痛风宁含药血清对尿酸盐诱导THP-1中NALP3炎性体相关蛋白及炎症因子表达的影响

目的通过检测痛风宁含药血清对尿酸盐(monosodium urate,MSU)诱导人单核细胞株THP-1(human monocytic cell line,THP-1)中NALP3炎性体相关蛋白与mRNA及上清液中IL-1β、PGE_2表达的影响,探讨痛风宁对痛风性关节炎的抗炎机制。方法制备低、中、高剂量痛风宁含药血清。将THP-1随机分为空白组和MSU干预组,MSU干预组予200 mg/L MSU混悬液诱导12 h建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后采用随机数字表法分为模型组及低、中、高剂量痛风宁含药血清组(以下简称低、中、高剂量痛风宁组)、阳性对照组,分别予10%空白血清,10%低、中、高剂量痛风宁含药血清,10%空白血清+Caspase-1抑制剂干预,无MSU干预的空白组予10%空白血清干预。24 h后,离心收集各组THP-1及细胞上清液。采用ELISA检测各组细胞上清液中IL-1β、PGE_2含量,Western Blot、RT-qPCR分别检测各组THP-1中NALP3、Caspase-1、ASC蛋白及mRNA表达。结果与空白组比较,模型组NALP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达及IL-1β、PGE_2含量均升高(P<0.01);各剂量痛风宁组所有指标均低于模型组及阳性对照组(P<0.01),同时低、高剂量痛风宁组所有指标水平均高于中剂量痛风宁组(P<0.05,P<0.01);阳性对照组Caspase-1蛋白表达及IL-1β、PGE_2含量低于模型组(P<0.01),Caspase-1 mRNA、NALP3、ASC蛋白及mRNA表达与模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论痛风宁对AGA的抗炎机制可能与抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,减少炎症因子IL-1β、PGE_2的产生有关。

痛风宁含药血清对尿酸诱导HK-2中尿酸盐转运体的影响

目的:从肾脏尿酸盐转运体角度探讨痛风宁降低血尿酸的机制。方法:将人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为正常组,模型组,痛风宁低、中、高剂量组(7. 65,15. 3,30. 6 g·kg-1),苯溴马隆组(50μmo1·L-1),分别予不同培养液进行干预。于干预24 h后收集HK-2及上清液,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组HK-2中尿酸盐转运蛋白1(URAT1),葡萄糖转运体9(GLUT9),有机阴离子转运体1(OAT1),有机阴离子转运体3(OAT3)和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达显著升高(P <0. 01),ABCG2蛋白及mRNA表达显著下降(P <0. 01);与模型组比较,痛风宁各剂量组和苯溴马隆组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达均明显下降(P <0. 01),且痛风宁各剂量组优于苯溴马隆组,痛风宁各剂量组ABCG2蛋白及mRNA表达显著升高(P <0. 01);与痛风宁中剂量组比较,痛风宁低、高剂量组URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达明显升高,ABCG2蛋白及mRNA表达明显下降(P <0. 01)。OAT1和OAT3蛋白及mRNA于各组均无表达。结论:痛风宁可通过下调HK-2中URAT1,GLUT9蛋白及mRNA表达,上调ABCG2蛋白及mRNA表达,调节肾小管对尿酸的重吸收和分泌,促进尿酸在肾脏的排泄,降低血尿酸水平。提示对肾脏尿酸转运体蛋白的调节可能是痛风宁发挥利湿排浊功效而降低血尿酸的具体机制之一,OAT1和OAT3蛋白及mRNA在体外培养的HK-2中无表达。