鸡传染性支气管炎病毒DB株核蛋白基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达

利用PT_PCR方法扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)DB株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,DB株IBV的核蛋白基因长度为 12 30bp ,编码蛋白由 4 0 9个氨基酸残基组成。与已发表的参考毒株进行核苷酸同源性比较 ,发现DB株与澳大利亚群毒株的亲缘关系最为密切。同时构建了杆状病毒重组转移载体pBlue_DB_N ,将其与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞 ,经过 3轮蚀斑纯化和聚合酶链式反应 (PCR)鉴定 ,获得重组杆状病毒rBac_DB_N。SDS_PAGE分析和Westernblot检测的结果表明DB株IBV核蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞内获得表达 ,融合蛋白最大表达量占细胞蛋白总量的19 .4