慢性乙型肝炎患者血清HBsAg与单个核细胞乙型肝炎病毒RNA水平对聚乙二醇干扰素治疗效果的预测价值

目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血清HBsAg、乙型肝炎病毒(HBV)DNA与血清HBV RNA及单个核细胞(PBMC)HBV RNA的关系。方法50例慢性乙型肝炎患者,给予Peg-IFNα-2b 180μg皮下注射,每周一次,分别在初始治疗、24周和48周,检测患者血清HBV五项、肝功能、HBV DNA、HBV RNA及PBMC中HBV RNA的变化。结果患者三个时间段的生化指标ALT、AST、TBIL、AKP及GGT比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫学标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb差异有统计学意义(P<0.05);血清HBV DNA及HBV RNA与PBMC HBV RNA差异有显著统计学意义(P<0.001)。结论Peg-IFNα-2b抗病毒治疗各时间段,肝功能转氨酶无显著变化;治疗24周,血HBsAg、HBV DNA与HBV RNA及PBMC HBV RNA快速下降,有显著相关性;治疗48周,血清HBsAg、HBV DNA与HBV RNA及PBMC HBV RNA相关性减弱。因此,24周HBV RNA下降幅度优于48周,更能预测临床治愈。

血清乙型肝炎表面抗原及乙型肝炎病毒RNA水平在预测核苷(酸)类药物治疗慢性乙型肝炎患者停药后复发中的价值

目的分析乙型肝炎表面抗原(HbsAg)及乙型肝炎病毒RNA(HBV RNA)水平检测对核苷(酸)类药物(NAs)治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者停药后复发的预测效果。方法选取2020年1月至2021年1月在赣州市人民医院使用NAs治疗并达到停药标准的80例CHB患者,展开1年随访,根据有无病毒学复发分为复发组和未复发组。采集两组患者血液标本,展开HBV RNA及HBsAg定量检测,分析HBsAg和HBV RNA定量对NAs药物停药后复发的预测价值。结果80例患者复发率17.50%,复发组的停药时HBV DNA载量、停药时HBsAg定量高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组停药6、12、18、24个月,HBsAg及HBV RNA定量水平比较,停药24个月HBsAg及HBV RNA定量水平高于其他时间点,差异有统计学意义(P<0.05)。HBV RNA预测疾病复发的敏感度为85.71%,特异度80.30%,HBsAg对应数值为78.57%、89.39%。结论HBsAg和HBV RNA定量对NAs药物停药后CHB复发有预测价值,值得推广。

NucliSens miniMag与QIAamp系统检测血清丙型肝炎病毒RNA效能比较

目的比较研究NucliSens miniMag与QIAamp系统检测血清丙型肝炎病毒(HCV)RNA的效能。方法2021年6月~2023年6月我院收集的103例抗-HCV阳性血清标本,分别采用NucliSens miniMag系统(方法A)和QIAamp Viral RNA Mini Kit(方法B)提取HCV RNA,采用实时荧光定量RT-PCR法检测血清HCV RNA载量。取高载量和低载量两份标本,分批重复检测,计算两种方法批内变异系数(CV)。取HCV RNA强阳性质控标本,梯度稀释后检测,评估两种方法检测的敏感度。结果在103例血清抗-HCV阳性血清标本中,经方法A和方法B提取核酸,检测血清HCV RNA阳性率分别为86.4%和82.5%,差异无统计学意义(P>0.05);方法A提取核酸检测的血清HCV RNA载量为(5.4±1.2)lg IU/mL,方法B检测结果为(5.0±1.6)lg IU/mL,差异有统计学意义(t=2.078,P=0.039);方法A提取核酸检测血清HCV RNA载量低值和高值的CV分别为2.4%和2.2%,方法B检测为4.7%和4.5%,方法A提取核酸检测HCV RNA的重复性优于方法B;方法A提取检测血清HCV RNA最低载量为2.8×10^(-6)lg IU/mL,低于方法B检测的3.5×10^(-6)lg IU/mL,表明更灵敏。结论与QIAamp Viral RNA Mini Kit相比,NucliSens miniMag系统检测血清HCV RNA的效能更高。

流感病毒RNA碱性聚合酶-2抑制剂研究进展

季节流行性感冒是一种易在人际传播的急性病毒感染,是目前对人类健康构成威胁的主要呼吸道传染病之一。迄今为止,流感的预防和治疗主要采用接种疫苗预防和开发抗病毒药物防治并重的应对手段。目前临床应用的抗流感病毒药物包括基质蛋白-2抑制剂(如金刚烷胺)、神经氨酸酶抑制剂(如奥司他韦)、内切酶抑制剂(如巴洛沙韦酯)和聚合酶抑制剂(如法匹拉韦)等,均已产生广泛耐药性。研究开发机制新颖的、与现有药物没有交叉耐药的抗流感病毒药物是解决季节流行性感冒治疗这一尚未完全解决的医学问题,以及应对流感大规模爆发的有效手段。流感病毒RNA碱性聚合酶-2(PB2),由于其在不同流感病毒间的高度保守性而不易产生耐药性,使其成为一个非常有吸引力的药物靶点。目前PB2抑制剂的研究开发已成为抗流感病毒药物的一个热点,特别是围绕明星分子吡莫地韦及其类似物的研究吸引了极大的关注,虽然吡莫地韦因疗效不理想最终止步于Ⅲ期临床试验,但是在其研究过程中所揭示出的PB2蛋白与小分子结合模式及构效关系,为进一步开发该类药物奠定了扎实的基础。本文主要针对PB2抑制剂近10年相关药物化学的研究进展进行综述,并对该药物研究领域的前景提出展望。

新型抗病毒RNA聚合酶PA亚基抑制剂临床研究进展

流行性感冒(简称流感)是流感病毒引起的对人类健康危害较重的呼吸道传染病。目前抗流感药物的应用主要面临病毒耐药性和对高致病性流感病毒的效价低的问题,如M2离子通道抑制剂和神经氨酸酶抑制剂存在药效低、时间窗口窄和耐药性等缺点。近来的抗流感药物研发的靶点聚焦于病毒RNA聚合酶。流感病毒RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内完成复制和转录过程的关键酶,其中PA亚基通过内切酶活性为流感病毒的转录过程提供引物,成为潜在抗流感药物靶点。本文总结了以PA亚基内切酶为靶点的抗流感药物研究进展,旨在为开发安全有效的新型抗病毒RNA聚合酶抑制剂提供参考。

RT-PCR定量检测汉坦病毒RNA及在临床诊断中的价值

目的 建立敏感特异的检测肾综合征出血热（HFRS）病人血清中汉坦病毒RNA的定量RT-PCR方法。探讨HFRS患者血清中病毒RNA持续时间，水平及其病情严重程度的关系。方法应用套式RT-PCR扩增引物，自行设计和制备标准品获得标准曲线，使用实时荧光定量PCR技术检测了HFRS（SEO型）血清中的汉坦病毒的载量。结果14例HFRS病人血清中，SEO RNA阳性11例，SEO型病人的病毒载量一般可达10^2～10^4 copies／ml。其中2例发病第8天，2例第9天的病人血清PCR结果仍为阳性。结论：我们采用的实时荧光定量PCR方法可很好的反映HFRS病人血清中汉坦病毒RNA含量。HFRS病人病毒血症持续时间可超过1周，血清中RNA水平与病情严重程度有关。

Eu标记RT-PCR检测丙型肝炎病毒RNA

目的 采用一种新的铕螯合物BHHCT ,制备高灵敏度荧光标记物 ,建立检测丙型肝炎病毒 (HCV)RNA的方法。方法 采用柱层析纯化的方法抽提血清中HCVRNA。以 5′端带有生物素的引物进行RT PCRTth酶一步法扩增 ,通过固定于微孔板上的捕获探针与带有生物素的PCR扩增产物杂交后 ,利用标记有铕的链霉亲合素与生物素的特异性结合 ,将铕连接到待测核酸上 ,在特定波长的激发光激发下发出荧光 ,进行检测。结果 铕标记检测法与酶标法的变异系数、敏感性、特异性分别为10 .43%、10 0 %,10 0 %与 16 .2 5 %,94%,10 0 %。结论 Eu标记RT PCRTth酶一步法检测HCVRNA ,具有敏感、特异、快速、重复性好、不受环境因素影响和无溴乙锭污染等优点 ,可望取代酶标法及电泳法。

使用优化PAGE电泳及银染技术检测临床粪便样品中的轮状病毒RNA

人轮状病毒肠炎是世界范围内的一个重要的健康问题,也是引起儿童腹泻并导致死亡的主要原因之一[1]。快速有效地分离、鉴定临床粪便样中的轮状病毒,不仅可以确证轮状病毒的感染,还可以准确监控轮状病毒流行株的变化,积累轮状病毒的流行病学数据。

黄芩苷对宿主因子PACT干扰后流感病毒RNA聚合酶活性的影响

目的观察宿主因子PACT屏蔽前后黄芩苷对甲型H1N1流感病毒RNA聚合酶的作用。方法采用双荧光素酶报告基因法检测293T细胞中甲型流感病毒聚合酶的相对表达量,分别判断PACT蛋白屏蔽前后黄芩苷对甲型流感病毒RNA聚合酶活性的影响。结果 PACT沉默前后,黄芩苷对流感病毒RNA聚合酶均呈现明显抑制作用,在PACT沉默后,其作用更加明显。结论沉默PACT蛋白并用黄芩苷处理能明显降低流感病毒RNA聚合酶活性。

丙型肝炎患者血清游离脂肪酸水平与丙肝病毒RNA载量及肝损伤的关系

目的:探讨丙型肝炎患者血清游离脂肪酸(FFA)水平与丙肝病毒RNA(HCVRNA)载量及肝损伤的相互关系。方法:收集199例HCV患者血清标本,HCVRNA载量采用实时荧光定量PCR分析法。以HCV-RNA载量进行分组,5.0×102≤HCV-RNA Copy<103为低拷贝组,103≤HCV-RNA Copy≤105组为中拷贝组,HCV-RNA Copy>105组为高拷贝组。另选80例体检健康者为对照组,测定各组标本血清FFA水平以及血脂相关指标。结果:丙型肝炎患者HCV-RNA高拷贝组、中拷贝组和低拷贝组患者血清FFA水平均明显高于对照组,ALT活性亦高于对照组(P<0.05或P<0.01)。各组患者血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均低于对照组(P均<0.05)。丙型肝炎患者FFA水平与其HCVRNA载量、ALT及甘油三酯(TG)水平均呈正相关(P<0.05或P<0.01)。结论:丙型肝炎患者FFA水平均显著升高,FFA浓度随HCV-RNA载量增加而升高,并与肝损伤严重程度相关,FFA浓度增加提示肝细胞受损。

丙肝抗体、丙肝病毒RNA、白蛋白及谷丙转氨酶在丙肝诊断中的应用

目的:探讨丙肝抗体、丙肝病毒(HCV)RNA、白蛋白(ALB)及谷丙转氨酶(ALT)在丙肝诊断中的应用。方法:采用ELISA法测定丙肝抗体,实时荧光定量PCR检测HCV-RNA含量,全自动生化仪检测白蛋白和ALT水平,应用SPSS 19.0软件对数据进行统计学处理。结果:77例患者中,丙肝抗体阳性56例,阴性21例;HCV-RNA阳性71例,阴性6例。这2种方法检测出的结果差异有统计学意义(P<0.05)。将45例HCV-RNA阳性的标本按拷贝数不同分成6组,检测各组白蛋白的变化,前4组随着HCV-RNA拷贝数的增加,白蛋白含量依次降低。57例HCV-RNA阳性的标本中,有22例ALT含量异常,并且随着HCV-RNA拷贝数的增加,ALT的异常率及平均值也在上升;经相关性分析,ALT平均值与HCV-RNA拷贝数成正相关(r=0.999,P=0.032)。结论:在丙型肝炎的诊断中,HCV-RNA拷贝数是重要的检测指标,同时应联合检测丙肝抗体、白蛋白和ALT。

病毒RNA复制酶—Nib基因转化番木瓜的研究

通过胚状体振动共培养法将农杆菌ＬＢＡ４４０４介导的复制酶基因转入番木瓜，经过含有卡那霉素１００μｇ／ｍＬ的培养基筛选培养，获得了转化植株，ＮＰＴⅡ分析和ｈｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交结果表明，复制酶基因Ｎｉｂ片段已整合到番木瓜的核基因组中。

丙型肝炎病人丙肝病毒RNA载量、肝脏纤维化与25羟基维生素D水平的相关性分析

目的考察25羟基维生素D[25(OH)D]水平在丙型肝炎中的表达水平,分析25(OH)D与丙肝病毒RNA(HCV RNA)载量、肝脏纤维化之间的关联和影响关系。方法选取慢性丙型肝炎病人267例作为观察组,另选取正常体检者100例作为对照组,检测丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和谷氨酰转肽酶(GGT)。采用荧光定量PCR仪测定HCV RNA载量,采用肝脏纤维化指数(Fibrotest分级)进行评价肝纤维化程度。结果观察组ALT和AST、GGT显著高于对照组(P<0.01),观察组25(OH)D显著低于对照组(P<0.01);观察组>50~≤75 nmol·L^(-1)项下25(OH)D人数显著多于对照组(P<0.01);血清25(OH)D与HCV RNA载量呈负相关(r=-0.922,P<0.01),血清25(OH)D与Fibrotest分级呈负相关(r=-0.957,P<0.01)。结论 25(OH)D是丙肝的保护因素,临床对丙肝病人适当补充25(OH)D或可改善病人的临床症状。

从OCT包埋冰冻组织提取组织RNA和检测病毒RNA

目的探讨如何从OCT包埋冰冻组织提取组织RNA和检测病毒RNA。为临床有限标本的保存和利用提供一简便的方法。方法用汉坦病毒感染的小鼠组织标本,经质量浓度25%蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋,在-20℃冰箱中保存2年后,对冰冻的OCT包埋的感染组织标本进行RNA提取,用凝胶电泳、紫外分光光度计及RT-PCR等方法检测组织总RNA和病毒RNA。结果组织经质量浓度25%蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋冰冻保存后,从中提取的RNA仍保持较好的完整性,可扩增出较长片段的病毒RNA。结论OCT包埋的冰冻组织标本不影响提取组织RNA并检测病毒RNA。

慢性丙型肝炎患者血清丙氨酸转氨酶水平、丙型肝炎病毒RNA定量对干扰素疗效的影响

目的分析慢性丙型肝炎患者血清丙氨酸转氨酶水平、丙型肝炎病毒RNA定量对干扰素疗效的影响。方法我院传染科治疗的慢性丙型肝炎患者68例,所有患者均给予干扰素和利巴韦林治疗。结果 68例患者中,血清丙氨酸转氨酶>正常值2倍的患者与血清丙氨酸转氨酶<正常值2倍的患者相比,干扰素的闻道无明显差异(P>0.05);丙型肝炎病毒RNA含量<106copes/mL的患者的干扰素疗效明显优于丙型肝炎病毒RNA含量>106copes/mL的患者(P<0.05),但两组患者随访24周时,干扰素的疗效无明显差异(P>0.05)。结论慢性丙型肝炎患者血清丙氨酸转氨酶水平与干扰素的疗效无明显关系,而丙型肝炎病毒RNA含量与干扰素的近期疗效相关,但与远期疗效无明显关系,因此可以根据慢性丙型肝炎患者的丙型肝炎病毒RNA含量选择适当的干扰素治疗。

慢性丙肝患者血清谷丙转氨酶水平、丙肝病毒RNA定量对干扰素疗效的影响

目的观察慢性丙肝患者血清谷丙转氨酶水平、丙肝病毒RNA定量对干扰素治疗效果产生的影响。方法以本院收治的慢性丙肝患者为研究对象,血清谷丙转氨酶水平不足正常水平2倍的20例作为a组,超过2倍的20例作为b组,丙肝病毒RNA定量不足106的20例作为c组,超过106的20例作为d组,均进行干扰素治疗,比较疗效差异。结果 a组与b组疗效差异不显著(P>0.05),c组与d组相比c组疗效优于d组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论慢性丙肝患者血清谷丙转氨酶水平对干扰素疗效影响不显著,丙肝病毒RNA定量水平对干扰素疗效有直接影响。

逆转录－套式PCR检测血清中丙肝病毒RNA

利用与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组５＇非编码区保守序列同源的套式引物，建立了检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，由于在引物设计中选择了最保守的区域且避开了与黄病毒属的同源序列，保证了ＰＣＲ检测的灵敏度和特异性。经逆转录和两轮ＰＣＲ扩增，可检出１×１０－３ｕｌ血清中的ＨＣＶＲＮＡ。研究了影响ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ检测的各种因素，并对ＲＮＡ分离及ＲＴ－ＰＣＲ反应体系进行了优化，在此基础上研制了ＨＣＶ的ＰＣＲ检测试剂盒。

煮沸法抽提汉坦病毒RNA方法的建立及初步应用

肾综合征出血热(Haemorrhagic FeverWith Renal Syndrome,HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属引起的人类急性传染病,早期快速检测汉坦病毒(Hantavirus)是有效诊治的关键,在聚合酶反应(PCR)应用于出血热快诊中,抽提汉坦病毒RNA是十分关键的一步,传统抽提RNA是用异硫氰酸胍裂解法,需经过酚/氯仿抽提及酒精沉淀,操作流程繁琐。我们尝试用煮沸法抽提取汉坦病毒RNA,并对其临床应用进行了分析,现报告如下。

PCR检测体液中丙肝病毒RNA

丙型肝炎的传播方式包括输血或血制品、血液透析、药瘾者、静脉内滥用药物以及应用污染的注射器,此外,性接触及家庭内密切接触也是重要的传播途径。为了研究非血源途径传播丙型肝炎的可能性,揭示体液在丙型肝炎传播中的作用,本研究应用聚合酶链反应(PCR)方法对急、慢性丙型肝炎患者的唾液、精液、尿液、泪液、汗液及阴道分泌物中HCV-RNA进行了检测,报告如下:

植物病毒RNA间重组的研究现状

根据近几年来研究的最新资料，从植物病毒RNA间的重组位点的特征以及重组体亲本链双方的来源的角度对植物病毒RNA的重组类型作了介绍，并对其重组机制作了综述．