费尔干猪毛菜病程相关蛋白SfPR1a基因的异源表达增强了烟草对干旱、盐及叶斑病的抗性

为明确一年生草本盐生植物费尔干猪毛菜(Salsola ferganica Drob.)病程相关蛋白基因SfPR1a (GenBank登录号为JQ670917)是否参与了植物对逆境胁迫的响应,采用qRT-PCR检测了该基因在不同组织部位和脱落酸(ABA)、茉莉酸(JAs)、乙烯合成直接前体(ACC)等相关激素胁迫及NaCl处理下的表达规律,同时对转基因烟草在盐、旱及丁香假单胞菌等胁迫下的抗性进行了鉴定。结果显示, SfPR1a基因在费尔干猪毛菜根中的表达量显著高于茎叶中,且受到ABA、JAs、ACC、NaCl的积极诱导;干旱胁迫下,转基因烟草的丙二醛(MDA)含量显著低于野生型烟草,显示出较强的抗旱表型;盐胁迫下,异源表达SfPR1a的转基因烟草幼苗生长显著优于野生型烟草;丁香假单胞菌攻毒后的转基因烟草叶片呈现严重的坏死反应,但植株的整体抗性表型显著优于野生型烟草;亚细胞定位结果显示该蛋白定位于植物细胞质外体空间。以上结果表明,费尔干猪毛菜病程相关蛋白SfPR1a基因参与了植物对非生物及生物胁迫的抗性。

胡椒PnNPR1基因的克隆与表达分析

根据胡椒病程相关基因非表达子1(Nonexpressor of pathogenesis-related genes1,NPR1)基因的部分序列设计引物,运用RT-PCR方法获得其家族成员的1个全长c DNA,命名为Pn NPR1,长度1 712 bp,开放阅读框1 362 bp,编码454个氨基酸。预测Pn NPR1分子量为141.56 ku,理论等电点为4.98。该基因含有BTB/POT结构域、ANK锚蛋白重复序列、DUF和NPR1-like C等4个结构域,具有植物NPR1所共有的保守结构域。系统进化分析表明,Pn NPR1与苜蓿的同源性最高。Real-time RT-PCR结果表明,Pn NPR1在胡椒叶片、根、茎和花中均表达,在叶中的表达量最高。辣椒疫霉菌诱导后,Pn NPR1基因的表达量在抗/感2种胡椒中均出现先增加后减少的现象,并且在抗病种质中表达量较高。研究结果为Pn NPR1的功能研究提供了理论依据。

长链非编码RNA MALAT1与子宫颈癌

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是一类转录本长度超过200 nt的RNA分子,从表观遗传学调控、转录调控、转录后调控等层面实现对基因表达的调控,在肿瘤发生发展中的作用及其机制成为研究的热点。肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)属lnc RNA家族重要成员,研究发现其与子宫颈癌发病机制相关,可能促进子宫颈癌发生,有望成为子宫颈癌诊断和治疗的新靶点。本文就lnc RNA MALAT1在子宫颈癌中的研究现状作一综述。

CLPTM1L变异与云南汉族人群非小细胞肺癌的相关性

目的探究唇腭裂跨膜1样蛋白(CLPTM1L)基因调控区单核苷酸多态性(SNP)变异位点(rs27069、rs27070、rs27071及rs27996)与云南地区汉族人群非小细胞肺癌发生风险的相关性。方法500例非小细胞肺癌患者作为病例组、613例健康对照个体作为对照组,采用TaqMan探针法对两组受试者外周血CLPTM1L基因调控区rs27069、rs27070、rs27071和rs27996位点进行基因分型,并采用χ2检验分析上述4个SNP位点的等位基因、基因型及单倍型分布频率。结果rs27071的等位基因和基因型分布频率在对照组和病例组间比较差异有统计学意义(P=0.006和P=0.004),该位点的C等位基因可能是非小细胞肺癌的保护性因素(OR=0.65,95%CI为0.50~0.89);而rs27069、rs27070和rs27996位点的等位基因和基因型分布频率在病例组和对照组间比较差异无统计学意义(P>0.0125);单倍型分析结果显示,单倍型rs27069[T]-rs27070[C]-rs27071[C]-rs27996[G]与降低非小细胞肺癌发生风险相关(P=0.006,OR=0.662,95%CI为0.493~0.890)。结论CLPTM1L调控区SNP位点rs27071与云南地区汉族人群肺癌的发病风险相关,该位点等位基因C可能是非小细胞肺癌的保护性因素。

非小细胞肺癌个体化治疗疗效相关基因检测分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者个体化治疗相关基因表达情况。方法 122例NSCLC患者的标本,以分支DNA-液相芯片法检测ERCC1、RRM1、STMN1和TYMS基因mRNA表达;以xTAG-液相芯片法检测EGFR基因体细胞突变。结果 122例标本对TYMS、STMN1、ERCC1和RRM1基因mRNA低表达率分别为47.1%、38.2%、30.1%和19.5%;对RRM1、STMN1、ERCC1和TYMS基因mRNA高表达率分别为60.2%,50.0%,27.4%和17.6%;腺癌与非腺癌组比较TYMS和RRM1基因mRNA的低、中、高表达率有显著性差异(P<0.05)。121例患者的EGFR基因突变阳性54例(44.6%);野生型67例(55.4%)。结论对NSCLC患者个体化治疗相关基因检测有利于临床医师参考相关抗癌药物的耐药情况,选择敏感的个体化化疗方案。

水杨酸及其信号转导基因表达在阳春砂果实发育过程中的变化

【目的】对阳春砂发育过程中内源水杨酸含量及转导途径中的关键基因的关系进行深入分析。【方法】以6月、8月采集的阳春砂新鲜果实为实验材料,采用液相质谱联用(LC-MS/MS)的方法测定阳春砂种子团及果皮中水杨酸的含量并结合幼果期、成熟中期、成熟末期的阳春砂果实的高通量测序表达谱数据,分析3个发育时期中水杨酸信号转导通道中相关基因的表达模式。【结果】阳春砂果实发育过程中,种子团及果皮内水杨酸的含量变化一致,且与水杨酸信号转导途径的关键基因的表达量变化基本一致,均呈上升趋势。【结论】内源水杨酸与其信号转导基因之间存在密切的关系。推测为种子团内合成水杨酸后运输至果皮。

甘薯NPR1基因半定量RT-PCR检测方法的建立

为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准确性的分析,建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系.

丹参对CAPD大鼠腹膜间皮细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的:探讨丹参对持续性非卧床式腹膜透析(CAPD)相关性腹膜硬化的治疗价值。方法:将40只大鼠随机分为对照组(A组,给予0.9%NaCl40mL/d),凋亡模型组(B组,给予4.25%腹透液40mL/d),低剂量丹参组(C组,给予4.25%腹透液40mL/d和600mg·kg-·1d-1丹参),高剂量丹参组(D组,给予4.25%腹透液40mL/d和2400mg·kg-·1d-1丹参)。8周后检测腹膜间皮细胞凋亡及促凋亡基因(Fas)和抑凋亡基因(Bcl-2)的蛋白表达,计算凋亡细胞指数(AI)和基因的蛋白阳性表达指数(PEI)。结果:B组FasPEI高于A组(P<0.01),C、D组FasPEI明显低于B组(P<0.01),与A组相近(P>0.05)。A、B、C组Bcl-2PEI差别无统计学意义,D组Bcl-2PEI明显高于A、B组(P<0.01)。B组AI明显高于A组,C、D组AI明显低于B组(P<0.01)。结论:丹参可通过下调Fas基因的蛋白表达,上调Bcl-2基因的蛋白表达,对CAPD时腹膜间皮细胞凋亡产生抑制作用。

胃癌组织PLK1的表达及其意义

目的:研究Polo样激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)在胃癌中的表达与各临床病理特征、抑癌基因和肿瘤增殖活性的关系,探讨PLK1在胃癌发生发展中的作用以及其临床意义. 方法:运用免疫组织化学的方法检测正常胃组织15例, 非典型增生组织11例,胃癌54例中PLK1,Ki67, P53的表达. 结果:PLK1在正常胃组织中表达均为阴性;11例非典型增生组织有4例弱阳性;胃癌中有48例阳性(88.9%), 其表达与组织分化程度、远处转移和淋巴结转移无关(P>0.05),与浸润深度(x2=6.775,P<0.01)和临床分期(x2=9.009,P<0.01)相关.在胃癌中,P53阳性38例(70.4%),PLK1的表达与P53蛋白积聚相关(x2=6.664, P<0.05).胃癌中Ki67标记指数均值为34.7±13.4%, 范围为10.3-60.1%,PLK1的表达与Ki67呈正相关(r=0.720,P<0.01). 结论:PLK1在胃癌中高表达,与肿瘤的增殖活性和抑癌基因相关,在胃癌发生发展中起重要作用.

中国红豆杉TcNPR1基因的克隆与功能研究

水杨酸(SA)可诱导红豆杉细胞中紫杉醇的合成,病程相关基因非表达子基因(NPR1)是SA介导的植物系统获得性抗性(SAR)信号途径中的关键信号分子。本研究从中国红豆杉(Taxus chinesis)细胞中克隆了TcNPR1基因,该基因完整的开放阅读框大小为1857 bp,编码蛋白序列由619个氨基酸组成,含有典型的NPR1保守结构域、锌指结构域和锚蛋白结构域。进化树分析发现,TcNPR1蛋白与拟南芥AtNPR3和AtNPR4类蛋白的亲源关系较近。TcNPR1基因表达响应SA、干旱和NaCl胁迫处理,且随着处理时间增加,TcNPR1基因表达量逐渐增大。超表达TcNPR1的转基因烟草植株对干旱的耐受力增强,叶片内可溶性糖含量达43.8 mg/g(FW),比对照高出2倍左右,说明TcNPR1基因具有表达功能,此结果为探究中国红豆杉细胞响应SA诱导大量合成紫杉醇的信号途径提供了依据。

CIAPIN1和Fibulin-3在膀胱尿路上皮癌中的表达及其临床意义

目的探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)基因和Fibulin-3在膀胱尿路上皮癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法收集膀胱癌及同一患者的癌旁标本98例,以癌旁组织作为对照,分别用实时定量PCR(qRT-PCR)检测组织样本中CIAPIN1和Fibulin-3基因的mRNA变化,利用Western blot检测组织样本中CIAPIN1和Fibulin-3蛋白表达情况;分析两者在膀胱癌临床病理表达特征之间的关系及两个基因的相关性。结果CIAPIN1和Fibulin-3的mRNA水平在膀胱癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),CIAPIN1在膀胱癌组织和癌旁组中的表达分别为4.223±0.986和2.054±0.866(P<0.05);而Fibulin-3在膀胱癌组织和癌旁组中的表达率分别为5.284±1.586和1.981±0.937(P<0.05);Western blot结果显示,与癌旁组织相比,CIAPIN1和Fibulin-3的蛋白水平在膀胱癌组织中的表达显著上调(P<0.05)。CIAPIN1和Fibulin-3基因在膀胱癌中的表达与病理分级、临床分期和淋巴转移相关(P<0.05),两者均与患者年龄和性别无关(P>0.05)。膀胱癌组织中CIAPIN1和Fibulin-3的mRNA表达呈正相关(r=0.2577,P<0.05)。结论CIAPIN1和Fibulin-3在膀胱癌中的表达均显著上调,联合检测可能增加膀胱癌诊断的准确率。

葡萄病程相关蛋白1基因的克隆和表达分析

以葡萄品种‘左优红’组培苗叶片为材料,利用同源克隆法获得其病程相关蛋白1基因VvPR1的cDNA全长序列。扩增片段大小为486bp,编码161个氨基酸,分子量17.5kDa,等电点PI=8.69,含有6个保守半胱氨酸,4个allergenV5/Tpx-1related保守结构域。VvPR1与多种植物PR1高度同源。实时定量PCR检测结果表明VvPR1在葡萄叶片中相对表达量最高;霜霉病菌、低温、盐和干旱胁迫均可显著诱导其表达;水杨酸、脱落酸、茉莉酸、一氧化氮、过氧化氢和硫化氢等亦可诱导其大量表达,据此推测,VvPR1参与了多种生物胁迫和非生物胁迫过程。

牡丹病程相关蛋白1基因的克隆及表达分析

以牡丹柱枝孢叶斑病病原菌Cylindrocladium canadense处理的牡丹‘鲁菏红’叶片为材料,根据已发表植物PR1的保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR和RACE技术,获得病程相关蛋白1基因的cDNA,命名为PsPR1。该序列全长为744bp,5′和3′非翻译区分别有42bp和225bp。该基因有477bp的开放阅读框(ORF),编码158个氨基酸,成熟蛋白分子量14.8kD,等电点(pI)6.19,具有典型的SCP_PR1_like保守结构域。通过Blast比对发现该基因与多种植物病程相关蛋白1基因具有高度同源性。通过实时荧光定量PCR检测,发现该基因在牡丹萼片中相对表达量最高,在正常生长的叶片中最少。该基因受病原菌C.canadense和信号物质SA的显著诱导,分别在处理的24h和12h达到最高峰,说明PsPR1可能参与了牡丹的抗病防御过程。

植物TGA转录因子研究进展

TGA基因家族是b ZIP转录因子家族中十分重要的一组,其能够与靶基因启动子上的as-1区域相结合,激活或抑制下游靶标基因的转录,从而调控植株抗性或花器官发育。自烟草中首个TGA基因被鉴定以来,从拟南芥、水稻和苹果等多个物种中均有该家族基因被分离和鉴定出来。拟南芥基因组中共有10个TGA转录因子,依据其序列相似性可将其分为5组(Ⅰ组包含TGA1与TGA4;TGA2、TGA5与TGA6组成第Ⅱ组;TGA3与TGA7组成第Ⅲ组;TGA9和TGA10构成第Ⅳ组;PAN为第Ⅴ组)。其中Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ组成员广泛参与植株的抗病反应。酵母双杂交和pull-down等结果显示,TGA1—TGA7均可与水杨酸信号途径关键调节因子NPR1相互作用。EMSA结果表明,这种相互作用能够促进TGA对下游PR1启动子的结合并上调其表达,提高植株抗病性。但这3组基因在植物基础抗性与系统获得抗性中的作用有所不同:tga3突变体对病菌的基础抗性存在缺陷,但植株诱导抗性却并不受影响;TGA1与TGA4对基础抗性和系统抗性均有一定影响;TGA2、TGA5与TGA6之间存在功能冗余,仅tga2/5/6三突变体才表现出与npr1突变体类似的系统获得性抗性缺乏的表型。酵母双杂交筛选发现:Ⅱ组TGA能够与谷氧还蛋白GRX480相互作用并介导SA对JA途径标记基因的抑制作用,同时,该组蛋白还能够与GRAS家族蛋白SCL14相互作用,增强下游CYP81D11与GSTU7等解毒相关基因的表达,以一种不依赖于NPR1的信号途径提高植物对外源化学物质毒害的耐性。此外,tga1/4双突变体与nrt2.1/2.2双突变体的初生根和侧生根生长在低氮条件下较野生型显著下降,Ch IP和酵母单杂交结果显示,TGA1能够与硝酸盐转运蛋白基因NRT2.1及NRT2.2的启动子相互结合,通过调节这两个基因的表达来调节植物的氮响应。而TGA3在镉长距离运输中发挥重要作用。Ⅳ与Ⅴ组成员在调控花器官发育中具有重要作用。tga9/10表现出与roxy1/2双突变体类似的花药发育缺陷的表型;PAN能够与NPR1类蛋白BOP1和BOP2相互作用,并且pan与bop1/2双突变体均可表现出5枚萼片的表型,暗示花发育与抗病可能具有类似的信号调节机制。在文章最后介绍了翻译后修饰对TGA功能的影响,并对TGA未来的研究方向进行了探讨,以期为该领域研究者提供参考。

肿瘤转移相关基因表达与Ⅰ期非小细胞肺癌预后的相关性

目的:探讨肿瘤转移相关基因(metastasis-associated gene 1,MTA1)蛋白阳性表达与Ⅰ期非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)复发/转移及预后的相关性。方法:应用免疫组织化学法检测60例Ⅰ期NSCLC患者癌组织及30例癌旁正常肺组织中MTA1蛋白的表达情况,应用统计学方法分析MTA1蛋白表达与临床病理特征、复发/转移及预后的相关性。结果:MTA1蛋白在Ⅰ期NSCLC癌组织中阳性表达率显著高于癌旁正常肺组织(P<0.005);MTA1蛋白阳性表达率与肿瘤分化程度(P<0.005)和肿瘤直径(P<0.05)具有相关性,但与患者的年龄、性别、肿瘤组织学类型及吸烟情况无关;MTA1蛋白阳性表达者与阴性表达者在术后5年内发生复发/转移的分别为16例(72.7%)与7例(18.4%),经比较差异有统计学意义(P<0.005);MTA1蛋白阳性表达者的5年生存率为40.9%,显著低于阴性表达者的84.1%(P=0.000 1);COX回归多因素分析结果显示,MTA1蛋白阳性表达是Ⅰ期NSCLC独立的预后因素(HR=5.23,P=0.007)。结论:MTA1蛋白的检测对判断Ⅰ期NSCLC患者复发/转移有一定的预测价值,可以作为其独立的预后指标。

长链非编码RNA在泌尿系统肿瘤中的研究进展

近十年许多非编码RNA被发现。长链非编码RNA(lncRNA)与人类肿瘤的发生密切相关,为肿瘤的研究在分子层面上又揭开了崭新的一页。在许多肿瘤细胞中,lncRNA表达异常,仅少数一些lncRNA的功能为大家所了解。本文对lncRNA在泌尿系统肿瘤中的研究进展进行综述。

长链非编码RNA在肝癌中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是指长度超过200个核苷酸的非编码RNA,不具有编码蛋白质功能。近年来研究发现,与肝癌有关的lncRNA包括H19、HOC转录反义RNA、肝癌过表达转录本、肺腺癌转移相关转录本1、人母系表达基因3等,其与肝癌的发生、发展关系密切,有望成为新型的肝癌标志物及治疗靶点,在肝癌诊断、预后和治疗方面应用前景良好。

长链非编码RNA在膀胱肿瘤中的研究进展

近年来许多长链非编码RNA(lncRNA)被发现,lncRNA表达量的异常与肿瘤的发生、发展密切相关,根据其作用可分为促进肿瘤作用lncRNA和抑制肿瘤作用lncRNA,使lncRNA有望成为新型肿瘤诊断标志物和治疗靶点,用于肿瘤诊断、治疗和复发的监测。相关研究发现,lncRNA与膀胱肿瘤细胞的增殖、浸润、转移和复发密切相关。目前关于lncRNA在膀胱肿瘤中的作用大多来自其表达水平的差异,提示调控lncRNA表达量可能为膀胱肿瘤的诊断和治疗提供新依据。

纤维蛋白原相关蛋白1-淋巴细胞活化基因3与长链非编码RNA-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3共调控增强CD8^(+)T细胞抑制肝细胞癌肿瘤生长

目的体外研究协同抑制纤维蛋白原相关蛋白1(FGL1)-淋巴细胞活化基因3(LAG-3)与长链非编码RNA(lncRNA)-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)双免疫逃逸通路,联合增强T淋巴细胞活性,显著抑制HCC肿瘤细胞恶性增殖和肿瘤生长的效用及机制。方法构建敲除、稳定转染的5组人肝癌细胞株HepG2、HepG2-FGL1-KO、HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)、HepG2-LAG-3-KO、HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-),并以此构建5组细胞株移植瘤免疫系统人源化小鼠成瘤模型。通过质量细胞计数法测定淋巴细胞CD8+T亚群表达水平,并测定肿瘤生长大小体积变化。采用t和χ^(2)检验。结果实验期间,5组中位肿瘤生长速率分别为149、136、81、75、68 mm^(3)/d。5组中位肿瘤体积分别为1.18、0.91、0.37、0.45、0.29 g。与HepG2组比较HepG2-FGL1-KO组和HepG2-LAG-3-KO组动物瘤体积显著小于HepG2组(t=7.582,P<0.05),HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组动物肿瘤体积又显著小于单独敲除组(t=3.953,P<0.05)。同时,5组中位CD8+T细胞亚群表达量分别为2.1×107、2.9×107、3.8×107、7.7×107、13.2×107。HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组CD8+T细胞亚群表达活性显著高于FGL1和LAG-3单抑制组(t=2.988,P<0.05),而两个单抑制组的CD8+T细胞亚群表达活性又显著高于HepG2对照组(t=6.416,P<0.05)。结论单一免疫检查点的抑制对于遏制肿瘤逃避免疫杀伤存在局限性,多个免疫检查点因子信号通路联合抑制相较于单一通路的单控,将显著调控细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活和对肿瘤细胞的敏感性毒性表达。

长链非编码RNA在肝纤维化发生发展中的作用研究进展

肝纤维化是指肝细胞外基质的弥漫性过度沉积与异常分布,是肝脏对慢性损伤的病理性修复反应,肝星状细胞(HSCs)的激活是其发生的重要环节。非编码RNA(ncRNA)已成为细胞信号传导和相关人类疾病的重要调节因子,长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的ncRNA,过去认为其不具备蛋白编码能力,近年认为其可通过编码小肽调控细胞增殖。lncRNA参与各种器官的纤维化,包括肝脏、心脏、肺和肾脏。在肝纤维化过程中,lncRNA参与调节多种细胞生物学过程,根据作用可分为三类。大部分lncRNA发挥肝纤维化促进作用,如肺腺癌转移相关转录本1、肝纤维化相关的lncRNA1、浆细胞瘤变型异位因子1等;少部分lncRNA发挥抑制作用,如母系表达基因3、生长停滞特异转录因5等;极少数lncRNA具备促进和抑制肝纤维化发生的双重作用。