模板提取方法对HBV DNA实时荧光定量PCR检测的影响

目的:研究模板纯化与否对血浆HBV DNA实时荧光定量PCR检测线性范围、重复性、灵敏度的影响。方法:采用国产离心柱法DNA纯化试剂盒及实时定量PCR试剂盒提供的直接煮沸裂解法处理107～10110倍浓度梯度稀释的血浆样本和标准品及乙肝窗口期患者的血清标本,用国产HBV PCR荧光定量扩增试剂盒检测,比较其检测结果线性范围、重复性、灵敏度及乙肝窗口期患者HBV DNA阳性检出率。结果:离心柱纯化组和煮沸裂解组的检测线性范围分别为107IU/ml～101IU/ml和107IU/ml～103IU/ml;灵敏度分别为24 IU/ml～48 IU/ml和1200 IU/ml～2400 IU/ml;104IU/ml、103IU/ml、102IU/ml样品的批内变异系数(CV)离心柱纯化组为2.5%、2.3%、1.8%,煮沸裂解组为1.9%、1.6%、12%,批间变异系数(CV)离心柱纯化组为2.3%、2.9%、5.4%,煮沸裂解组为1.7%、4.5%、7.7%;离心柱纯化组和煮沸裂解组的窗口期患者血清标本阳性检出率分别为83.9%和3.6%。结论:HBV血清样品经离心柱纯化可以极大地改善乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量PCR检测结果。

模板纯化对HBV拉米呋啶耐药突变检测的检出率影响

目的:研究模板纯化与否对HBV拉米呋啶耐药突变检测的检出率影响。方法:采用离心柱纯化法及直接煮沸裂解法分别处理HBV DNA定量小于104IU/ml的60例患者血清标本,用同一HBV拉米呋啶耐药突变检测荧光PCR试剂盒检测,比较其检出率。结果:HBV DNA定量小于104IU/ml的60例患者血清标本,离心柱纯化组和煮沸裂解组的检出率分别为68.3%和38.3%。结论:低病毒载量的HBV血清样品经离心柱纯化模板后可以明显提高HBV拉米呋啶耐药突变检测的检出率。