瘦素受体基因rs1137101位点多态性与老年人群代谢相关脂肪性肝病发生风险的关系研究

目的探讨瘦素受体(LEPR)基因rs1137101位点多态性与老年人代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)发病风险的关系。方法2020年1月—2021年9月于北京市门头沟社区招募健康体检的1019例老年志愿者,其中MAFLD组569例、非MAFLD组450例。记录受试者的临床资料,基因芯片法检测LEPR-rs1137101多态性基因分型。Logistic回归分析评估基因多态性与MAFLD发生的关系。结果老年人群MAFLD患者携带rs1137101 G>A多态性较非MAFLD患者多(36.91%vs 24.00%,P<0.05)。携带LEPR-rs1137101 A等位基因与MAFLD的发生风险增加有关(OR=1.695,95%CI:1.1402.520,P<0.05)。结论老年人群LEPR-rs1137101 A基因可能与MAFLD的发生有关。

瘦素受体基因Gln223Arg单核苷酸多态性与精液质量参数的相关性研究

目的探讨瘦素受体(LEPR)基因Gln223Arg单核苷酸多态性与精液质量参数的相关性。方法选取2021年1月至12月在甘肃省妇幼保健院进行育前检查的肥胖男性156人作为观察组,另选取非肥胖男性150人作为对照组。检测LEPR基因Gln223Arg基因型,分析LEPR基因Gln223Arg多态性在两组间的分布及差异,分析基因型与精液质量各参数变化的相互关系。结果G/G型基因携带人群较A/A、A/G型携带人群发生精子密度、活力、畸形率、DFI异常的风险分别提高了1.21、2.36、1.68、1.85倍。结论LEPR基因Gln223Arg多态性可能造成男性发生肥胖的风险增加,G型等位基因较A型等位基因可能更容易造成精子质量异常的发生。

基于下丘脑瘦素受体介导的JAK2/STAT3通路探讨穴位埋线治疗食源性肥胖大鼠的中枢机制

【目的】观察穴位埋线对食源性肥胖(DIO)大鼠体质量、脂代谢、血清瘦素和下丘脑瘦素受体(LepR)介导的Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路mRNA及蛋白表达的影响。【方法】将40只雄性SD大鼠随机分成正常组10只和造模组30只。采用高脂饮食诱导建立DIO大鼠模型。造模成功后将成模大鼠随机分为模型组、埋线组和埋线+AG490(JAK2/STAT3通路阻断剂)组,每组10只。埋线组、埋线+AG490组于造模成功后第1、8、15、22天进行埋线,穴位选取中脘、水道、天枢、脾俞、胃俞、三焦俞,共治疗4次,埋线+AG490组穴位埋线治疗期间每天腹腔注射AG4901 mg/kg;正常组和模型组仅抓取固定。治疗前后测量体质量。治疗后检测脂代谢指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)以及血清瘦素水平,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测下丘脑LepR、JAK2、STAT3的mRNA表达,Western Blot法检测下丘脑LepR、JAK2、STAT3的蛋白表达。【结果】治疗前,与正常组比较,模型组、埋线组、埋线+AG490组体质量均升高(P<0.01),与模型组比较,埋线组、埋线+AG490组体质量无显著性差异(P>0.05)。治疗后,与正常组比较,模型组体质量,瘦素及TG、TC、LDL-C水平升高,LepR、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达水平降低(均P<0.01);与模型组比较,埋线组体质量,瘦素及TG、TC、LDL-C水平降低,LepR、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平升高(均P<0.01);与埋线+AG490组比较,埋线组体质量,瘦素及TG、TC、LDL-C水平降低,LepR、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平升高(P<0.05或P<0.01)。【结论】穴位埋线对DIO大鼠具有良好的减重降脂作用,其中枢机制可能与下调血清瘦素水平,激活下丘脑LepR介导的JAK2/STAT3通路有关。

瘦素受体基因敲除SD大鼠的表型及病理观察

目的观察CRISPR/Cas9技术建立的肥胖、代谢综合征和糖尿病前期特征的瘦素受体基因敲除大鼠模型的多种参数,为代谢性疾病的分子机制研究和新药研发提供更为理想的动物模型。方法1)定期测定Lepr^-/-大鼠的体重、摄食量、随机血糖和空腹血糖;葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验;血清血脂参数;2)观察14周和18周Lepr^-/-大鼠主要脏器的病理学改变;3)观察脏器脂质沉积情况。结果Lepr^-/-大鼠表现明显肥胖、高摄食量、葡萄糖耐量受损、胰岛素抵抗和血脂异常;14周和18周出现胰岛增生和心脏肌细胞肥大、脂肪肝、肥胖相关性肾病;肝细胞、肾小管上皮细胞和骨骼肌纤维内脂质沉积。结论Lepr^-/-大鼠是代谢性疾病的病因研究和新药研发的理想动物模型。

瘦素对肥胖小鼠下丘脑神经元活性及脂肪组织代谢的影响

目的探讨瘦素对肥胖小鼠下丘脑神经元活性的影响,以及对脂肪组织脂质代谢的作用。方法选取10只瘦素基因纯合突变(ob/ob)小鼠和同窝出生的10只野生型(WT)小鼠作为研究对象,随机分为对照组和瘦素治疗组。通过免疫荧光染色、HE染色和Real-time PCR分析小鼠阿黑皮质素原(POMC)神经元和酪氨酸羟化酶(TH)神经元活性、脂肪组织形态变化及脂质相关基因的表达。结果与WT小鼠相比,ob/ob小鼠POMC神经元和TH;+;神经元活性显著降低,脂肪组织和肝脏组织细胞直径明显增大,皮下白色脂肪中产热相关基因解耦联蛋白1(UCP1)、细胞色素C氧化酶亚基8b(Cox8b)和细胞死亡激活剂CIDE-A(Cidea)的表达显著降低,脂质合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1(Srebp1)和脂肪酸合酶(Fas)的表达显著升高;瘦素治疗后,WT和ob/ob小鼠POMC神经元和TH;+;神经元活性增加,ob/ob小鼠脂肪组织和肝脏组织细胞直径明显减小,空泡变性程度降低,褐色脂肪组织产热相关基因和脂解相关基因的表达显著升高,脂质合成相关基因的表达显著降低。结论瘦素通过激活ob/ob小鼠下丘脑POMC神经元和外周脂肪组织交感神经系统,抑制食物摄入,增加脂肪降解并降低脂质合成作用,从而改善脂肪白色化并抑制肥胖的发展。

针刺对肥胖大鼠瘦素水平和瘦素受体基因表达的作用

目的 :探讨针刺减肥的细胞分子作用机制。方法 :采用RT PCR技术测定瘦素受体 (OB R)基因表达水平 ,放射免疫分析测定血清和下丘脑中瘦素 (Leptin)和胰岛素 (INS)的含量 ,观察针刺治疗前后肥胖大鼠体重、李氏 (Lee s)指数、体脂、血清和下丘脑中瘦素和INS的含量以及下丘脑OB R基因表达的变化。结果 :肥胖的大鼠体重、Lee s指数、体脂及血清瘦素和INS水平均显著高于正常大鼠 ,而下丘脑瘦素和INS水平及OB R基因表达水平均明显低于正常大鼠。针刺治疗取得良好减肥疗效的同时 ,肥胖大鼠血清瘦素和INS均明显回降 ,而下丘脑瘦素和INS水平以及OB R基因表达水平却明显升高。结论 :针刺对肥胖机体中枢和外周瘦素和INS水平的良性调整作用以及促进下丘脑OB R基因表达可能是针刺减肥的细胞分子重要机制。

STZ糖尿病大鼠心肌短型瘦素受体基因的转录表达及心脏纤维化观察

目的 研究瘦素受体在STZ糖尿病大鼠心肌中转录表达及心脏的纤维化情况。方法 用STZ制备糖尿病大鼠模型 ,在病程 12周时测定大鼠血压和心功能后处死 ,取心肌组织和分离、培养心脏成纤维细胞 ,用RT PCR检测长、短型瘦素受体mRNA转录表达 ,PCR产物测序 ,电镜观察心肌的超微结构。血清瘦素、胰岛素放射免疫测定。结果 STZ糖尿病大鼠和对照鼠心肌均可转录表达短型瘦素受体mRNA ,两组之间无显著差别 ,但糖尿病心肌成纤维细胞短型瘦素受体mRNA表达较高 ,伴心功能减退和显著的心脏纤维化病理改变。结论 糖尿病大鼠心脏成纤维细胞短型瘦素受体表达增加与心脏纤维化并存。

针刺对2型糖尿病大鼠弓状核瘦素受体基因的影响

目的探讨瘦素与弓状核瘦素受体(OB-R)基因表达和2型糖尿病(T2DM)的关系以及针刺对T2DM机体瘦素水平和弓状核OB-R基因表达的影响。方法给食源性肥胖大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)造成T2DM模型,随机分为针刺组、优降糖组和模型组。处理4周后,用快速血糖仪检测空腹血糖(FBS),用放免法检测空腹胰岛素(FINS),用ELISA法检测空腹瘦素(FLP),用原位杂交检测弓状核OB-RmRNA表达,测量治疗前后大鼠的身长、体重,计算Lee's指数,并且与正常组比较。结果模型组FBS、FINS高于正常组(P<0.05);治疗后,针刺组FBS、FINS明显下降(P<0.01),接近正常组水平;优降糖组FBS明显下降(P<0.01),FINS有所下降(P<0.05)。模型组FLP低于正常组(P<0.05)和优降糖组(P<0.01);优降糖组FLP高于正常组和针刺组(P<0.05)。模型组体重和Lee'S指数下降明显,针刺组、优降糖组体重和Lee's指数有所下降,接近正常组水平。模型组弓状核OB-R基因表达与正常组、针刺组、优降糖组无显著差异(均P>0.05),优降糖组弓状核OB-R基因表达明显低于正常组(P<0.05),针刺组弓状核OB-R基因表达和正常组无显著性差异(P>0.05)。结论T2DM大鼠模型明显消瘦后出现血清瘦素水平下降,优降糖组存在明显的瘦素抵抗,针刺可以在一定程度上改善弓状核OB-R基因表达。

运动对糖尿病大鼠瘦素受体基因水平与功能的影响

目的 :中小强度运动对糖尿病大鼠瘦素受体的蛋白和 RNA水平的影响 ,探讨运动改善糖尿病大鼠代谢紊乱的可能机理。方法 :40只 SD大鼠分为 4组 :糖尿病非运动组 ,糖尿病运动组 ,正常非运动组和正常运动组。运动组进行12周的中小强度跑步训练。 Western印迹法检测大鼠肝脏 ,骨骼肌和胰腺组织瘦素受体的含量。 RT- PCR检测肝脏 ,骨骼肌和胰腺组织的瘦素受体 RNA水平。结果 :(1)糖尿病大鼠血糖较正常对照大鼠显著升高 (P<0 .0 5 ) ,血清胰岛素和瘦素 (L eptin)水平明显下降 (P<0 .0 5 )。(2 )糖尿病运动组大鼠经 12周跑步训练后 ,血糖浓度显著下降 (P<0 .0 5 ) ,血胰岛素浓度显著升高 (P<0 .0 5 ) ,血浆瘦素 (L eptin)水平相应显著上升 (P<0 .0 5 ) ;(3)糖尿病大鼠肝脏 ,骨骼肌和胰腺组织瘦素受体的蛋白含量和 RNA水平有不同程度的显著下降 (P<0 .0 5 ) ,12周运动后各组织的瘦素受体的蛋白含量和 m RNA水平显著增加 (P<0 .0 5 )。结论 :运动通过对瘦素受体基因水平和蛋白功能的影响介导胰岛素分泌和代谢作用的改善 。

游离脂肪酸对大鼠肝细胞瘦素受体基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化的影响

目的 :探讨游离脂肪酸 (FFA)是否会对大鼠肝细胞瘦素 (leptin)受体的基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化产生一定的影响。 方法 :分离、培养新生Sprague Dawley大鼠肝细胞 ,分别与软脂酸 (0 .2 5mmol/L)或油酸 (0 .12 5mmol/L)孵育 12、2 4和 36h ,提取蛋白后用Western印迹法检测瘦素受体的蛋白水平。用RT PCR检测肝细胞内瘦素受体RNA含量的变化。应用免疫沉淀法检测瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度。 结果 :软脂酸和油酸孵育后大鼠肝细胞瘦素受体的蛋白表达水平在孵育 12和 2 4h后无显著变化 ,在孵育 36h后显著下调 (P <0 .0 5 ) ;瘦素受体的RNA水平在孵育 12h后无显著变化 ,孵育 2 4和 36h后显著下调 (P <0 .0 5 ) ;瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度在孵育 12h后无显著变化 ,孵育 2 4和 36h后显著下调 (P <0 .0 5 )。 结论 :FFA可对大鼠肝细胞瘦素受体的基因、蛋白表达水平及磷酸化程度产生一定的抑制作用 ,这可能是FFA导致胰岛素抵抗的机制之一。

不同电针频率对肥胖大鼠下丘脑瘦素受体和胰岛素受体基因表达的影响

目的通过比较不同电针频率刺激对肥胖大鼠体质量,脂肪量,下丘脑瘦素受体和胰岛素受体基因表达的影响,探讨不同电针频率的效应差异。方法随机挑选10只普通饲料喂养为正常组;另一组80只高脂致肥饲料喂养,将造模成功的肥胖大鼠40只随机分为肥胖模型组和针刺组(2 Hz,2/15 Hz,15Hz),每组各10只。采用实时定量PCR技术测定下丘脑瘦素受体(LR)和胰岛素受体(IR)基因表达水平。结果 不同频率电针治疗均可降低肥胖大鼠的体重和脂肪量,下丘脑组织中LR与IR较模型组均上升。其中高频组电针组优于低频电针组,2/15 Hz频率疗效优于高频与低频电针组。结论 不同电针频率刺激肥胖大鼠,可能通过减少脂肪量和提高下丘脑瘦素受体与胰岛素受体,达到减肥效应,且2/15 Hz频率疗效优于高频与低频电针组。

瘦素基因敲除肥胖大鼠的血糖及病理长期观察

目的：对Leptin基因敲除SD大鼠血糖变化及病理表型进行长期分析，为使用该大鼠作为糖尿病和脂代谢模型积累数据。方法 western blot检测Leptin＋/＋大鼠和Leptin-/-大鼠肝脏中Leptin的表达。利用称量方法测定Leptin基因敲除的SD大鼠（Leptin-/-）1，3，6，8月龄的体重变化，利用稳豪血糖仪采尾血测定1，3，6，8月龄Leptin-/-大鼠空腹血糖值。 HE染色和免疫组织化学观察Leptin-/-大鼠胰腺及肝脏的病理学变化。结果 Leptin-/-大鼠肝脏中表达变短的功能异常的Leptin蛋白。 Leptin-/-大鼠从1月龄开始出现显著的体重增加，8月龄时雌性体重为884 g，雄性体重可以达到1200 g，是野生SD大鼠的2倍。自1月龄起， Leptin-/-雌鼠的空腹血糖值显著高于野生大鼠，在1月龄到6月龄之间差别明显（40％～26％），到8月龄和野生大鼠恢复到近正常水平。8月龄Leptin-/-大鼠肝脏肝小叶中出现大量脂肪空泡，胰腺内较多脂肪细胞浸润、胰岛数量明显增多，体积增大，胰岛素阳性β细胞增多。结论 Leptin-/-大鼠表型表现为肥胖，脂肪肝，胰岛增生和早期高血糖。

运动对饮食性肥胖大鼠脂肪细胞瘦素受体基因表达的影响

目的:肥胖常伴有高瘦素、低瘦素受体(OB-R)水平。探讨耐力训练对脂肪细胞OB-R基因表达的影响,为肥胖相关课题研究提供实验依据。方法:32只实验用刚断乳雄性SD大鼠随机分组:正常对照组(NC)8只喂以标准饲料,高脂组(HD)喂以高脂饲料。10周后,高脂组随机分为3组:肥胖对照组(OC)、肥胖不限制饮食+运动组(OE)、肥胖限制饮食+运动组(OEd),各8只,然后对OE和OEd组进行8周的游泳训练。RT-PCR法检测脂肪细胞和肝脏组织的瘦素受体RNA水平,放免法检测血清胰岛素。结果:1)肥胖对照组大鼠胰岛素与正常对照组相比升高极其显著,P<0.001;不限制饮食运动组大鼠胰岛素水平仍显著高于正常对照组,P<0.01,但有下降趋势。2)经8周游泳训练后,限制饮食运动组大鼠胰岛素水平显著低于肥胖对照组,P<0.01。3)肥胖对照组大鼠脂肪细胞瘦素受体的RNA水平明显下降,基因表达扫描亮度明显变暗。8周游泳训练后,脂肪细胞瘦素受体RNA相对含量明显增加,扫描亮度明显增强。结论:耐力训练上调脂肪细胞OB-R基因表达,与Leptin结合量提高,直接作用于脂肪组织,促进脂肪分解代谢;明显缓解肥胖高胰岛素血症,结合饮食控制效果更好。

利用TALENs技术制备瘦素基因敲除的大鼠

目的瘦素(leptin)是一种调节机体摄食和能量代谢的细胞因子,也参与神经细胞发育、免疫、糖脂代谢等,由于大鼠在代谢和神经研究等方面的优点,研制leptin基因敲除大鼠(leptin-/-),为这几方面的深入研究提供模型。方法利用类转录激活因子效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,TALENs)技术,制备leptin-/-大鼠。利用称量方法测定不同时间点的体重变化,利用磁共振成像观测大鼠脂肪积累及分布,利用病理学方法观察胰腺的病理变化,并进行血生化、腹腔糖耐受实验及葡萄糖刺激下的血清胰岛素含量测定。结果获得一个在leptin基因编码区418～425位有8个碱基缺失的首建鼠,由于产生了TGA终止密码子,使该蛋白C末端缺失了28个氨基酸。Leptin-/-大鼠从5周龄开始出现显著的体重增加,到4月龄时体重比野生SD大鼠(leptin+/+)增加了52%。2月龄MRI结果显示leptin-/-大鼠与leptin+/+大鼠相比,在腹腔和皮下均有更多的脂肪积累,同时病理观察也发现leptin-/-大鼠胰腺中胰岛细胞显著增生。4月龄时,leptin-/-大鼠的血清中甘油三酯和胆固醇含量分别是leptin+/+大鼠的8.4倍和1.8倍,同时出现了明显的糖耐受受损和高胰岛素血症。结论利用TALENs技术成功建立了瘦素基因敲除大鼠,并表现出明显的肥胖、高胰岛素血、高脂血和糖代谢异常。结果表明:该敲除大鼠可作为代谢、神经、免疫等研究的潜在模型。

瘦素、瘦素受体水平及基因多态性与川崎病的关联研究

目的探讨瘦素(LEP)及瘦素受体(LEPR)水平在川崎病(KD)患儿中的变化及临床意义,分析LEP基因rs2167270、LEPR基因rs1137100多态性与川崎病易感性之间的关系。方法选取53例汉族川崎病患儿为实验组,年龄6个月~5岁;选取同期行健康体检的53例汉族儿童为对照组。运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)分析各组LEP基因rs2167270、LEPR基因rs1137100多态性。结果实验组中发热53例(100.0%),皮疹40例(75.5%),非化脓性眼结合膜充血48例(90.6%),口腔黏膜充血29例(54.7%),非化脓性淋巴结肿大46例(86.8%),手足硬肿32例(60.4%),指趾端脱皮20例(37.7%),肛周脱皮14例(26.4%),冠状动脉扩张4例(7.5%)。实验组LEP水平为(0.290±0.055)ng/ml,高于对照组的(0.209±0.039)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组LEPR水平为(10.951±2.530)ng/ml,高于对照组的(7.238±1.780)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。LEP基因rs2167270位点的多态性表现为G突变为A,基因型为AA、GA、GG。LEPR基因rs1137100位点多态性表现为A突变为G,基因型为AA、AG、GG。实验组LEP基因rs2167270位点GG、GA、AA基因型分布分别为32、18、3例;对照组分别为34、7、12例。两组LEP基因rs2167270位点GG、GA、AA基因型分布比较差异有统计学意义(P<0.05);G、A等位基因分布比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组LEPR基因rs1137100位点AA、AG、GG基因型分布及A、G等位基因分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论LEP、LEPR水平可能有助于监测川崎病病程;LEP基因rs2167270位点多态性与川崎病发病有关,携带AA基因型可能使川崎病发病率降低,而GA基因型可能使川崎病发病率增高;LEPR基因rs1137100位点多态性与川崎病发病无关。

葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体基因敲除小鼠不同部位骨密度的动态改变

【目的】观察葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)受体基因敲除小鼠(GIPR-/-小鼠)不同部位骨密度的动态改变。【方法】用双能X线吸收仪(DEXA)测定不同月龄(1月龄、3月龄和5月龄)的雌性GIPR-/-小鼠和野生型对照C57BL/6小鼠不同部位(全身、股骨和腰椎)的骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)和骨骼面积。【结果】1月龄、3月龄和5月龄GIPR-/-小鼠的全身BMD、BMC和骨骼面积以及1月龄和3月龄GIPR-/-小鼠的股骨BMD均低于对照小鼠相应值,而1月龄GIPR-/-小鼠的腰椎BMD则高于对照小鼠相应值(P均<0.05)。5月龄与3月龄相比,GIPR-/-小鼠上述部位的BMD、BMC和骨骼面积无显著变化,而在对照小鼠仍有明显增加(P均<0.05)。【结论】与对照小鼠相比,GIPR-/-小鼠的BMD、BMC和骨骼面积均有明显改变,并与部位和月龄相关,提示GIP对小鼠骨转换有一定的作用。进一步提示在营养物的获得和骨代谢之间,除甲状旁腺激素-维生素D轴外,还存在着“肠-骨轴”,即肠道与营养代谢相关激素对骨代谢也有一定的调节作用。

肾脏D_5多巴胺受体高表达参与了血管紧张素Ⅱ1型受体基因敲除小鼠低血压的发生

目的肾脏血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的保钠潴水功能部分可以解释AT1R基因敲除(AT1A-/-)小鼠血压降低的原因,然而,对于是否有AT1R以外的机制参与则研究较少。既往的研究间接提示D5多巴胺受体和AT1R之间存在相互抑制作用,因而在本实验中,将验证D5受体的因素是否参与AT1A-/-小鼠低血压的发生。方法在比较AT1A-/-小鼠和其对照(AT1A+/+)小鼠血压、尿钠排泄、肾脏D5受体表达的基础上,利用Wistar-Kyoto(WKY)大鼠的肾近曲小管(RPT)细胞株和D5受体转染HEK293细胞为研究对象,研究AT1R和D5受体之间的交互影响,探讨AT1A-/-小鼠血压降低的原因。结果与AT1A+/+小鼠相比,低盐饮食的状况下AT1A-/-小鼠血压较低、尿钠排泄能力增强,肾脏D5受体表达量增加。在WKY大鼠肾近曲小管的细胞上,刺激AT1R可特异地抑制D5受体的表达;反过来,刺激D5受体转染HEK293细胞的D5受体也可抑制AT1R的表达。结论D5受体的高表达可能参与了AT1A-/-小鼠血压降低的发生机制。

激动β_3肾上腺素受体对载脂蛋白E基因敲除小鼠肺脏血管紧张素受体表达的影响

目的探讨激动β3肾上腺素受体(β3-AR)对载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)老年高脂小鼠肺脏血管紧张素受体(ATR)表达的影响。方法野生型C57BL/6J小鼠10只作为对照组,apoE-/-老年高脂小鼠40只随机分为高脂模型组、β3-AR激动剂小剂量组(小剂量组)、β3-AR激动剂大剂量组(大剂量组)和β3-AR拮抗剂组(拮抗剂组),每组10只。给予高脂饮食饲养至36周龄后分别给予药物干预12周。采用全自动生化分析仪检测TC和VLDL/LDL-C水平,实时定量PCR或Western blot测定肺组织β3-AR、AT1R和AT2R的mRNA及蛋白表达水平。结果与高脂模型组比较,小剂量组、大剂量组TC和VLDL/LDL-C水平明显降低[(18.27±1.30)mmol/L,(17.06±1.50)mmol/L vs(22.20±1.29)mmol/L和(14.31±0.31)mmol/L,(12.78±0.55)mmol/L vs(19.41±0.40)mmol/L,P<0.01]。与对照组比较,高脂模型组和拮抗剂组AT1R mRNA和AT1R蛋白水平明显升高,AT2R mRNA、β3-AR蛋白水平明显降低(P<0.05)。与高脂模型组比较,小剂量组和大剂量组AT1R表达下调,AT2R和β3-AR表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论β3-AR激动剂在改善apoE-/-老年高脂小鼠血脂代谢紊乱的同时,影响了肺组织β3-AR和ATR各亚型表达,这种受体间交互作用可能与维持高脂血症条件下肺脏的正常功能有关。

瘦素(Leptin)受体基因敲除小鼠繁育及子代小鼠基因型鉴定

将瘦素(Leptin,LP)受体基因杂合型小鼠按4种方式进行配对,从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,用PCR方法扩增LP受体基因片段,琼脂糖凝胶电泳后观察。结果表明,LP+/+、LP+/-、LP-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌、雄性LP-/-小鼠(即DB/DB小鼠)无繁殖能力。雌、雄性LP+/-小鼠交配能高效地繁殖LP-/-小鼠;PCR方法能够精确地鉴定LP-/-小鼠。