中脑导水管周围灰质腹外侧部星形胶质细胞对糖尿病神经病理性疼痛及痛相关负性情绪的调控作用

目的探索中脑导水管周围灰质腹外侧部(vlPAG)星形胶质细胞活化在糖尿病神经病理性疼痛(DNP)及痛相关负性情绪发生、发展及维持过程中的具体作用及特征。方法使用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠Ⅰ型糖尿病,复制DNP模型;免疫荧光法观察、Sholl分析评价vlPAG星形胶质细胞在DNP进展过程中的形态和数量变化;采用化学遗传学技术定点定量向vlPAG注射携有星形胶质细胞特异性启动子gfaABC1D及修饰后的人毒蕈碱受体(hM3Dq或hM4Di)基因片段的腺相关病毒;待病毒稳定转染表达后,利用受体的外源性配体氯氮平-N-氧化物(CNO)靶向调控vlPAG星形胶质细胞活性;以机械性异常性疼痛阈值为观察指标,评价星形胶质细胞活化在DNP中的作用;同时,采用旷场试验、高架十字迷宫试验、条件性位置偏爱试验,评价vlPAG星形胶质细胞活化在DNP相关焦虑样、厌恶样情绪中的作用。结果STZ成功诱导高血糖症状后,SD大鼠机械痛阈进行性下降,提示DNP模型复制成功。随着DNP症状加剧,vlPAG星形胶质细胞数量逐渐增多、胞体面积逐渐增大、形态复杂性逐渐增强。化学遗传学手段激活正常大鼠vlPAG星形胶质细胞可诱导神经病理性疼痛样症状(机械痛阈下降);化学遗传学手段抑制DNP模型大鼠vlPAG星形胶质细胞可改善DNP症状(机械痛阈升高)。同时,化学遗传学手段抑制vlPAG星形胶质细胞可减少DNP模型大鼠痛相关焦虑样行为,改善模型动物痛相关厌恶情绪。结论vlPAG星形胶质细胞活化与DNP的发生、发展及维持密切相关,vlPAG星形胶质细胞可能参与了DNP及痛相关负性情绪的编码和调控。

氯胺酮联合可乐定对神经病理性痛大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响

目的对神经病理性痛大鼠在联合使用氯胺酮（KET）与可乐定条件下其疼痛分辨和情绪体验受影响的情况进行观察。方法雄性SD大鼠30只,分为假手术组（S组）、坐骨神经结扎模型组（C组）、氯胺酮组（K组）、可乐定组（CL组）、氯胺酮＋可乐定组（KC组）。C组、K组、CL组和KC组采用坐骨神经慢性压迫法（CCI）制备大鼠神经病理性痛模型,S组仅暴露坐骨神经,不结扎。术后3~10d,每天给予K组氯胺酮（0.3mg/kg）、CL组可乐定（1μg/kg）、KC组氯胺酮（0.3mg/kg）＋可乐定（1μg/kg）鞘内注射,S组和C组鞘内注射等容量生理盐水。各组分别于术前、术后3、7、10d测定机械痛阈和热痛阈,各组于术后第10天行反映痛情绪的大鼠位置逃避实验（PEAP）。结果与S组比较,C组、K组、CL组、KC组术后机械痛阈和热痛阈降低（P〈0.05）,其在白室所待时间延长（P〈0.05）;与C组比较,K组、CL组、KC组术后机械痛阈和热痛阈升高（P〈0.05）,其在白室所待时间缩短（P〈0.05）;与K组、CL组比较,KC组术后机械痛阈和热痛阈升高（P〈0.05）,其在白室所待时间明显缩短（P〈0.05）,减少了其位置逃避行为。结论在联合应用氯胺酮及可乐定的情况下,神经病理性疼痛大鼠所存在的热痛和机械痛过敏现象能够得到有效的抑制,而且CCI大鼠的痛行为和痛相关负性情绪也会得到较大的改善。

鞘内注射m—AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响

目的观察鞘内注射钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ特异性抑制剂m—AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响。方法sD雄性大鼠18只按随机数字表法分为3组（每组n=6）：假手术对照Sham组（S组）、坐骨神经结扎模型对照Control组（C组）、m-AIP组。C组和m—AIP组制备坐骨神经慢性挤压伤（CCI）模型，S组仅显露坐骨神经不结扎。术后7dS组和C组鞘内注射0．9％NaCl20μl，m-AlP组鞘内注射溶于0．9％NaCl的m—AIP0．5nmo/20μl。各组于给药后1．5h行反映痛情绪的大鼠位置逃避实验（Placeescape／avoidanceparadigm，PEAP），给药前及给药后2h、4h、8h检测大鼠的热缩足反射潜伏期（Pawwithdrawalthermallatency，PWTL）和机械性缩足反射阈值（Pawwithdrawalmechanicalthreshold，PWMT）。结果鞘内给予m—AIP0．5nmol能够改善大鼠痛行为反应，减少位置逃避行为。给药后2h、4hm—AlP组PwTL[（11．45±2．04）S，（10．26±1．48）S]，PWMT[（21．15±4．32）g，（20．45±4．09）g]比c组PwTL[（9．63±1．65）S，（9．30±0．73）S]，PWMT[（13．87±2．36）g，（14．804-3．12）g]升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。给药前及给药后8hm—AIP组PWTL，PWMT与C组PWTL，PWMT相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CaMKII在坐骨神经痛的感觉分辨和情绪体验中起重要作用，鞘内注射m—AIP能够改善CCI大鼠痛行为和痛相关负性情绪。