猪伪狂犬病病毒S1株的分离与鉴定

从上海某猪场发病仔猪体内分离到 1株病毒 ,该毒株能在鸡胚成纤维细胞、RK、Vero、BHK2 1、ST、PK15细胞上增殖并产生细胞病变。通过蚀斑克隆对其进行纯化 ,克隆毒株在BHK2 1细胞上的TCID50 为 5 0 μL 10 -6.68稀释液。该病毒能被伪狂犬病毒 (PRV )阳性血清中和。接种细胞经PRV荧光抗体染色呈阳性反应。电镜观察可见直径 110～ 180nm的典型疱疹病毒粒子。用该病毒接种兔和仔猪均出现典型的伪狂犬病症状。表明该分离毒株为PRV。

猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单克隆抗体的制备及生物学特性研究

通过差速离心和蔗糖密度梯度离心法对猪繁殖与呼吸综合征病毒沪 1(PRRSV_S1)株进行抗原纯化。免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0融合 ,用间接ELISA和有限稀释法 ,获得 2株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株 ,分别命名为AG1、BD3。ELISA交叉试验和阻断试验表明 ,2株单抗具有高度特异性。AG1可与PRRSV_S1,欧洲株LV ,美洲株VR_2 332反应 ,而BD3与美洲株VR_2 332反应较弱 ,2株单抗对猪细小病毒 (PPV)、猪伪狂犬病病毒 (PRV)、猪乙型脑炎病毒 (JEV)均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是 1∶2 5 6～ 1∶5 12 ,腹水效价分别在 1∶10 3 ～ 1∶10 5之间。AG1和BD3各有 10 0条染色体 ,琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b ,BD2属于IgM。

重组杆状病毒表达的2株传染性支气管炎病毒S1蛋白的免疫原性评价

利用 Bac- to- Bac杆状病毒表达系统构建了 2株重组杆状病毒 r Ac JS95 0 3S1和 r Ac SD970 1S1,分别表达了 2株致病性不同的传染性支气管炎病毒的 S1基因。用感染重组杆状病毒的昆虫细胞裂解液对 2周龄的伊莎公雏进行免疫 ,根据鸡免疫后的抗体水平动态变化和攻毒后鸡肾脏和气管的保护力判定它们的免疫原性。结果显示 ,重组杆状病毒表达的 IBV S1蛋白可以诱导抗体产生和免疫保护反应 ,2毒株间也存在着一定程度的交叉免疫保护反应。

SARS冠状病毒S1蛋白的原核表达与鉴定

目的 克隆SARS冠状病毒 (SARS-CoV)S1基因片段 ,构建原核表达载体 ,并在宿主菌中诱导表达带组氨酸标记的融合蛋白。方法 人工合成SARS-CoVS1基因片段 ,克隆至pUCm T载体 ,经DNA序列分析和酶切后 ,将酶切片段亚克隆至原核表达载体 pET - 2 8b(+) ,重组子pET 2 8b/SARS S1转化大肠杆菌ril,IPTG诱导表达 ,Westernblot鉴定表达产物 ;纯化表达产物并用ELISA检测其抗原特异性。结果 获得了主要以包涵体形式存在的 32kD的目的蛋白 ,Westernblot鉴定其为带组氨酸标记的融合蛋白 ,ELISA证明其能与合成肽的抗体及病人血清中的SARS-CoV的抗体特异结合。结论 成功构建了SARS-CoVS1基因的组氨酸标记表达载体 pET-2 8b/SARS-S1,并在ril中得到了高效表达 ;表达的S1蛋白具有较好的抗原特异性 ,便于免疫动物以获得特异抗体 。

猪传染性胃肠炎病毒S1融合蛋白的构建及其免疫原性研究

[目的]研究猪传染性胃肠炎病毒S1融合蛋白的免疫原性。[方法]表达和纯化了猪传染性胃肠炎病毒S1与TAT转导肽序列的融合蛋白S1-TAT,将融合蛋白S1-TAT经腹腔注射和灌胃方式免疫昆明小鼠,采集免疫小鼠血液和粪便样品,检测血清Ig G抗体和黏膜Ig A抗体水平,期间观察小鼠体重变化。[结果]腹腔注射组诱导产生的血清Ig G抗体水平明显高于其他试验组(P<0.01),但其黏膜Ig A抗体水平较低;而灌胃组能够诱导中等水平的血清Ig G抗体和较高水平的黏膜Ig A抗体(P<0.01);在试验周期中,各组小鼠体重均正常。融合蛋白S1-TAT的穿肠活性较好,与对照组之间差异极显著(P<0.01)。[结论]融合蛋白S1-TAT经口服或注射小鼠后,能够有效诱导小鼠机体产生体液免疫应答,并且融合蛋白S1-TAT经口服可诱导小鼠机体产生黏膜免疫应答;融合蛋白S1-TAT具有穿肠功能;融合蛋白S1-TAT经口服或注射小鼠,均安全。

乙肝病毒S1抗原阳性在乙型肺炎临床检验中的应用价值分析

目的评价乙肝病毒前S1抗原阳性在乙型肝炎临床检验中的应用价值。方法随机选取我院2020年1月-3月收治的乙型肝炎患者140例为研究对象,开展临床诊断研究。患者入院后依次接受乙肝病毒前S1抗原阳性、HBV-DNA血清检验,对比两类诊断结果差异,分析乙肝病毒前S1抗原阳性与患者病毒载量的相关性。结果两种方法诊断阳性率对比无统计学差异(P>0.05);HBV-DNA高病毒拷贝量患者前S1抗原阳性率明显高于HBV-DNA低病毒拷贝量患者(P<0.05)。结论乙肝病毒前S1抗原在乙肝临床检验中的应用效果显著,具有较高的诊断参考价值,且对患者体内病毒拷贝量情况具有提示补充作用。

表达猪流行性腹泻病毒S1基因植物乳酸杆菌工程菌的免疫原性分析

为探究表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1基因的植物乳杆菌工程菌是否对动物产生保护力,利用构建的含重组质粒pVE5523-S1乳杆菌口服免疫豚鼠3次,每次间隔14 d,每次2×10^(8) CFU/只。并以植物乳杆菌及含表达质粒pVE5523植物乳杆菌为阴性对照,进行相同处理。用猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎二联活疫苗(HB08株+ZJ08株)肌肉注射接种豚鼠,免疫3次,每次间隔14 d,每次0.2 mL/只,作为阳性对照。分别在免疫后的0 d、7 d、14 d、24 d、31 d、41 d及48 d对4组试验豚鼠心脏采血并分离血清,进行酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体和中和试验分析,同时无菌采豚鼠脾脏,进行脾细胞增殖实验分析。结果显示,工程菌能刺激机体产生分泌性抗体sIgA、特异性中和抗体,还可刺激机体IL-4和IFN-γ的增长以及脾细胞的增殖。说明该PEDVS1基因植物乳杆菌工程菌使豚鼠对PEDV产生了特异性免疫力,为后续口服疫苗的研究奠定了基础。

乙型肝炎病毒前S1抗原的检测及其临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒前S1抗原(PreS1Ag)在临床上的应用价值。方法 采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)和聚合酶链反应(PCR)方法,对319例乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)患者和30例健康人分别检测 HBV标志、PreS1抗原和乙肝病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。结果 319例乙型肝炎患者中PreS1抗原和 HBV-DNA的检出率分别为51.7％和56.1％,两种方法符合率为92.1％;PreS1Ag在HBeAg阳性(1／3／5) 和HBeAg阴性(1／4／5)中的阳性率分别为88.4％、31.1％,HBV-DNA在HBeAg阳性(1／3／5)和HBeAg阴性 (1／4／5)中的阳性率分别为91.1％、34.1％,HBV-DNA检出率稍高于PreS1抗原的检出率,但两者的检出率差异 无显著性(P>0.05)。结论乙肝病毒PreS1抗原与HBeAg阳性、HBV-DNA阳性呈高度相关,PreS1抗原可与 HBeAg、HBV-DNA同时作为HBV存在复制和传染性的重要检测指标。

PreS1、HBV-DNA、HBeAg反映乙肝病毒复制的临床应用研究

目的比较PreS1、HBV-DNA、HBeAg反映病毒复制的临床应用价值。方法对疑有HBV病毒复制的乙型肝炎患者血清标本分别采用实时荧光定量PCR检测HBV-DNA、时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)定量检测HBV-e抗原和HBV PreS1抗原。结果PreS1抗原阳性率87.5%(460/526)高于HBV-DNA71.1%(374/526),有显著性差异(χ2=46.3,P<0.001),PreS1抗原阳性率高于HBeAg 37.1%(195/526),有显著性差异(χ2=251.6,P<0.001),HBV-DNA阳性率高于HBeAg(χ2=161.8,P<0.001),有显著性差异。结论TRFIA方法定量检测PreS1抗原,灵敏度高,特异性强,能够准确及时敏感地反映患者体内乙型肝炎病毒的复制情况。

不同血清学标志物与HBV-DNA含量及Pre-S1在诊断乙肝病毒复制中的价值

目的了解乙型肝炎血清学不同标志物模式(HBV-M)与乙肝病毒DNA含量及乙肝病毒前S1蛋白的关系,为预测乙型肝炎病毒的传染程度与乙肝的预防、诊断及治疗提供实验室依据。方法采用美国ABBOTT公司生产的AXSYM全自动免疫分析仪和微粒子酶免检测试剂盒对530例携带不同血清学标志物的乙肝患者进行乙肝五项指标检测,并用聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA含量,同时,用ELS IA法检测乙肝病毒前S1抗原。结果五种HBV免疫模式中HB sA g,HB eA g和HB cA b同时阳性,其HBV-DNA定量阳性和HBV-P reS1的检出率分别为94.1%和92.8%;HB sA g,HB eA b和HB cA b阳性组的检出率分别为53.5%和40.1%;其它不同血清学模式组也有不同的阳性率。结论P re-S1可敏感反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可反映HB eA g阴性的乙肝患者仍存在病毒复制。HBV-DNA含量与P re-S1呈正相关,HBV-DNA、乙肝病毒五项标志和前S1蛋白联合检测,对更好地早期诊断HBV感染,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断均具有重要意义。

乙型肝炎病毒前S1抗原/抗体检测及其临床意义

目的 探讨乙型肝炎病毒前S1蛋白与乙型肝炎病毒复制的关系及其在临床上的应用。方法 通过对 10 1例乙型肝炎患者血清进行“两对半”、HBV DNA和前S1蛋白的检测分析。结果 10 1例HBsAg阳性与HBV DNA同时阳性的血清 ,Presl检出率为 94 .1% ,HBeAg/Ab的阳性率分别为 5 8.4 %和 30 .7% ;78例preS1Ab阳性血清中 ,抗HBs阳性率为 4 7.4 % ,抗HBe阳性率为 2 8.2 %。结论 乙型肝炎病毒前S1蛋白表达主要在HBVDNA复制期 。

HBV-DNA含量及Pre-S1检测在诊断乙肝病毒复制中的临床意义

目的了解乙肝患者不同血清学标志物模式(HBV-M)与乙肝病毒DNA含量及乙肝病毒前S1蛋白的关系,为预测乙型肝炎病毒的传染程度、乙肝的预防、诊断及治疗提供实验室依据。方法采用美国ABBOTT公司生产的AXSYM全自动免疫分析仪和微粒子酶免检测试剂盒对456例携带不同血清学标志物的乙肝患者进行乙肝五项指标检测,并用聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA含量,同时,用ELISA法检测乙肝病毒前S1抗原。结果五种HBV免疫模式中HBsAg、HBeAg和HBcAb同时阳性,其HBV-DNA定量阳性和HBV-PreS1的检出率分别为94.1%和81.2%;HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性组的检出率分别为53.4%和43.7%;其他不同血清学模式组也有不同的阳性率。结论Pre-S1可敏感反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可反映HBeAg阴性的乙肝患者仍存在病毒复制。HBV-DNA、乙肝病毒五项标志和前S1蛋白联合检测,对更好地早期诊断HBV感染,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断均具有重要意义。

乙型肝炎病毒前S_1抗原与乙肝两对半定量检测的对比分析及意义

目的 探讨乙肝病毒前S1抗原 (preS1)与乙肝两对半结果的关系以及与乙型肝炎病毒的存在关系。方法 ELISA和微粒子酶联免疫分析技术 (MEIA)分别检测 3 2 7例患者的preS1和乙肝两对半。结果 在 114例HBeAg阳性标本中preS1阳性 98例 ,阳性率 86 0 % ;79例HBeAg阴性而HBeAb阳性的标本中preS1阳性者 3 7例 ,阳性率 46 8% ;在 11例乙肝患者HBeAg和HBeAb均阴性的血清中preS1阳性的仅 3例 ,阳性率 2 7 3 %。结论 血清preS1是HBV在体内复制的又一个可靠而有用的指标 ,与乙肝两对半联合检测 ,在乙肝诊断、治疗及疗效考核中将互为补充 。

乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原（PreS1）与乙肝病毒DNA（HBV DNA）、乙肝病毒标志物（HBVM）之间的相关性，为拉米夫定（Lamivudine）治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例，其中HBV DNA阳性400例（拷贝数〉500／ml），按HBV—DNA含量由低到高分8组；其余为HBV DNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测PreS1；以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒e抗体（HBeAb）、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）；以荧光定量PCR法检测HBV DNA（以HBV DNA拷贝数〉500／ml为阳性）。结果（1）在HBVDNA拷贝数500—1×10^6／ml之间，PreS1的阳性率比HBeAg高（P〈0．05）；在HBV DNA拷贝数1×10%6／ml以上，二者阳性率无显著性差异（P〉0．05）；（2）PreS1的灵敏度为90％（360／400），高于HBeAg的68．5％（274／400）（P〈0．05）：PreS1的阴性预示值为55．6％（50／90），高于HBeAg的43．2％（96／222）（P〈0．05）；PreS1的检测有效率为82．0％（410／500），高于HBeAg的64．8％（324／500）（P〈0．05）。（3）在HBV DNA拷贝数500-1×10^4／ml之间，HBsAg的阳性率比PreS1高（P〈0．05），在HBV DNA拷贝数1×10^4／ml以上，HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异（P〉0．05）。在HBV DNA拷贝数500-1×10^6／ml之间，HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBV DNA具有较好的相关性，其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观脊指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。

乙肝病毒前S1抗原的临床应用评价

目的探索乙肝病毒前S1抗原与肝脏损伤程度的关系,及与乙肝病毒DNA复制活跃程度的关系。方法乙肝病毒前S1抗原用ELISA方法检测,丙氨酸氨基转移酶用紫外-乳酸脱氢酸法检测,HBV-DNA测定运用荧光实时定量检测方法。结果乙肝病毒前S1抗原阳性与ALT升高有正相关,乙肝病毒前S1抗原阳性与HBV-DNA阳性有显著性相关。结论乙肝病毒前S1抗原可以用来评价肝脏功能指标,也可作为机体内乙肝病毒复制活跃程度指标。

乙型肝炎病毒前S1抗原和HBV-DNA联合检测在乙型肝炎诊疗中的作用

目的探讨研究乙型肝炎前S1抗原(Pre-S1Ag)和HBV-DNA在乙型肝炎诊治中的必要性。方法采用上海科华生物工程股份有限公司的乙型肝炎前S1抗原检测试剂盒(酶联免疫法),和珠海丽珠试剂股份有限公司的乙肝五项试剂盒(酶联免疫法)对相关项目(HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb)进行检测。HBV-DNA采用PCR荧光探针技术检测,然后将检测结果进行对比分析。结果选取我院门诊489例乙肝患者血清标本进行检测。HBV-DNA阳性者为351例,阳性率为71.78%。前S1阳性为340例,阳性率为69.53%。在HBeAg阴性标本中亦可检出前S1抗原及HBV-DNA阳性标本,阳性率分别为45.81%和44.7%。由此可见HBV-DNA与Pre-S1Ag无明显差异,HBeAg分别于HBVDNA和Pre-S1Ag存在显著差异。结论 HBV-DNA可直观的反应乙肝病毒的复制情况,是乙型肝炎是否具有传染性最敏感的标志物。Pre-S1Ag的敏感性与其基本一致;二者的检测结果对患者病情监测,感染情况及预后的意义均高于传统的HBeAg,与有关报道一致[2-3]。

乙型肝炎病毒前S1抗原阳性检验价值分析

目的分析乙型肝炎病毒前S1抗原阳性检验价值。方法便利选取2014年8月—2016年8月于济南市传染病医院诊治的108例乙型肝炎患者临床资料,均采集静脉血检验,观察不同HBV血清标志物检查结果。结果在不同HBV血清标志物中,HBeAg阳性血清的Pre S1-Ag阳性率77.08%、HBV-DNA阳性率89.58%,HBeAg阴性血清的Pre S1-Ag阳性率41.67%、HBV-DNA阳性率48.33%。不同HBV-DNA载量的Pre S1-Ag阳性率均比HBeAg的高(P<0.05)。结论在乙肝病毒复制标志物中,乙肝病毒前S1抗原的敏感性高,其阳性率随HBV-DNA载量增加,帮助HBV感染的诊治及病判断,值得推广应用。

乙肝病毒前S1抗原检测在乙肝临床诊疗中的应用价值

有研究表明,前S1抗原与HBV病毒在体内的复制密切相关,前S1抗原与HBV-DNA在反映乙肝病毒复制有良好的一致性.本文通过对523例乙肝患者的回顾性分析,发现前S1抗原与HBV-DNA在反映乙肝病毒复制有良好的一致性,前S1抗原较HBeAg更敏感地反映HBV复制的情况.