病毒趋化因子结合蛋白

病毒趋化因子结合蛋白分为 3型 ,Ⅰ型为可溶性IFN rR ,Ⅱ型为T1/ 35kD蛋白家族 ,Ⅲ型为M3蛋白 ,它们都能结合多种趋化因子 。

羊传染性脓疱病毒口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白基因差异分析及原核表达

[目的]克隆羊传染性脓疱病毒(ORFV)口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白(CBP)基因并进行生物信息学分析及原核表达,为后续研究CBP基因在ORFV免疫逃逸机制中的作用提供基础数据。[方法]以患病羔羊口唇结痂和小肠提取的DNA为模板设计特异性引物,进行PCR扩增并克隆测序,对表达的CBP基因遗传进化关系及蛋白理化性质、结构特点进行分析;利用原核表达系统pGEX-4T-1构建重组质粒pGEX-4T-1-CBP-K、pGEX-4T-1-CBP-N并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blotting对蛋白进行抗原性分析。[结果]经测序,ORFV口唇感染株CBP基因全长873 bp,内脏感染株CBP基因全长846 bp,且后者在第217 bp处有24 bp碱基的丢失。系统进化树显示,口唇与内脏感染株不属于同一进化分支,遗传距离较远;口唇感染株CBP基因与中国吉林分离株亲缘关系最近;内脏感染株CBP基因与马来西亚分离株亲缘关系最近。口唇感染株CBP基因编码291个氨基酸,内脏感染株CBP基因编码282个氨基酸,蛋白二级结构均主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构有5处差异,主要是α-螺旋和β-折叠的变化。试验成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,其在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中以包涵体形式表达CBP融合蛋白,分子质量约为60 ku。[结论]本研究内脏感染株与口唇感染株相比,存在24 bp的缺失,并成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,可在大肠杆菌中表达CBP融合蛋白。本研究结果为揭示CBP在ORFV与宿主互作中发挥的作用提供参考,也可为寻找新的羊传染性脓疱防治方法提供依据。

羊传染性脓疱病毒趋化因子结合蛋白(CBP)基因的克隆及表达分析

参照GenBank中ORFV的毒力因子CBP基因的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,采用PCR方法扩增该基因片段,并克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,经PCR、酶切鉴定和测序正确后,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG进行诱导表达,并通过生物信息学软件进行分析。SDS-PAGE结果可见大小约为49 000的融合蛋白条带,抗原性分析表明其具有良好的免疫原性;此外,Western-blotting试验结果确证了GST-CBP融合蛋白的表达并证实其具有良好的免疫原性。结果表明,本研究成功诱导表达GST-CBP融合蛋白,这将为进一步研究CBP的功能及理化特性,以及开发以CBP为基础的诊断抗原奠定了物质基础。

病毒巨噬细胞炎性蛋白与趋化因子受体结合的效应分析

目的:探讨人疱疹病毒8 K6基因编码的产物病毒巨噬细胞炎性蛋白(viral m acrophage inflamm atory prote in,vM IP)是否具有结合趋化因子受体以及趋化作用。方法:受体配体交联试验检测vM IP与受体结合能力。趋化实验及细胞内钙流检测判断vM IP的生物学活性。结果:vM IP可与外周血单个核细胞(PBMCs)膜上的趋化因子受体结合,抑制hM IP-1α对PBMC的趋化能力,EC50为3.39 ng/m l。其本身只有较弱的趋化能力。钙流实验证实vM IP轻度升高胞内钙离子浓度,但可明显抑制hM IP-1α所引起的胞内钙离子高峰。结论:重组vM IP与hM IP-1α受体(CCR5)结合后,可有效的阻断人源性趋化因子的结合与信号传导,但其本身对细胞未有明显的激活作用,因此可作为趋化因子受体的天然阻断剂,可用于免疫移植中的排斥反应或H IV-1病毒感染等。

羊痘病毒G蛋白偶联趋化因子受体基因序列分析及其在鉴别病毒种属上的作用

为明确G蛋白偶联趋化因子受体(GpCR)基因在羊痘病毒种属鉴别中的作用,本实验对3株绵羊痘病毒(SPV)和2株山羊痘病毒(GPV)弱毒疫苗株的GpCR进行了克隆测序,并与GenBank中登录的21个羊痘病毒属成员相关序列进行了比对。核酸同源性分析表明SPV不同毒株之间同源性达到99.5%～99.8%;GPV之间同源性达到98.8%～99.8%;GenBank上公布的疙瘩皮肤病病毒(LSDV)之间同源性达到100%。而GPV、SPV和皮肤疙瘩病毒两两比对的同源性仅达到94.2%～95.9%。对GpCR的系统进化树分析可以看出GPV、SPV和LSDV分别位于不同的进化分枝上,而GPV与LSDV具有更近的亲缘关系。GpCR基因在鉴别GPV属和流行病学分析中具有重要价值。

CXC趋化因子9在冷球蛋白血症慢性丙型病毒性肝炎患者血清中表达水平及其对抗病毒疗效的影响

目的探讨CXC趋化因子9在冷球蛋白血症慢性丙型病毒性肝炎(CHC)患者血清中表达水平及其对抗病毒疗效的影响。方法我院收治的100例冷球蛋白血症CHC患者(观察组)和60例同期我院体检正常者(对照组),观察组予聚乙二醇干扰素ɑ-2ɑ联合利巴韦林治疗,所有研究对象均进行CXC趋化因子9等相关指标的检测,分析影响CHC患者抗病毒治疗效果的相关因素。结果观察组血清CXC趋化因子9水平高于对照组(P <0. 001)。观察组快速病毒学应答率(RVR)为32%、完全早期病毒学应答率(c EVR)为66. 00%,持续病毒学应答率(SVR)为64. 00%。存在CHC家族史及总胆红素(TBIL)、CXC趋化因子9和HCV RNA水平过高为导致冷球蛋白血症CHC患者未能出现SVR的独立危险因素(P <0. 05)。结论在冷球蛋白血症CHC患者中血清CXC趋化因子9以较高水平表达,且为影响其抗病毒治疗效果的独立影响因素,可将CXC趋化因子9的检测作为临床上预测冷球蛋白血症CHC患者抗病毒治疗效果的有效指标。

高迁移率族蛋白B1巨噬细胞转移抑制因子联合CXC亚家族趋化因子16对高危型HPV感染患者诊断价值

目的:探究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、巨噬细胞转移抑制因子(MIF)联合CXC亚家族趋化因子16(CXCL16)在高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染患者中的表达意义及诊断价值。方法:纳入本院2020年10月至2023年10月期间接诊的150例HPV感染患者作为研究组,根据患者核酸检测结果分为高危型HPV感染组(n=40)和低危型HPV感染(n=110)。另选取同期于本院接受经阴道镜活检检查的健康女性作为对照组(n=100)。对研究组患者均采用HPV-DNA分型试剂盒检测;对研究组和对照组人员采用酶联免疫吸附法检测HMGB1和CXCL16水平,免疫组化检测MIF染色强度。对比对照组和研究组HMGB1、MIF和CXCL16差异;对比低危型和高危型HPV感染组HMGB1、MIF和CXCL16差异;采用受试者特征曲线(ROC)分析HMGB1、MIF和CXCL16联合检测对高危型HPV感染诊断价值;Spearman相关性分析HMGB1、MIF和CXCL16与不同HPV感染分型相关性。结果:与对照组相比,研究组血清HMGB1、CXCL16水平和MIF阳性细胞占比得分显著更高(均P<0.05);与低危型HPV感染组相比,高危型HPV感染组血清HMGB1、CXCL16水平和MIF阳性细胞占比得分显著更高(均P<0.05);ROC工作曲线分析结果显示HMGB1、MIF和CXCL16单独及联合诊断高危型HPV感染的AUC分别为0.748、0.684、0.791和0.934,联合检测诊断价值显著高于单独检测(Z=2.577、3.152、2.096,均P<0.05);Spearman相关性结果显示HMGB1、MIF和CXCL16与不同HPV感染分型存在显著正相关(r=0.615、0.633、0.649均P<0.05)。结论:高危型HPV感染患者血清HMGB1、CXCL16水平和MIF阳性细胞占比得分显著高于低危型和对照组,临床检查中应用HMGB1、MIF和CXCL16联合检测可提升高危型HPV感染临床诊断率,为临床提供一种新型检测方法和治疗依据。

趋化因子结合蛋白在肿瘤中的作用及临床意义

趋化因子及其受体与肿瘤的发生、发展过程密切相关,针对趋化因子受体的抗体及小分子拮抗剂可能具有抗肿瘤作用。然而肿瘤微环境中的趋化因子为数众多,相互关系极其复杂,有必要确立针对趋化因子网络的多靶点调控策略。DARC、D6、CCX-CKR、Evasins、US28等趋化因子结合蛋白(CKBP)可以同时捕获肿瘤微环境中的多种促肿瘤性趋化因子,管控肿瘤细胞的生物学行为,已经或正在呈现出广阔的应用前景。

急性缺血性脑卒中老年患者血清脂肪型脂肪酸结合蛋白和趋化因子CXCL12水平及临床意义

目的探讨老年急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)和趋化因子CXCL12水平,分析其临床意义。方法 AIS患者60例为AIS组,同期体检健康者50例为对照组。检测两组血清A-FABP和趋化因子CXCL12水平。采取美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评定AIS患者的神经功能缺损程度。应用格拉斯哥(GCS)相关评分标准评定AIS患者昏迷程度。检测脑梗死面积及血压。对AIS患者进行3个月随访观察,记录死亡病例数。分析血清A-FABP和趋化因子CXCL12水平与AIS临床病理因素间的相关性。结果 AIS组血清A-FABP和趋化因子CXCL12水平明显高于对照组(P<0. 01)。AIS患者血清A-FABP和趋化因子CXCL12水平与NIHSS评分、GCS评分及脑梗死面积呈显著性相关(P<0. 01),与年龄、性别、血压无显著性相关(P>0. 05)。随访3个月,死亡17例,存活43例,死亡组入院时血清A-FABP和趋化因子CXCL12水平显著高于存活组(P<0. 01)。结论血清A-FABP和趋化因子CXCL12水平明显提高,可能是评价AIS患者病情及预后的重要临床指标。

RNA结合蛋白ELAVL1的功能及其调控病毒复制的研究进展

胚胎致死异常视觉蛋白1(embryonic lethal abnormal vision like 1, ELAVL1),又被称为人类抗原R(human antigen R, HuR),是一种典型的RNA结合蛋白(RNA binding protein, RBP),通过与3′非翻译区(3′untranslated element, 3′UTR)的AU富含元件(AU-rich element, ARE)结合,在mRNA转录和翻译过程中发挥重要作用。ELAVL1的作用十分广泛,可调控肿瘤的发生发展、凋亡、迁移与侵袭,是许多癌症治疗的关键靶点,还能参与调节编码器官发育和组织稳态的蛋白质和mRNA的水平,也有许多研究表明,ELAVL1通过转录后调控和翻译后修饰来调节病毒复制。本文主要综述了ELAVL1的生物学特点、功能、调控机制及其在病毒复制过程中的调控作用,旨在为进一步研究ELAVL1与畜禽病毒复制之间互作的机制提供理论参考。

vMIP对细胞膜上趋化因子受体亲和力的结合特性研究

目的通过病毒巨噬细胞炎性蛋白(vMIP)对外周血中单个核细胞(PBMC)膜上趋化因子受体结合的比较性研究,阐明vMIP与受体的结合能力。方法通过放射性配体受体结合实验,利用饱和实验、动力学实验和特异性分析,鉴定vMIP的受体结合能力。结果vMIP与人、食蟹猴PBMC膜上受体结合的Kd分别为11.1、14.3nmol/L,对趋化因子受体CCR5和CXCR4竞争结合的IC50分别为3.4、4.5nmol/L。结论提示了vMIP与膜上受体有较高的亲和力,并对CCR5和CXCR4具有高度特异性,可能对防治炎症及HIV1感染等具有重要意义。

作为人艾滋病毒进入细胞的辅助受体的趋化因子受体

作为人艾滋病毒进入细胞的辅助受体的趋化因子受体贲昆龙李劲光（中科院昆明动物研究所免疫学实验室，昆明６５０２２３）有囊膜的病毒进入细胞时，首先是病毒表面的囊膜蛋白（ＥＮＶ）与细胞表面的专一受体结合，然后病毒的糖蛋白介导病毒膜与靶细胞的膜发生融合。人艾滋...

程序性死亡受体-配体1、叉头蛋白3、趋化因子配体22和人乳头瘤病毒在宫颈病变免疫微环境调节中的表达特征

目的探讨程序性死亡受体-配体1(PD-L1)、叉头蛋白3(FoxP3)、趋化因子配体22(CCL22)和人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈病变免疫微环境调节中的表达特征。方法选取2020年1月至2021年12月于上饶市人民医院手术切除的28份宫颈癌癌组织、17份宫颈上皮内瘤样变(CIN)的宫颈上皮内瘤样变组织、15份子宫肌瘤而无宫颈病变进行全子宫切除术的组织标本作为研究对象。分析组织标本中PD-L1、FoxP3、CCL22和HPV的阳性表达率。结果宫颈癌组织中PD-L1、FoxP3、CCL22表达量均高于宫颈上皮内瘤组织,宫颈上皮内瘤组织高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织HPV阳性率与宫颈上皮内瘤组织比较差异无统计学意义。宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤组织HPV阳性率均高于正常组织,宫颈癌组织HPV阳性率高于宫颈上皮内瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织高表达FOXP3蛋白、PD-L1、CCL22,检测上述指标能为判断HPV感染和宫颈病变及癌变预后提供新的参考依据。

重症腺病毒肺炎患儿血清肝素结合蛋白和肿瘤坏死因子-α表达水平及其对疾病预后评估价值研究

目的分析血清肝素结合蛋白(heparin binding protein,HBP)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α与儿童重症腺病毒肺炎的关系及其对预后的评估价值。方法收集长沙市中心医院儿童医学中心2016年3月~2020年8月住院治疗的232例腺病毒肺炎患儿,根据病情程度分为重症肺炎组(n=170)和非重症肺炎组(n=62);根据预后情况将重症腺病毒肺炎患儿分为预后良好组(n=116)和预后不良组(n=54)。收集患儿病程、电解质紊乱、循环系统并发症等一般资料;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测患儿血清HBP和TNF-α水平,记录患者序贯器官功能衰竭评分(SOFA)和Murray肺损伤评分;绘制受试者工作特征(ROC)曲线对比分析血清HBP和TNF-α水平与SOFA,Murray肺损伤评分对重症腺病毒肺炎患儿预后的预测价值;采用多因素Logistic回归分析影响重症腺病毒肺炎患儿预后的因素。结果与非重症肺炎组相比,重症肺炎组血清HBP(124.67±32.84 ng/ml vs 40.79±6.54 ng/ml),TNF-α(396.74±53.71 pg/ml vs 263.95±47.84 pg/ml)水平及SOFA(5.32±1.36分vs 2.78±0.56分),Murray肺损伤评分(2.26±0.49分vs 1.52±0.29分)升高,差异具有统计学意义(t=19.942,17.141,14.037,11.027,均P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组血清HBP(160.61±45.82 ng/ml vs 107.94±32.87 ng/ml),TNF-α(432.44±38.95 pg/ml vs 380.12±35.41 pg/ml)水平及电解质紊乱(68.52%vs 33.62%)、循环系统并发症比例(57.41%vs 22.41%)、SOFA(7.04±1.95分vs 4.52±1.23分)、Murray肺损伤评分(2.76±0.48分vs 2.02±0.32分)较高,差异具有统计学意义(t=8.539,8.686,χ^(2)=18.153,20.245,t=10.232,11.888,均P<0.05)。血清HBP和TNF-α,联合预测概率值及SOFA,Murray肺损伤评分预测重症腺病毒肺炎患儿预后的曲线下面积(AUC)分别为0.778,0.816,0.939,0.828和0.851,特异度分别为81.6%,71.6%,98.3%,60.3%和81.9%,敏感度分别为63.5%,81.5%,76.4%,90.7%和74.1%。HBP和TNF-α是重症腺病毒肺炎患儿预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论重症腺病毒肺炎患儿血清HBP和TNF-α水平相对较高,且二者高水平可能与不良预后有关。

乙型肝炎病毒对胰岛素样生长因子结合蛋白3表达的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)对胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)表达的影响。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IGFBP3mRNA的表达,免疫印迹法检测IGFBP3的蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IGFBP3血清学含量。结果 IGFBP3mRNA和蛋白的表达在HepG2细胞中的表达水平较HepG2.2.15高;乙肝患者IGFBP3血清学水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBV能够在体内、外抑制IGFBP3的表达。

A型流感病毒PB2蛋白帽子结合结构域的原核表达与鉴定

A型流感病毒是一种重要的人畜共患病病原,严重威胁全球公共卫生安全。PB2蛋白的帽子结合结构域(CBD)在流感病毒的转录过程中发挥重要功能,是抗流感病毒药物的重要靶点之一。为获得高纯度原核表达的A型流感病毒的CBD蛋白,本研究利用同源重组策略将8×His标签与一株H5N1亚型高致病性禽流感病毒的CBD区基因序列克隆至原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET28a-8×His-CBD,经PCR及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经不同浓度IPTG诱导不同时间后,经SDS-PAGE检测蛋白表达后使用镍柱纯化。结果显示,菌体裂解上清中在21 ku处可见目的条带,与8×His-CBD蛋白预期大小符合,且以0.5 mmol/L IPTG于37℃诱导6 h时蛋白表达量最高,镍柱纯化后可获得纯度大于95%的8×His-CBD蛋白。为确定该蛋白是否具有生物学活性,本研究以帽子结构类似物m7GTP对其进行等温滴定量热试验,结果显示8×His-CBD蛋白和m~7GTP结合时存在明显热峰,表明8×His-CBD蛋白具有生物学活性;经计算,其Kd值为1.71×10^(-5)(±2.92×10^(-6))mol/L。本研究结果对流感病毒的基础研究和抗流感病毒药物的研发具有借鉴意义。

趋化因子受体和干扰素诱导蛋白10与HCV、HIV感染相关性的研究

目的:探讨趋化因子受体3(CXCR3)及配体干扰素诱导蛋白10(IP-10)在丙型肝炎病毒(HCV)感染,艾滋病病毒(H IV)感染和HCV/H IV合并感染过程中的表达及意义。方法:采用流式细胞术,检测HCV感染组、H IV感染组、HCV/H IV感染组及正常对照组人外周血CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞表面CXCR3的表达。ELISA方法检测IP-10浓度。结果:除正常对照组外,血清IP-10水平均明显升高,以合并感染升高最为明显;H IV组及合并感染组CD4+T淋巴细胞表面CXCR3表达显著降低(P<0.01),CD8+T淋巴细胞表面CXCR3表达显著升高(P<0.01);HCV感染组CD4+和CD8+T细胞表面CX-CR3表达轻度升高。结论:趋化因子IP-10及淋巴细胞表面受体CXCR3与丙型肝炎病毒/艾滋病病毒感染密切相关。

GI.5和GII.4诺如病毒P蛋白的克隆表达及与长牡蛎类HBGAs的结合特性

为明确人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)与长牡蛎类组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)的结合特性,本实验运用大肠杆菌表达系统,克隆表达了基因簇I.5(genogroup I.5,GI.5)和GII.4 HuNoV P蛋白,采用酶联免疫吸附测定研究HuNoV P蛋白与唾液HBGAs和长牡蛎类HBGAs的结合特性。结果表明,GII.4 HuNoV与唾液A型、B型、AB型和O型HBGAs均有较好的结合,而GI.5 HuNoV与B型HBGAs结合较弱,与O型HBGAs具有明显的结合优势。GI.5和GII.4 HuNoV在长牡蛎鳃、消化腺和外套膜中均可富集,其中在消化腺中富集最多,二者主要与类A型和H1型HBGAs结合,GII.4HuNoV与类Lea型、Leb型、Lex型和Ley型HBGAs有不同程度的结合,而GI.5 HuNoV与类Leb型HBGAs仅微弱结合,与类H1型HBGAs具有明显结合优势。综上,不同型别HuNoV与HBGAs的结合特性不尽相同,GII.4HuNoV具有广谱结合特性,GI.5HuNoV具有选择结合特性。

乙型肝炎病毒对胰岛素样生长因子结合蛋白7表达的影响及其临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)对胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)表达的影响及其临床意义。方法逆转录-聚合酶链反应(PCR)检测IGFBP7 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IGFBP7含量,分析IGFBP7在慢性乙型肝炎(CHB)、肝纤维化(LC)和肝细胞癌(HCC)患者间血清含量的差异。结果 IGFBP7 mRNA在HepG2.2.15细胞中的表达水平较HepG2高;与健康对照组相比,HBV感染者IGFBP7血清学水平明显升高(P<0.05);IGFBP7在LC和HCC患者低于CHB患者(P<0.05)。结论 HBV能够上调IGFBP7的表达,其血清水平与疾病进程呈负相关。

乙型肝炎病毒调节胰岛素样生长因子结合蛋白7表达的机制研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)调节胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)表达的分子机制。方法将HBV感染性克隆pHBV1.3与IGFBP7基因启动子pIGFBP7-Luc共转染HepG2细胞,并测定IGFBP7基因启动子pIGFBP7-Luc荧光素酶的活性;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测IGFBP7mRNA和IGFBP7蛋白的表达。结果转染pBlue-ks和pHBV1.3后,IGFBP7基因启动子pIGFBP7-Luc荧光素酶活性分别为(265.7±20.8)RUL/μg和(955.4±39.8)RUL/μg;IGFBP7mRNA和IGFBP7蛋白的表达水平明显升高。结论 HBV通过上调IGFBP7基因启动子活性来上调IGFBP7的表达。