黄连解毒汤及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的探讨黄连解毒汤(Huanglian Jiedu Decoction,HJD)及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响及其机制。方法制备HJD及其拆方的大鼠含药血清;培养3T3-L1前脂肪细胞;以四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测3T3-L1前脂肪细胞的增殖;油红O染色并通过比色定量分析检测3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的堆积;采用逆转录聚合酶链反应技术检测过氧化物体增殖物活化受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancerbinding protein,C/EBPα)mRNA的表达。结果与空白对照组比较,HJD、黄芩栀子合煎和栀子的含药血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖均表现出明显的促进效应(P<0·05,P<0·01);HJD、黄芩栀子合煎、黄连和栀子的含药血清处理前脂肪细胞,分化后胞浆中脂滴明显减少,PPARγ和C/EBPαmRNA表达明显降低,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0·05,P<0·01)。结论 HJD促进前脂肪细胞的增殖,减少脂肪细胞分化过程中脂质的堆积,抑制脂肪细胞的分化,可能与其降低PPARγ和C/EBPαmRNA表达有关;HJD发挥此作用的主要成分可能来自于黄芩栀子药对。

金水六君煎及其拆方含药血清对人中性粒细胞弹性蛋白酶诱导A549细胞黏液高分泌的影响

目的探讨金水六君煎及其拆方对A549细胞黏液高分泌模型黏蛋白MUC5AC、MUC5B表达的影响。方法制备金水六君煎及其拆方、生理盐水大鼠血清,将人肺腺癌细胞A549分为空白对照组、模型组、金水六君煎组、养阴组、化痰组。采用人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)25 nmol/L诱导A549细胞黏液高分泌,20%空白大鼠血清及含药血清进行干预。CCK8法测定细胞活性,实时荧光定量PCR法(rt-PCR)检测细胞MUC5AC mRNA、MUC5B mRNA表达,Western blotting检测细胞MUC5AC mRNA、MUC5B mRNA表达。结果各组细胞活性无明显差异。与空白组比较,模型组细胞黏蛋白MUC5AC m RNA、MUC5B m RNA与蛋白表达明显增多(P <0.05或P <0.01)。与模型组比较,金水六君煎组及养阴组MUC5AC mRNA、MUC5B m RNA表达明显降低(P <0.05);金水六君煎组及化痰组MUC5AC m RNA、MUC5B m RNA表达明显降低(P <0.01)。结论人中性粒细胞弹性蛋白酶可诱导A549细胞粘蛋白高表达,成功建立黏液高分泌细胞模型。金水六君煎及其拆方含药血清可明显抑制黏蛋白MUC5AC mRNA、MUC5B mRNA与蛋白表达。

乳康饮含药血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的作用

目的探讨乳康饮及拆方各组含药血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力的抑制作用。方法乳康饮拆方为疏肝理气组和益气健脾组并制作动物含药血清,以各组含药血清处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系,培养48h后,应用划痕实验和Transwell细胞侵袭实验分别测定乳康饮及拆方组含药血清对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果乳康饮及及拆方含药血清能够显著抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭,与空白血清对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),乳康饮全方组效果明显优于疏肝理气和益气健脾拆方组(P均<0.05)。结论乳康饮及拆方含药血清能够显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。

固本抑瘤Ⅱ号及其拆方含药血清诱导MCF7细胞自噬的研究

目的:研究固本抑瘤Ⅱ号(GYⅡ)及其拆方大鼠含药血清对人乳腺癌细胞MCF7自噬的影响。方法:制备GYⅡ及其拆方大鼠含药血清,培养MCF7细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制,单丹磺酰尸胺(MDC)及Hoechst 33342双染色荧光显微镜、微管相关蛋白1轻链3(MAP-LC3)蛋白Ⅱ(MAP-LC3-Ⅱ)染色激光共聚焦及透射电镜观察自噬,MAP-LC3-Ⅱ/DNA双参数流式细胞术同步分析细胞自噬与细胞周期。结果:与空白组比较,全方组、益气组含药血清处理MCF7细胞表现出细胞抑制效应,活血组、鸡血藤组含药血清处理MCF7细胞均表现出明显的自噬。结论:GYⅡ全方和益气组具有抑制MCF7细胞增殖的效应,而活血组和鸡血藤组未见抑制作用,可能与该两组含药血清诱导MCF7细胞自噬有关。

肠安Ⅰ号方含药血清对致敏肥大细胞活化脱颗粒的影响

目的:探讨肠安Ⅰ号方含药血清对免疫球蛋白E(IgE)介导的大鼠嗜碱性粒细胞(RBL-2H3)活化脱颗粒的影响及对非受体型酪氨酸蛋白激酶/脾酪氨酸蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶(Lyn/Syk/MAPK)信号通路的调节作用。方法:制备肠安Ⅰ号方含药血清,将SD雄性大鼠随机分为肠安Ⅰ号方高、中、低剂量组及空白组,每组10只,给药剂量:空白组给予10 mL·kg-1蒸馏水灌胃,肠安Ⅰ号方低、中、高剂量组分别予1.15,2.30,4.60 g·kg-1药液灌胃,给药体积10 mL·kg-1,1次/d,连续灌胃7 d。细胞分组:空白组,予正常大鼠血清;模型组,予正常大鼠血清;酮替芬组,予正常大鼠血清+30μmol·L-1酮替芬。肠安Ⅰ号方低、中、高剂量组分别为予肠安Ⅰ号方低、中、高剂量含药血清。建立IgE介导的RBL-2H3细胞活化、脱颗粒模型,采用甲苯胺蓝染色进行肥大细胞计数;采用比色法检测细胞脱颗粒β-氨基己糖释放率;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中肥大细胞类胰蛋白酶(MCT),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及组胺含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Lyn/Syk/MAPK通路蛋白表达。结果:对于细胞活化脱颗粒,与空白组比较,模型组细胞β-氨基己糖释放率显著升高(P<0.01),脱颗粒率明显升高(P<0.05);与模型组比较,肠安Ⅰ号方含药血清各剂量组细胞β-氨基己糖释放率显著下降(P<0.01),细胞脱颗粒率明显下降(P<0.05)。对于活性介质释放,与空白组比较,模型组细胞上清组胺,MCT,TNF-α及MCP-1含量均显著增高(P<0.01);与模型组比较,肠安Ⅰ号方各剂量组细胞上清组胺,MCT,TNF-α及MCP-1含量均显著减低(P<0.01)。与正常组比较,模型组细胞Lyn和Syk及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),c-Jun氨基末端激酶(JNK),p38 MAPK磷酸化水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,肠安Ⅰ号方各剂量Lyn,Syk及ERK1/2,JNK及p38蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论:肠安Ⅰ号方含药血清通过下调RBL-2H3细胞活化上游信号通路关键蛋白Lyn,Syk和下游ERK1/2,JNK及p38蛋白的磷酸化水平,抑制肥大细胞活化脱颗粒,减少组胺,MCT,TNF-α及MCP-1等活性介质释放,这可能是其抑制肥大细胞活化,治疗腹泻型肠易激综合征(IBS-D)内脏高敏感的机制之一。