节律基因Period2在人卵巢上皮性癌组织中表达的意义及在裸鼠移植瘤组织中过度表达对移植瘤生长的作用

目的探讨节律基因Period2在卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者癌组织中表达的意义，并探讨Period2基因在裸鼠移植瘤组织中过度表达对移植瘤生长的作用及可能机制。方法选择2010年1月至2013年12月山西医科大学第一医院存档的卵巢癌石蜡标本22份（卵巢癌组），其中Ⅰ期8份、Ⅱ期8份、Ⅲ期6份，另选取同期卵巢良性上皮性肿瘤石蜡标本6份（良性肿瘤组），采用实时定量PCR技术和蛋白印迹（westernblot）法分别检测两组患者肿瘤组织中Period2mRNA和蛋白的表达。使用卵巢癌细胞株SKOV3细胞构建卵巢癌裸鼠移植瘤模型，实验分为3组，即重组质粒组、空质粒组、对照组，每组8只裸鼠；利用基因转染技术转染Period2基因，采用实时定量PCR技术检测转染后3组裸鼠移植瘤组织中Period2mRNA的表达，监测裸鼠移植瘤的生长情况，并计算其抑瘤率；采用实时定量PCR技术和westernblot法分别检测转染后3组裸鼠移植瘤组织中抗凋亡基因BRE、促凋亡基因TNFR1、抑癌基因NIXmRNA和蛋白的表达。结果（1）患者肿瘤组织中Period2mRNA的表达水平，卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为2．59±0．50、0．47±0．08、0．42±0．08，良性肿瘤组为6．59±1．05；患者肿瘤组织中Period2蛋白的表达水平，卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为0．835±0．087、0．412±0．035、0．199±0．031，良性肿瘤组为0．874±0．094。除良性肿瘤组Period2蛋白与Ⅰ期卵巢癌比较差异无统计学意义（p〉0．05）外，良性肿瘤组Period2mRNA和蛋白的表达水平均明显高于卵巢癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期（P〈0．01）；且随着卵巢癌期别的升高，Period2mRNA和蛋白的表达水平明显降低（P〈0．05）。（2）转染后2周，重组质粒组裸鼠移植瘤组织中Period2mRNA的表达水平为6．11±0．56，明显高于空质粒组、对照组（分别为0．50±0．09、0．44±0．08；P〈0．01）；重组质粒组移植瘤体积为（486±70）mm3，明显小于空质粒组、对照组[分别为（835±106）、（846±110）mm3；P〈0．01]；重组质粒组抑瘤率高达42．9％，明显高于空质粒组、对照组（分别为3．8％和0；P〈0．05）。（3）重组质粒组移植瘤组织中BREmRNA和蛋白的表达水平分别为0．48±0．16、0．432±0．010，均明显低于空质粒组（分别为12．69±0．86、0．730±0．019）、对照组（分别为13．48±0．98、0．703±0．022；P〈0．05），TNFR1、NIXmRNA和蛋白的表达水平均明显高于空质粒组、对照组（P〈0．05）。结论晚期卵巢癌组织中Period2mRNA和蛋白表达缺失。转染并稳定表达Period2基因后可使卵巢癌细胞的生长速度减慢，抑瘤率明显提高。Period2基因可能通过抑制BRE基因，促进TNFR1、NIX基因的表达而促进卵巢癌细胞的凋亡，从而发挥抑瘤作用。