常时间、腹痛消失时间分别为(1.86±0.24)d、(2.84±0.39)d、(3.76±0.54)d、(1.24±0.27)d,明显短于对照组的(2.15±0.22)d、(3.69±0.51)d、(4.90±0.61)d、(1.83±0.33)d,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患儿的IgA、IgM、IgG水平分别为(2.03±0.25)g/L、(1.23±0.22)g/L、(10.26±1.33)g/L,明显高于对照组的(1.74±0.20)g/L、(1.02±0.19)g/L、(9.15±1.24)g/L,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患儿的血清TNF-α、IL-6、IL-10水平分别为(10.14±2.33)pg/m L、(11.57±2.10)pg/m L、(41.35±6.29)pg/m L,明显低于对照组的(15.69±2.48)pg/mL、(15.18±2.52)pg/mL、(56.83±7.16)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组和对照组患儿的不良反应总发生率为2.67%、4.00%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论参苓白术散治疗急性轮状病毒感染性腹泻可有效改善患儿的免疫功能,降低炎症因子水平,临床治疗效果显著。

新型冠状病毒刺突蛋白对单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 探讨SARS-CoV-2对单核巨噬细胞分泌炎症因子的作用及机制。方法 纳入石家庄市第五医院2020年1月21日至2月10日以及2021年1月3日至1月7日住院的COVID-19确诊患者(病例组)与健康对照者(对照组)各53例,收集病例资料与血常规检测结果。采用SARS-CoV-2刺突蛋白刺激单核巨噬细胞,细胞增殖-毒性检测细胞活力,荧光定量PCR法检测炎症因子IL-6、IL-1β和CCL2与信号通路分子JAK1、STAT1和NF-κB的表达。结果 COVID-19患者的单核细胞比值与中性粒细胞比值高于对照组,而淋巴细胞比值、淋巴细胞计数、嗜酸性粒细胞比值、嗜酸性粒细胞计数与红细胞压积低于对照组。SARS-CoV-2刺突蛋白刺激单核巨噬细胞后,在100ng/ml与300ng/ml的浓度下细胞活力高于对照组(P=0.046),在浓度为500ng/ml时IL-6、IL-1β与CCL2的mRNA表达含量最高(P<0.01,P=0.036,P <0.001),在浓度100ng/ml时JAK1与STAT1的mRNA表达明显升高(P <0.001),在300ng/ml与500ng/ml刺激下,NF-κB表达增高(P<0.001)。结论 COVID-19患者的单核细胞升高,SARS-CoV-2刺突蛋白可能通过JAK1/STAT1信号通路促进单核巨噬细胞分泌炎症因子,在细胞因子风暴中发挥作用。

基于NLRP3炎症小体研究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6对病毒性心肌炎细胞损伤的保护作用

目的:研究补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(C1q/tumor necrosis factor-related protein 6,CTRP6)对柯萨奇病毒B3(Coxsackie B3 virus,CBV3)诱导的病毒性心肌炎细胞损伤的调控作用,并探讨其可能的作用机制。方法:通过CBV3感染人心肌细胞系AC-16来建立病毒性心肌炎的体外细胞模型。通过表达质粒转染技术来实现CTRP6在心肌细胞中的过表达。细胞分为4组:正常组、CBV3组、CBV3+空载体组和CBV3+CTRP6载体组。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法检测mRNA表达水平。采用Western blotting方法检测蛋白表达水平。采用相应的试剂盒测量肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin-I,cTn-I)的活性水平。利用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling,TUNEL)检测细心肌细胞胞凋亡。利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测量炎症因子浓度。采用RNA沉默技术来敲除AdipoR1在心肌细胞中的表达。结果:与正常组相比,CBV3感染组心肌细胞中CTRP6的表达水平显著降低(P<0.01)。CBV3感染心肌细胞显著提高CK-MB和cTn-I的活性水平,并增加凋亡细胞数量和炎症因子的释放(P<0.01)。与CBV3+空载体相比,CBV3+CTRP6载体组心肌细胞中的CK-MB和cTn-I的活性水平显著下降,凋亡细胞数量显著减少,炎症因子的释放显著降低(P<0.01)。与CBV3+空载体组相比,过表达CTRP6可显著抑制CBV3感染的诱导的NLRP3炎症小体的激活(P<0.01)。敲除AdiopR1则显著阻断CTRP6对心肌炎细胞损伤的保护作用(P<0.01)。结论:CTRP6通过作用于AdiopR1受体抑制NLRP3炎症小体的激活来减轻CBV3诱导的病毒性心肌炎细胞损伤。