缺血性脑卒中患者lncRNA MEG8表达水平与神经功能缺损程度的相关性

目的:研究血清长链非编码RNA母系表达基因8(lncRNA MEG8)表达与缺血性脑卒中患者神经功能缺损程度的相关性。方法:将本院收治的135例缺血性脑卒中患者作为缺血性脑卒中组,并根据NIHSS评分将其细分为轻度缺损组、中度缺损组、重度缺损组;另选取于本院体检的脑神经功能正常的128例体检者为对照组。收集各组基线资料,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA MEG8表达水平;缺血性脑卒中患者不同时间点血清lncRNA MEG8表达水平与基线资料及神经功能缺损程度相关性采用Spearman及Pearson分析;采用Logistic回归进行缺血性脑卒中患者神经功能缺损程度的影响因素分析。结果:缺血性脑卒中组入院第2 d、入院第7 d、入院第14 d血清lncRNA MEG8表达水平均高于对照组(P<0.05)。入院第14 d血清lncRNA MEG8表达水平低于入院第2 d、入院第7 d(P<0.05)。重度缺损组血清lncRNA MEG8表达水平高于中度缺损组和轻度缺损组(P<0.05),中度缺损组血清lncRNA MEG8表达水平高于轻度缺损组(P<0.05)。缺血性脑卒中患者血清lncRNA MEG8表达水平与神经功能缺损程度、高血压、颈动脉粥样硬化、糖尿病、收缩压、TC、LDL-C、Hs-CRP均呈正相关(P<0.05),与HDL-C呈负相关(P<0.05)。lncRNA MEG8、颈动脉粥样硬化是缺血性脑卒中患者发展为中/重度神经功能缺损的独立危险因素(P<0.05)。结论:血清lncRNA MEG8表达水平与缺血性脑卒中患者神经功能缺损程度呈正相关。

桑树病程相关蛋白基因MuPR1-2的启动子克隆及诱导表达活性

研究桑树抗病关键蛋白基因的启动子及其活性,对阐明基因的功能与表达调控机制十分重要。利用Tail-PCR技术成功地从桑树叶片基因组DNA模板中扩增得到病程相关蛋白基因MuP R1-2的启动子,将之命名为pM uP R1-2。利用PlantC ARE软件分析pM uP R1-2的核苷酸序列,发现其具有多个转录起始所必需的顺式作用元件以及多种转录因子结合位点,另外还包含多种环境因子响应元件。构建由pM uP R1-2启动GUS基因表达的植物表达载体,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达及GUS组织化学染色分析pM uP R1-2具有启动子的功能,证实烟草叶片接种Pst DC3000菌液后能驱动下游报告基因GUS表达,pM uP R1-2具有病原菌诱导表达活性。进一步构建pM uP R1-2稳定表达的转基因拟南芥植株,通过GUS组织化学染色与GUS荧光定量分析发现pM uP R1-2不仅具有病原真菌和细菌诱导表达活性,同时具有可被多种激素诱导表达的特性和组织表达特异性。

烟草病程相关蛋白NtPR10基因克隆与表达分析

为鉴定烟草病程相关蛋白PR10的生物学功能,从普通烟草G28中克隆得到了Nt PR10基因,基因全长483 bp,编码160个氨基酸。基因结构分析表明,该基因编码的蛋白包含病程相关蛋白家族Bet_v_I保守域,具有与核酸酶活性相关的"P-Loop"结构。利用TMHMM、Signal P、Prosite Scan等软件分析发现,Nt PR10不含跨膜区,无信号肽,有胞内定位特征。采用实时荧光定量PCR分别分析了TMV诱导下该基因在抗、感品种枯斑三生和G28中的表达模式。结果表明,在TMV诱导下,Nt PR10基因在感病品种G28中显著上调表达;而在抗病品种枯斑三生中,TMV侵染后6 h,Nt PR10基因显著上调表达,第12小时至第8天显著下调表达,而后至第16天逐渐升高至侵染前水平。综合以上结果,Nt PR10应答了TMV侵染过程,并且在抗、感品种中整体呈现出相反的表达趋势,暗示了Nt PR10在TMV侵染过程中具有重要功能,为深入分析Nt PR10的抗病生物学功能奠定了基础。

植物病程相关蛋白的基因表达调控

植物病程相关蛋白 (PR)的表达在植物抗病反应中具有重要意义 ,是近年来植物抗病研究领域的一个热点。

不结球白菜病程相关蛋白基因BcPR5的克隆及表达分析

[目的]本文旨在研究不结球白菜病程相关蛋白基因Bc PR5的结构与表达特征。[方法]通过RACE技术,从抗病品种‘苏州青’叶片克隆到Bc PR5基因的全长c DNA序列。采用RT-q PCR方法分析该基因在霜霉病菌诱导,水杨酸(SA)、茉莉酸(Me J)和脱落酸(ABA)等激素处理条件下的表达模式。SDS-PAGE技术分析该基因的原核表达特征。[结果]Bc PR5基因的c DNA全长为954 bp,其中开放阅读框长度为732 bp,共编码243个氨基酸,相对分子质量为26.1×103,理论等电点是9.3。氨基酸同源系统进化分析表明,不结球白菜Bc PR5基因与同属植物的进化关系相近,其中与大白菜第6号染色体上的基因同源性最高(100%)。RT-q PCR分析表明,抗病品种‘苏州青’和感病品种‘矮脚黄’在霜霉病菌和非生物胁迫(SA、Me J和ABA)诱导过程中,Bc PR5基因的表达量均呈先升高后降低的趋势,且抗病品种高于感病品种。原核表达结果表明,该蛋白在终浓度为1.0 mmol·L-1的IPTG诱导4 h后能实现融合蛋白的高效表达。[结论]Bc PR5在不结球白菜抗霜霉病防御反应中发挥着重要作用,研究结果为该基因的功能验证提供理论基础。

捕食线虫真菌捕食器相关基因标记II.捕食器基因不表达转化子的形态特征及核酸杂交分析

本文从利用质粒pBChygro转化少孢节丛孢YMF1.00544的2135个转化子中筛选到一株捕食器基因不表达的转化子YMF1.00110。该转化子的形态学特征与野生型菌株有明显区别,对该转化子的核酸杂交结果表明质粒DNA是以单拷贝的方式整合到真菌染色体上。此外,对部分转化子的杂交整合模式和标记率进行了杂交分析。

低温诱导湖北海棠病程相关蛋白基因家族MhPRs的表达

以湖北海棠组培苗为材料,利用半定量RT-PCR研究了低温4℃处理后湖北海棠MhNPR 1、MhT-GA2以及病程相关蛋白基因家族成员(MhPR 1、MhPR 5、MhPR8和Mhchit 1)基因的表达量。结果表明:低温处理可以诱导这些基因的表达,并且所有基因的表达量在48 h达到最大。可以推测:(1)低温作为一种逆境条件,可能使植物体内SA含量提高,诱导MhNPR1基因表达,使NPR1蛋白从细胞质进入细胞核,与TGA类转录因子相互作用,诱导下游病程相关蛋白基因表达;(2)低温可能直接诱导病程相关蛋白基因表达。

凋亡相关基因p53、bcl-2在乳腺导管非典型增生中表达的研究

为观察凋亡相关基因 - p5 3、bcl- 2在乳腺导管非典型增生及乳腺癌中的表达 ,探讨其与乳腺癌组织发生的关系 ,本实验应用原位杂交方法检测凋亡相关基因 p5 3、 bcl- 2 m RNA ,应用免疫组织化学方法检测 p5 3蛋白在 44例乳腺导管非典型增生组织中的表达 ,并与 6例乳腺导管单纯性增生及 2 6例乳腺癌对比分析。实验结果为 ,p5 3m RNA在乳腺导管单纯性增生组织中呈较强表达 (6 6 .7% ) ,在乳腺导管非典型增生组织中阳性表达为 40 % (轻度 :5 5 .6 % ,中度 :41.7% ,重度 :2 6 .1% ) ,在癌组织中的表达率为 19.2 % (导管内癌 :2 1.4% ,浸润性导管癌 :16 .7% )。p5 3蛋白在导管单纯性增生组无表达 ,在导管非典型增生组阳性表达为 2 4% (轻度 :11.1% ,中度 :2 5 % ,重度 :34 .8% ) ,在癌组织中的阳性表达为 38.5 % (导管内癌 :35 .7% ,浸润性导管癌 :41.7% )。 bcl- 2 m RNA在单纯性增生组无表达 ,在非典型增生组中阳性表达为轻度 :11.1% ,中度 :16 .7% ,重度 :39.1%。在乳腺癌组织中阳性表达为导管内癌 :78.6 % ,浸润性导管癌 83.3%。实验结果表明 ,在乳腺导管重度非典型增生组织中可检测到 p5 3基因有较高的表达缺失、突变及 bcl- 2 m

长链非编码RNA母系表达基因3、微小RNA-21表达与冠状动脉钙化的相关性分析

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)、微小RNA-21(miR-21)与冠状动脉钙化的相关性。方法选取2018年6月至2019年6月在邯郸市中心医院行冠状动脉造影及CT检查确诊为冠状动脉钙化病人189例作为钙化组,另选取同期在该院行冠状动脉造影及CT检查显示无冠状动脉钙化者183例作为未钙化组。采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)法检测血清LncRNA MEG3、miR-21表达水平,采用Pearson法分析病人血清LncRNA MEG3、miR-21水平及与糖化血红蛋白(HbA1c)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平相关性,采用logistic回归模型分析冠状动脉钙化发生的影响因素,采用ROC曲线评估血清LncRNA MEG3、miR-21表达水平对冠状动脉钙化的预测价值。结果与未钙化组相比,钙化组血清miR-21[2.87±0.93比1.02±0.29]、HbA1c[(6.95±1.31)%比(5.41±1.26)%]、hs-CRP[(5.13±1.74)mg/L比(3.02±1.01)mg/L]、TNF-α[(11.72±3.92)ng/L比(9.82±4.13)ng/L]、IL-1β水平[(4.96±0.95)ng/L比(2.32±0.74)ng/L]及冠心病(80.95%比15.85%)、高血压比例(53.97%比22.40%)较高(P<0.05),血清LncRNA MEG3表达水平[0.62±0.17比1.01±0.31]较低(P<0.05)。冠状动脉钙化病人血清LncRNA MEG3与miR-21、hs-CRP、TNF-α、IL-1β水平呈负相关,miR-21与hs-CRP、TNF-α、IL-1β水平呈正相关(P<0.05)。冠心病、LncRNA MEG3、miR-21水平是影响冠状动脉钙化发生的危险因素(P<0.05)。血清LncRNA MEG3、miR-21联合检测预测冠状动脉钙化的曲线下面积为0.88[95%CI:(0.84,0.91)],灵敏度为84.13%,特异度为85.79%。结论冠状动脉钙化病人血清LncRNA MEG3表达水平明显降低,miR-21表达水平明显升高,二者可能作为生物标志物,共同预示冠状动脉钙化发生。

非小细胞肺癌凋亡及相关基因bcl-2和bax的表达

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡与相关基因bcl-2、bax表达产物的关系及其临床意义。方法:应用流式细胞术和间接免疫荧光标记法进行检测。结果:凋亡率,Bcl-2、Bax蛋白标记率在NSCLC组与对照组中的差别有统计学意义(P<0.05)。NSCLCI期凋亡率明显高于II、III期组(P<0.01)。NSCLCI期组Bcl-2蛋白标记率明显低于II、III期组(P<0.01)。NSCLC中Bcl-2蛋白标记率与凋亡率呈负相关(r=-0.667,P<0.01)。Bax标记率与凋亡率无直线相关性(r=0.230,P>0.05)。Bcl-2/Bax>1组凋亡率明显低于Bcl-2/Bax≤1组(P<0.05)。结论:随着NSCLC临床分期的进展凋亡率下降,Bcl-2通过抑制凋亡影响NSCLC的进展。NSCLC细胞内存在一种对死亡讯号的应答模式:bcl-2/bax。

百合“索邦”病程相关蛋白基因LhSorPR10-2的克隆与分析

病程相关蛋白(Pathogenesis-related Proteins,PR)是植物在受病原物侵染过程中诱导产生的一类蛋白.为研究百合“索邦”PR10基因的生物学功能,本研究在灰霉菌(Botrytis elliptica)处理不同时间的百合“索邦”叶片转录组数据库中筛选获得显著诱导表达的一个病程相关蛋白PR10基因,命名为“LhSorPR10-2”,并对其进行生物信息学分析、表达模式分析及其启动子克隆分析.结果显示:LhSorPR10-2全长761 bp,开放阅读框为474 bp,编码158个氨基酸,等电点为5.72.LhSorPR10-2在百合“索邦”中的表达具有组织特异性,在叶中表达量最高;该基因可被病原菌椭圆葡萄孢(Botrytis elliptica)和尖孢镰刀菌(Fusariumoxy sporum)诱导上调表达,并能被植物激素茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(SA)和乙烯利(ETH)诱导响应以及高温(50℃)和低温(0℃)胁迫诱导表达.另外,启动子区的顺式作用元件分析显示LhSorPR10-2启动子区含有大量与光信号、植物激素、胁迫和分生组织等相关的功能域,推测其可能在生物及非生物胁迫响应过程中发挥重要作用.本研究旨在了解百合“索邦”PR10基因的有关特性及在抗病防御反应中的作用,为今后揭示该基因的抗性分子机制提供理论基础.

尖孢镰孢菌胁迫下番茄病程相关基因表达研究

[目的]为了明确番茄病程相关基因在病原菌胁迫下的表达模式,[方法]本研究运用实时荧光定量PCR法对番茄中PRP5、PRP10、DRRP206、ERTF1B和PO等基因在尖孢镰孢菌番茄专化型菌株胁迫条件下和非胁迫条件下3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和7 d时间段的表达情况进行研究。[结果]结果表明,供试的番茄植株在接种7天后表现出明显的萎蔫症状;PRP10基因在处理组中的相对表达量远低于同一时间段对照组中的相对表达量;ERTF1B基因在处理组和对照组中各时间段相对表达量值极低,差异不明显;在处理组中PRP5、DRRP206和PO基因在接种7 d后的相对表达量明显高于对照组,其中DRRP206和PO基因在接种12 h后的相对表达量显著上升。[结论]综上所述,在病原菌胁迫下番茄感病品种中病程相关蛋白编码基因PRP5、PRP10和ERTF1B的相对表达量较低甚至不表达,还有些病程相关蛋白编码基因如DRRP206和PO的相对表达量较高,但并不足以使供试的番茄植株抗病。

费尔干猪毛菜病程相关蛋白SfPR1a基因的异源表达增强了烟草对干旱、盐及叶斑病的抗性

为明确一年生草本盐生植物费尔干猪毛菜(Salsola ferganica Drob.)病程相关蛋白基因SfPR1a (GenBank登录号为JQ670917)是否参与了植物对逆境胁迫的响应,采用qRT-PCR检测了该基因在不同组织部位和脱落酸(ABA)、茉莉酸(JAs)、乙烯合成直接前体(ACC)等相关激素胁迫及NaCl处理下的表达规律,同时对转基因烟草在盐、旱及丁香假单胞菌等胁迫下的抗性进行了鉴定。结果显示, SfPR1a基因在费尔干猪毛菜根中的表达量显著高于茎叶中,且受到ABA、JAs、ACC、NaCl的积极诱导;干旱胁迫下,转基因烟草的丙二醛(MDA)含量显著低于野生型烟草,显示出较强的抗旱表型;盐胁迫下,异源表达SfPR1a的转基因烟草幼苗生长显著优于野生型烟草;丁香假单胞菌攻毒后的转基因烟草叶片呈现严重的坏死反应,但植株的整体抗性表型显著优于野生型烟草;亚细胞定位结果显示该蛋白定位于植物细胞质外体空间。以上结果表明,费尔干猪毛菜病程相关蛋白SfPR1a基因参与了植物对非生物及生物胁迫的抗性。

链格孢侵染对甜瓜病程相关蛋白活性及基因表达的影响

以抗病能力强的伽师瓜和抗病能力较弱的86-1甜瓜作为实验材料,研究甜瓜果实应答链格孢侵染过程中对几丁质酶(CHT)、β-1,3-葡聚糖酶(GLU)活力变化的影响及基因表达规律。伽师瓜和86-1甜瓜接种浓度为1×106个/m L A.alternata孢子悬浮液20μL,置于6~8℃冷库贮藏,测定病斑大小,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活力及基因相对表达量。结果表明:损伤接种A.alternata后,伽师瓜和86-1甜瓜均在15 d发病,贮藏过程中伽师瓜果实的发病率及病斑大小均低于86-1甜瓜;甜瓜应答侵染过程中,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活力呈现先升高后下降的趋势,分别于21 d,18 d达到酶活高峰,且接种伽师瓜酶活力显著高于86-1甜瓜(p<0.05),伽师瓜通过增强病程相关酶活力来抵御链格孢的侵染;伽师瓜CHT1、CHT2、GLU基因表达量显著高于86-1甜瓜,分别在贮藏18、18、15 d表达量最大;贮藏0~21 d病程相关蛋白活力及基因相对表达量与病斑直径呈正相关,说明病程相关蛋白在植物抵御病原微生物侵染早期与中期中起到了关键作用,并且在侵染中期作用显著。

长链非编码RNA在自噬相关基因表达调控中的研究进展

现有研究已充分证实细胞自噬与人体诸多疾病的发生和转归密切相关,靶向调控自噬已经成为临床疾病诊疗领域新的突破点。在自噬的起始与调控中,涉及复杂的基因转录控制网络与翻译后的修饰,而长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是参与基因表达调控的关键分子,在转录及转录后等多层次调控蛋白质的表达,因此越来越多的研究开始关注自噬调控相关的lncRNA在疾病发生发展中的角色。

条锈菌诱导的小麦病程相关蛋白TaPR10基因的克隆及特征分析

【目的】克隆条锈菌诱导的小麦病程相关蛋白PR10基因,研究其在小麦成株抗条锈病防御反应中的作用。【方法】采用电子克隆、RT-PCR技术,从条锈菌侵染的小麦兴资9104中,分离病程相关蛋白10基因;采用生物信息学技术预测分析该基因的DNA序列结构及其编码蛋白的保守域及基本特性;利用实时荧光定量RT-PCR技术,分析该基因在小麦成株期和苗期受条锈菌CYR32侵染后的表达情况。【结果】分离到病程相关蛋白10基因,命名为TaPR10,ORF长483bp,编码由160个氨基酸组成的蛋白质TaPR10;TaPR10不含跨膜区、无信号肽、定位在胞内,除具有典型的病程相关蛋白Bet_v_I家族保守结构域外,还有其它4类功能保守域;与小麦、高粱、玉米和水稻等4种植物PR10蛋白的氨基酸序列相似性在80%左右;TaPR10 DNA序列内部存在188至271位84bp的内含子序列,其拼接位点序列具有GT-AG双核苷酸序列;TaPR10基因表达分析的结果表明,TaPR10基因在成株期和苗期反应中表达量均上调,成株期表达高于苗期。【结论】首次分离到一个条锈菌CYR32诱导的小麦TaPR10基因,该基因可能参与了小麦成株抗条锈病防御反应。

PTEN和VEGF在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的探讨PTEN和VEGF基因在非小细胞肺癌中的表达及两者的相互关系。方法应用免疫组织化学法检测65例非小细胞肺癌组织及18例肺良性组织中PTEN和VEGF基因的表达。结果PTEN和VEGF基因在非小细胞肺癌组织中表达显著高于肺良性组织,PTEN基因表达与肺癌患者的细胞分化程度、PTNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。VEGF基因表达与肺癌患者的肿瘤大小、细胞分化程度、PTNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。PTEN与VEGF基因呈明显负相关(P<0.05)。结论PTEN和VEGF与非小细胞肺癌的临床特征和生物学行为密切相关,二者的检测将有助于评估肺癌患者的恶性程度和预后。

己酮可可碱对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏基因表达谱的影响

背景:己酮可可碱(PTX)可减轻高脂饮食大鼠脂肪性肝炎和肝纤维化的程度,但其作用机制尚未明确。目的:探讨PTX对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏基因表达谱的影响。方法:24只Sprague-Dawley大鼠在高脂饮食4周后随机分为模型组(n=12)和PTX干预组(n=12,PTX每天100mg/kg),并继续予高脂饮食;6只普通饮食饲养大鼠作为对照组。于实验第24周处死大鼠,应用含15650条基因的大鼠U230A芯片检测肝脏基因表达的改变。结果:与模型组相比,PTX干预组共出现370条差异表达基因,其中模型组较对照组上调而PTX干预后下调的基因57条,主要包括炎症/免疫反应相关基因、细胞信号转导相关基因、细胞外基质和细胞黏附分子基因、代谢酶和生物转化相关基因、离子通道/运输蛋白基因等;模型组较对照组下调而PTX干预后上调的基因25条,其功能涉及细胞信号转导、脂质代谢、生物转化等。结论:PTX可能通过影响NASH大鼠肝脏多种结构和功能基因的表达而有助于NASH和肝纤维化的防治。

杨树PR10基因应答杨树叶枯病与非生物胁迫表达

以小黑杨(Populus simonii×P.nigra)为试验材料,从小黑杨cDNA中克隆得到477 bp的PR10基因(Potri.008G212500.1)片段,编码158个氨基酸。结果表明:PR10基因含有P-环和Bet v 1家族保守结构域,属于稳定的亲水蛋白,无信号肽。系统进化树分析显示,杨树PR10蛋白与毛果杨、毛白杨遗传距离较近,说明其亲缘关系较近。亚细胞定位结果显示,GFP-PR10蛋白定位于细胞核中。PR10基因表达具有组织特异性,并受胁迫诱导表达。PR10基因在根中表达水平明显高于叶片中的表达水平。在杨树叶枯病病原菌(Alternaria alternata)胁迫48 h时达到初始表达量的8.86倍;高盐胁迫PR10基因表达量在根中变化显著,在12 h时达到初始表达量的15.25倍。PR10基因受到水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)胁迫时,其表达量也发生显著变化,证实PR10基因受到水杨酸通路与茉莉酸通路调控。