尿酸钠诱导HUVEC损伤的急性痛风模型研究

目的:通过尿酸钠(MSU)体外直接刺激血管内皮细胞(HUVEC),促进胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,建立体外急性痛风细胞模型。方法:刺激组分别用终浓度为0、25、50、75、100(μg/mL)MSU处理HU-VEC24h、48h,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测HUVEC的ICAM-1表达。结果:24h时,随着MSU浓度的提高,HUVEC活力显著下降(P(0.01),同时细胞上清液中的ICAM-1表达提高;结论:100μg/mLMSU刺激HUVEC24h,造成急性痛风细胞模型。

不同品系大鼠痛风性关节炎模型制备的评价

目的大鼠痛风性关节炎模型(acute gouty arthritis,AGA)在实际研究中应用较多,但不同品系大鼠对尿酸钠晶体的反应性不同,会对成模效果产生一定的影响。文中对比Wistar大鼠和SD大鼠对尿酸钠结晶导致的AGA的敏感程度。方法将Wistar大鼠(32只)和SD大鼠(32只)按随机数表法分别分为空白组和模型组,每组16只。选踝关节后外侧后方为穿刺点,将100μL PBS溶液配制成的20 mg/mL的尿酸钠结晶溶液分别注入SD大鼠和Wistar大鼠右足踝关节造模,分别在造模后9 h和12 h各组按随机数字法抽取8只大鼠测量踝关节直径。麻醉后下腔静脉取血,检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度的变化。结果 Wistar大鼠造模后9 h和12 h模型组关节直径[(0.850±0.201)、(0.235±0.091)mm]较空白组同时间点[(0.080±0.053)、(0.092±0.068)mm]肿胀的差异有统计学意义(P=0.001,P=0.026),SD大鼠造模后9 h和12 h模型组关节直径[(1.128±0.623)、(0.748±0.545)mm]较空白组同时间点[(0.045±0.012)、(0.047±0.015)mm]明显肿胀的差异有统计学意义(P=0.013,P=0.042),2种品系大鼠造模前后关节直径变化差异有统计学意义(P<0.05),但造模后9 h与造模后12 h肿胀程度比较差异均无统计学意义(P>0.05);SD大鼠较Wistar大鼠关节肿胀程度更为明显,差异有统计学意义(P<0.05);且主要炎性因子TNF-α、IL-1β浓度也明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SD大鼠较Wistar大鼠对尿酸钠晶体导致关节炎症反应更为明显,更适合用于尿酸钠晶体导致的AGA的建立。

基于嘌呤能受体P2X7R的痛风性关节炎病理研究

目的 观察冰水泳浴对痛风大鼠模型病理变化的影响并探究其中P2X7R的调控机制。方法 雄性SD大鼠分为正常(NORM)组和实验组,实验组包括痛风对照(GC)组、冰水泳浴(IWS)组和亮蓝G(BBG,P2X7R拮抗剂)组。实验组大鼠通过尿酸酶抑制法联合Coderre法塑造高尿酸血症合并痛风性关节炎模型。冰水泳浴组大鼠在Coderre法造模后的0 h和12 h,分别于深约0.5 m的冰水混合物中进行5 min的耐力游泳,BBG组则在造模后立即腹腔注射BBG溶液1次。公式计算踝关节肿胀指数;尿酸酶法检测大鼠血清尿酸水平;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量;HE染色观察踝关节和滑膜组织的病理变化;Western blot和免疫组化分别检测滑膜组织中P2X7R和NLRP3蛋白表达。结果 与正常组相比,实验组大鼠血清尿酸水平及踝关节肿胀指数均显著升高(P<0.05或P<0.01),且滑膜组织均存在不同程度的炎性浸润。与痛风对照组相比,冰水泳浴组踝关节肿胀指数在12 h显著升高(P<0.05),血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量(P<0.01)及滑膜组织中P2X7R、NLRP3蛋白量均有显著表达(P<0.05);病理结果显示软骨表面破损,滑膜组织出现严重增生与糜烂,并伴有大量炎性细胞聚集。BBG组大鼠滑膜组织的P2X7R、NLRP3蛋白表达与病理损伤较痛风对照组无显著变化(P>0.05),而血清IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均有显著改善(P<0.01)。结论 冰水泳浴模拟的寒冷刺激和剧烈运动可加重痛风性关节炎的病理损伤,其机制可能与关节局部P2X7R的高表达有关。

蠲痹历节清方对痛风细胞模型中PPARγ、TLR4、NF-κB的影响

目的体外考察蠲痹历节清方抗痛风炎症作用及其分子机制。方法利用单钠尿酸盐(MSU)结晶诱导巨噬细胞建立体外痛风模型,用蠲痹历节清方(44 g·kg^-1)大鼠含药血清(10%),以及PPARγ激动剂吡格列酮20μmol·L^-1、NF-κB阻断剂SN5020μmol·L干预,酶联免疫法测定TNF-α、IL-1β、IL-6含量,RTPCR法与Western-Blot法分别检测PPARγ、TLR4基因转录及蛋白表达,免疫荧光法考察NF-κB核移位。结果与正常对照组比较,MSU诱导巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著增加(P<0.01),PPARγ基因转录与表达显著降低(P<0.01),TLR4基因转录与表达显著增加(P<0.01),NF-κB核移位。与模型组比较,蠲痹历节清方含药血清,可显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P<0.01),增加PPARγ基因转录与表达(P<0.01),降低TLR4基因转录与表达(P<0.01),阻止NF-κB核移位,其作用与吡格列酮相似。SN50对PPARγ无影响。结伦蠲痹历节清方可能部分通过上调巨噬细胞PPARγ,抑制TLR4/NF-κB信号通路,抑制痛风炎症反应。

电针治疗急性痛风性关节炎作用动物实验研究

目的:观察电针对家兔急性痛风性关节炎模型关节周径、组胺、5-羟色胺、白三烯及一氧化氮的影响,探讨电针治疗急性痛风性关节炎的作用机制。方法:将尿酸钠溶液注射于兔双膝关节急性痛风性关节炎动物模型,电针足三里、三阴交穴,比较各组间造模前、造模后及治疗后的关节周径,检测关节滑膜组织及滑膜液炎症介质组胺(HA)、5-羟色胺(5-HT)、白三烯(LTB4)和血管舒张因子一氧化氮(NO)含量。结果:与模型组比较,治疗组家兔关节周径显著减小(P<0.05),关节局部组胺(HA)、5-羟色胺(5-HT)、白三烯(LTB4)和血管舒张因子-氧化氮(NO)含量显著降低(P<0.01)。结论:电针对急性痛风性关节炎模型有抗炎消肿作用,能减小关节周径,能明显降低HA、5-HT、LTB4、NO含量。

清热除湿通络法对大鼠痛风性关节炎模型中NALP3炎性体表达的影响

目的:观察清热除湿通络法对大鼠痛风性关节炎模型中NALP3、Caspase-1、Pycard m RNA及NALP3、Caspase-1蛋白表达的影响。方法:将经典痛风性关节炎模型大鼠造模后采用随机数表法分为空白组、模型组、虎杖组及其各拆方组、吲哚美辛组和秋水仙碱组。造模12h后取材,随后运用RT-PCR技术检测大鼠气囊灌洗液中NALP3、Caspase-1、Pycard m RNA变化;Western blot法检测大鼠气囊灌洗液中NALP3、Caspase-1蛋白的变化。结果:以模型组为对照,虎杖组NALP3 m RNA相对表达下调,而其余组均上调;虎杖组Caspase-1 m RNA上调幅度小于其余组(除清热方组);虎杖组Pycard m RNA表达上调幅度低于其余组。虎杖组NALP3蛋白表达水平较模型组及其各拆方组、秋水仙碱组低(P<0.01,P<0.05);虎杖组Caspase-1蛋白表达量低于除湿方组、模型组(P<0.05,P<0.01)。结论:清热除湿通络法通过在蛋白质翻译层面下调NALP3、Caspase-1蛋白,干扰了NALP3炎性复合体的装配或激活,进而发挥了拮抗痛风炎性反应的作用。

蠲痹历节清方对改良痛风性关节模型大鼠滑膜的TLR4,NF-κB,PPARγ的影响

目的：观察蠲痹历节清方对改良痛风性关节炎大鼠滑膜组织中Toll样受体4（Toll-like receptors 4,TLR4）,核转录因子kappa B（nuclear factor-kappa B,NF-κB）,过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ）的影响,探讨蠲痹历节清方治疗急性痛风性关节炎局部组织炎症的可能作用机制。方法：将42只SD雄性大鼠,按随机数字表法选取6只为正常组,30只为造模组,造模组采用改良痛风性关节炎造模后随机分为模型组,蠲痹历节清方高、中、低剂量组（4 400,2 200,1 100 mg·kg^-1）,依托考昔组（11 mg·kg^-1）,吡格列酮组（20 mg·kg^-1）,每组6只。正常组及模型组的大鼠以生理盐水灌胃20 mL·kg^-1。每组每只大鼠每日灌胃给药2次,连续2 d后处死大鼠,取受试右踝关节,分离出滑膜组织,分为两部分,一部分用于病理形态学观察,一部分用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测TLR4,NF-κB p65,PPARγmRNA的表达水平,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测TLR4,NF-κB p65,PPARγ蛋白表达水平。结果：与正常组比较,模型组中TLR4和NF-κB mRNA和蛋白表达显著升高（P〈0.01）,PPARγmRNA和蛋白表达升高（P〈0.05）;与模型组比较,吡格列酮组及蠲痹历节清方高、中、低剂量组TLR4和NF-κB mRNA和蛋白的表达显著降低（P〈0.01）,PPARγmRNA和蛋白的表达显著升高（P〈0.05）。结论：蠲痹历节清方可能通过上调PPARγ表达,抑制TLR4,NF-κB表达从而抑制急性痛风性关节炎局部组织炎症。

不同浓度尿酸钠对大鼠滑膜细胞炎性因子的影响

背景:利用尿酸钠刺激滑膜细胞制备体外急性痛风性关节炎滑膜模型,在评价治疗这类疾病药物作用机制方面有重要意义。目的:通过不同浓度尿酸钠体外直接刺激滑膜细胞后滑膜细胞细胞因子的浓度变化,探讨急性痛风性关节炎滑膜模型制备条件。方法:培养大鼠滑膜细胞,分别添加终浓度为0(空白组),50,125,250,500,1000μmol/L的尿酸钠进行干预,于培养24,48h后测定细胞活力及培养液中细胞因子白细胞介素1β、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α的浓度。结果与结论:各组在24,48h内药物对细胞活力无影响。与空白组比较,尿酸钠干预组在24,48h培养液中细胞因子白细胞介素1β、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α浓度均提高,尿酸钠浓度为500μmol/L,给药时间为24h,培养液中各细胞因子浓度最高。说明利用一定浓度尿酸钠和刺激时间,便于筛选理想的急性痛风性关节炎体外模型。

蠲痹历节清方对痛风细胞模型中TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响

目的:研究蠲痹历节清方对痛风作用及对TLR4/NF-κB信号通路主要元件的影响。方法:实验分为两部分,①不添加TLR4受体抑制剂部分;②添加TLR4受体抑制剂部分。每部分利用单钠尿酸盐(MSU)结晶诱导巨噬细胞产生痛风模型,随机分正常对照组、模型组、蠲痹历节清方组,并分别干预。用Westen-blot法测定干预后巨噬细胞中髓样分化分子88(MyD88)、IκB激酶-β(IKK-β)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达,RT-PCR测定干预后各组巨噬细胞中Toll样受体4(TLR4)基因表达;免疫荧光法检测巨噬细胞核转录因子kappa B(NF-κB)核移位情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:不添加TLR4受体抑制剂部分:与正常对照组相比,模型组MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显升高;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高;IκB-α蛋白明显降低。与模型组比较,蠲痹历节清方组中MyD88蛋白、IKK-β、TLR4 mRNA表达含量明显降低;TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显降低;IκB-α蛋白含量明显升高。正常对照组血清组中NF-κB p65主要集中在细胞浆,细胞核中表达较少,模型组中NF-κB蛋白表达呈猩红色明显增强,主要集中在细胞核中,细胞浆中较少,表明NF-κB核移位明显;蠲痹历节清方组NF-κB主要在细胞浆中,细胞核中相对较少,未出现明显NF-κB核移位情况。同步使用通路阻断剂TAK-242(TLR4受体抑制剂)进行试验对照,上述通路及其上下游各分子(因子)水平均受到明显抑制。各组巨噬细胞NF-κB表达明显受到抑制。结论:蠲痹历节清方可改善痛风细胞模型炎症因子情况,抑制TLR4 mRNA及MyD88、IKK-β蛋白表达和上调IκB-α蛋白表达、抑制NF-κB活化作用,因此推测蠲痹历节清方治疗急性痛风性关节炎局部组织炎症的部分作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路表达有关,可能是以通路中MyD88依赖性信号转导经典途径。

基于痛风病临床病症特点的动物模型分析

该文宗旨为中医药治疗痛风病的研究提供可靠的实验方法。基于痛风病的临床病症特点,分析目前常用的痛风动物模型,探讨现有痛风动物模型与临床病症的吻合情况及应用前景。目前对痛风的研究主要采用高尿酸血症模型、痛风性急性关节炎模型、痛风性肾病模型3类模型方法,痛风病的造模方法较多,但缺少能反映痛风病临床病症特点、体现痛风病中医病因的动物模型复制,与临床病症仍存在一定差距。该文总结了高尿酸血症模型、痛风性急性关节炎模型、痛风性肾病模型3类模型的特点及造模方法,比对临床相关症状及标准,对现有动物模型与临床病症的吻合情况进行分析探讨,进而提出相应动物模型的评价及改进方法。

急性痛风性关节炎大鼠血尿酸、IL-4含量的变化研究

目的检测急性痛风性关节炎大鼠血尿酸、IL-4含量的变化,以期探讨其变化规律。方法分别采用次黄嘌呤、氧嗪酸、尿酸钠腹腔及踝关节注射进行大鼠痛风性关节炎模型制作。于造模后1 h观察大鼠右踝关节肿胀度,并于1 h、24 h眼眶静脉丛采血,采用全自动生化分析仪测定血液中尿酸、酶联免疫法检测IL-4含量,并观察各组变化。结果次黄嘌呤组、氧嗪酸组、尿酸钠组的1 h、24 h的血尿酸、IL-4含量与模型对照组及空白组比较明显增高,差异具有统计学意义(P<0.01)。次黄嘌呤组的1 h血尿酸、氧嗪酸组24 h血尿酸明显高于空白组及模型对照组,具有高度显著性差异(P<0.01)。次黄嘌呤组的1 h IL-4及24 h IL-4明显高于空白组及模型对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论造模后大鼠踝关节肿胀度、步态、血尿酸、IL-4均比空白组和模型对照组高,提示所致的急性关节炎模型成功。次黄嘌呤致急性关节炎具有优势。

加味竹叶石膏汤的抗炎作用及机制分析

目的:研究加味竹叶石膏汤抗炎作用,揭示其作用的机制,阐明吴氏学派治疗痛风(湿热蕴结)临床中药优效的科学基础。方法:C57BL/6小鼠120只,每50只分别采用尿酸钠结晶复制C57BL/6小鼠腹膜炎模型和痛风性关节炎模型;2组模型均随机分组为加味竹叶石膏汤高、中、低剂量组(11.48,5.74,2.87 g·kg-1),阳性药秋水仙碱组(0.65 mg·kg-1),模型组,另设正常组,每组10只。经药物干预后,采集血清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测2组模型组内不同组别血清白细胞介素-1β(IL-1β),半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase-1)水平,观察对小鼠急性炎症反应的影响。痛风性关节炎模型造模后6 h,进行关节炎症评分;48 h后取关节组织(滑膜、软骨与骨),石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色分析小鼠关节炎病理损伤程度。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中IL-1β,Caspase-1水平明显升高(P<0.01),模型组炎症浸润较明显,关节炎症状较明显;与模型组比较,加味竹叶石膏汤高、中、低剂量组均明显降低小鼠血清中IL-1β,Caspase-1水平(P<0.05,P<0.01);同时明显减轻炎症细胞浸润,改善小鼠关节炎症状。结论:加味竹叶石膏汤具有一定的抗炎作用,其作用机制与抑制炎症细胞因子IL-1β,Caspase-1产生有关。

Exploring the evolution of animal models for gout and hyperuricemia:A bibliometric analysis

This study aimed to systematically analyze the research status and trends in animal models for gout and hyperuricemia(HUA)through a bibliometric approach.We retrieved relevant literature on animal models of gout and HUA from the Web of Science(WOS)database.Utilizing analysis software such as Citespace and VOSviewer,we conducted a comprehensive examination of annual publication trends,contributing countries,institutions,and authors.Our analysis revealed a steady increase in the number of publications in this field.China emerged as the leading country,with 113 publications.Zhen Liu was identified as the most influential author,while Nanjing University stood out as the most influential institution.Keyword analysis elucidated current focal points,uncovering evolving patterns and emerging hotspots within the research landscape.Current research predominantly centered on understanding the pathogenesis and exploring new treatment modalities for gout and HUA.This study offered valuable insights into research trends and hotspots related to animal models for gout and HUA,enabling researchers to stay informed about the latest developments in this field.