浙江地区肺腺癌患者EGFR和K-ras基因突变及临床表现研究

目的探讨浙江地区肺腺癌患者中EGFR和K—ras基因的突变情况。方法微分离富集肿瘤细胞，采用QIAGENDNA提取试剂盒提取基因组DNA，通过PCR扩增及DNA测序技术（Sanger测序法）分析肺腺癌患者EGFR和K—ras基因突变情况。结果54例肺腺癌患者中有20例（37．0％］存在EGFR基因突变。其中外显子19突变14例（25．9％）；外显子21突变6例（11．1％）。未检测到外显子18和20突变。K—ras突变1例（2％）。外显子19男性患者的突变率为29-2％（7／24）。女性为23．3％（7／30）：两者差异无统计学意义［P〉0．05）；外显子21男性患者的突变率为4％（1／24）。女性为16-7％（5／30），两者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论浙江地区肺腺癌患者中，男性和女性的突变率无明显差异；EGFR基因的突变以外显子19的缺失突变最常见；K—ras突变较为罕见。

镉处理前后成纤维细胞变异差异分析

目的在环境中存在着很多化合物可以引起变异,对于环境的变异原活性的高感度的方法研究是必要的。例如,应用镉对于人体成纤维细胞的致死毒性和变异活性的详细研究报告很少。因此本研究应用紫外线可以检测出的人体细胞变异,用镉处理的重金属镉的变异活性高感度方法能够检测出来,并且活性的特异点进行解明。方法使用培养的人体细胞RSa和派生株。变异原活性的检测应用OuaR(ouabain resistancn)变异原的检出法和癌遗传因子K-ras的盐基置换的变异的differential dot-blot hybridization检测方法。为了变异诱导的频度的检测,进行了MTT(methyl thiazolyl tetrazoliun)法和生存形成率的测定。变异原活性的机制的解明还应用了Western blot法和siRNA方法对热休克蛋白质进行了解析。结果应用镉的变异原活性的盐基置换变异的检出和紫外线程度相同。DNA伤害对应着热休克蛋白(HSP)27蛋白质的细胞内的变化,同样变异频度也出现了高的数值。结论HSP27蛋白高表达的UVr-1细胞比RSa细胞OuaR变异频率要低。用K-ras dot blot方法证明了RSa细胞具有比UVr-1细胞的变异要高。siHSP27细胞观察到OuaR变异的高表达变化以及镉对DNA损伤表现出UVr-1成纤维细胞小于RSa成纤维细胞。