P65、survivin、bcl-2与PARP蛋白在非小细胞肺癌中的表达及相关性

目的探讨人非小细胞肺癌(NSCLC)中P65与凋亡相关蛋白survivin、bcl-2和聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)蛋白的相关性。方法采用免疫组织化学染色方法检测112例NSCLC患者肺癌组织中survivin、bcl-2,PARP及P65蛋白的表达。结果 P65、survivin、bcl-2、PARP蛋白阳性表达率分别为67.9%、88.4%、58.0%、28.6%。survivin与NSCLC临床分期相关;bcl-2与肿瘤组织学类型相关;survivin与bcl-2表达呈正相关(P均<0.05)。P65表达随肿瘤恶性程度的增加递增,且与survivin、bcl-2、PARP表达呈正相关(P<0.05)。结论 NSCLC中survivin、bcl-2蛋白表达上调,P65蛋白过度活化可能是其发生发展的重要原因。survivin蛋白可作为判断NSCLC预后的参考指标。P65蛋白促进survivin、bcl-2蛋白的转录,并可能参与PARP蛋白的调节。

p65及MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1在宫颈鳞癌的表达状态

目的探讨MMP-2、MMP-9、TI MP-2、TI MP-1在宫颈鳞癌组织的表达状态及其与宫颈鳞癌侵袭转移的关系,并初步了解p65表达与MMP-2、MMP-9表达状态之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测了10例正常宫颈组织、13例CINⅡ,11例CINⅢ,30例浸润性宫颈鳞癌组织MMP-2、MMP-9、TI MP-2、TI MP-1和p65的表达状态。结果浸润癌MMP-9、TI MP-2、TI MP-1阳性表达率明显高于其他几组,p65表达状态与MMP-9基本一致。与MMP-9、MMP-2阴性浸润癌病例相比,MMP-9、MMP-2阳性患者的TI MP-1、TI MP-2阳性表达强度并无明显差异。结论MMP-9、TI MP-1、TI MP-2表达增加在宫颈鳞癌侵袭过程中起着重要作用,宫颈鳞癌MMP-9高表达可能与p65蛋白高表达有关。

戊型肝炎病毒开放读码框3蛋白抑制肿瘤坏死因子-α介导肝细胞p65的核转移

目的:研究Ⅰ型和Ⅳ型戊型肝炎病毒(HEV)开放读码框3蛋白(ORF3)对肝细胞系L02核因子-kap-pa B(Nuclear Factor kappa B,NF-κB)通路的影响。方法:分别用未转染质粒、转染Ⅰ型和Ⅳ型ORF3真核表达质粒及空载质粒的L02细胞,48小时后加入TNF(肿瘤坏死因子)-α刺激,采用免疫荧光观察细胞内p65的核转运,并用western blot检测p65蛋白的表达。结果:未转染质粒的L02细胞加入TNF-α刺激后,p65由胞浆转入胞核;转染空载的L02细胞加入TNF-α刺激后,与未转染的L02相似,p65由胞浆转入胞核;表达Ⅰ型和Ⅳ型ORF3蛋白的细胞,加入TNF-α刺激后,p65未见明显核转移。结论:Ⅰ型和Ⅳ型ORF3蛋白可抑制TNF-α介导的p65核转移。

抗癌防移片对结直肠癌肝转移BALB/c小鼠P65、STAT3、TNF-α因子的影响

目的通过研究抗癌防移片对结直肠癌肝转移小鼠模型肝脏组织中癌基因蛋白质p65(oncogene protein p65,P65)、信号传导转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)蛋白表达,以及血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度检测,探讨抗癌防移片预防结直肠癌肝转移的作用机制。方法采用脾脏注入CT26细胞的方法制备结直肠癌小鼠模型,按照随机分配的原则分为6组:模型组、阳性对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、中西药组,每组5只。模型组予以等体积生理盐水灌胃,1次/d;阳性对照组予以奥沙利铂甘露醇注射液(L-OHP)、氟尿嘧啶注射液(5-Fu)、亚叶酸钙注射液(CF),腹腔注射,1次/周;中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组裸鼠以抗癌防移片中药混悬液灌胃,1次/d;中西药组采用阳性对照组和中药高剂量组两种方式结合给药。分组干预3周后,采集肝脏组织和血清,采用HE染色法观察各组小鼠肝组织病理切片分析细胞结构,采用Western bolt检测P65及STAT3蛋白表达量,ELISA法检测血清中TNF-α蛋白浓度。结果给药后3周,与模型组比较,中药高剂量组、中西药组、阳性对照组小鼠的体质量均明显增加(P<0.05);小鼠肝组织瘤体质量均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组、抗癌防移片高剂量组、中西药组小鼠组织细胞排列整齐,结构清晰,仅可见少许异型细胞。与模型组比较,抗癌防移片高剂量组P65、STAT3蛋白表达水平及TNF-α浓度含量降低(P<0.05)。结论抗癌防移片可能通过抑制P65、STAT3、TNF-α蛋白表达,改善组织炎症环境,从而发挥抑制结直肠癌肝转移的作用。

千金藤素调控肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的实验研究

目的探讨千金藤素对肝癌细胞HepG2增殖、凋亡的影响和机制。方法2020年1—6月,从上海通派生物科技有限公司购入肝癌细胞HepG2,用千金藤素(20µmol/L)处理肝癌细胞HepG2,MTT方法测定增殖活性,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。用NF-κB信号激活剂和千金藤素联合处理肝癌细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡变化。结果千金藤素处理后的肝癌细胞增殖活性下降,细胞G_(0)/G_(1)期比例[(65.81±3.73)%比(50.61±4.17)%]升高,细胞凋亡率[(13.47±1.58)%比(2.18±0.12)%]升高,细胞中p21、Bax、cleaved-caspase-3蛋白水平升高,cyclin D1蛋白水平下降,NF-κBp65蛋白水平(0.19±0.02比0.36±0.05)降低。NF-κB信号激活剂处理可以提高千金藤素条件下肝癌细胞增殖活性(0.46±0.03比0.35±0.04),减少G_(0)/G_(1)期比例,降低细胞凋亡率,降低细胞中p21、Bax、cleavedcaspase-3蛋白表达水平,提高细胞中cyclin D1和NF-κBp65蛋白水平。结论千金藤素抑制肝癌细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,作用机制与抑制NF-κB信号激活有关。

非小细胞肺癌组织中NF-kB和c-myc及p73的表达与意义

目的:探讨NF-κB(p65)、c-myc和p73蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及相互关系。方法:用免疫组化二步法检测60例NSCLC组织标本中p65、c-myc和p73蛋白的表达,并进行相关分析。结果:p65、c-myc和p73蛋白在肺癌组织中的表达分别与在肺支气管上皮组织的表达比较差异有统计学意义,P<0.05。p65和c-myc蛋白在淋巴结转移癌组织中的表达与肺支气管上皮组织中的表达差异无统计学意义,P>0.05;p73蛋白在上述两组的表达差异有统计学意义,P<0.05。p65、c-myc和p73蛋白在肺癌高、中与低分化阳性表达的比较,差异均无统计学意义,P>0.05。伴有淋巴结转移的肺癌组织中蛋白阳性表达与无淋巴结转移比较:p65和c-myc差异无统计学意义,P>0.05;p73差异有统计学意义,P<0.05。肺癌组织中p65与c-myc具有相关性,R=0.5514,P<0.01;c-myc与p73具有相关性,R=0.6537,P<0.01;未发现p65与p73有明显相关性,R=0.1735,P>0.05。结论:p65、c-myc和p73表达上调均可能是NSCLC发生的重要因素;在肺癌发生发展中p65与c-myc、c-myc和p73可能在诱导细胞增生与抑制细胞凋亡中起协同作用;p73上调可能促进肺癌的侵袭与转移,可作为肺癌恶化进展及癌转移的动态监控标志。

核因子-κB/p65表达下调对舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤中bcl-2和bax表达的影响

目的:本实验旨在探讨下调核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)/p65亚单位的表达对舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤生长及细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达的影响。方法:应用舌鳞状细胞癌Tca8113细胞建立舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型。将针对p65的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)接种荷瘤裸鼠,观察下调NF-κB/p65表达后荷瘤裸鼠的生长情况;采用TUNEL法检测肿瘤组织中的细胞凋亡情况;进一步应用RT-PCR和Western印迹法检测肿瘤组织中p65、bcl-2和bax的mRNA及蛋白表达变化。结果:经p65siRNA治疗后,肿瘤的生长明显受到抑制(P<0.05);TUNEL结果表明,p65siRNA组肿瘤细胞明显发生凋亡;此外,p65siRNA组裸鼠肿瘤组织p65和bcl-2的mRNA及蛋白表达明显下调,而bax的mRNA及蛋白表达显著上调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:NF-κB/p65亚基可能在舌鳞状细胞癌的细胞凋亡中发挥重要作用。

p65和nm23-H1在喉癌中的表达及意义

目的探讨p65和nm23-H1蛋白在喉癌组织中的表达及临床意义。方法在正常喉黏膜组织11例、喉癌40例患者的标本中,用免疫组织化学二步法检测p65和nm23-H1蛋白的表达,并将结果进行相关分析。结果 p65在喉癌组织中的表达比正常喉黏膜组织的表达高,差异有统计学意义(P<0.01);nm23-H1蛋白在淋巴结转移癌组织中的表达比正常喉黏膜组织中的表达低,差异有统计学意义(P>0.05);nm23-H1蛋白在喉癌高和中分化组比低分化组阳性表达高,差异有统计学意义(P<0.01);伴有淋巴结转移的喉癌组织比无淋巴结转移的喉癌组织nm23-H1蛋白阳性表达低,差异有统计学意义(P<0.01);喉癌中p65与nm23-H1蛋白的表达未发现相关性(P>0.05)。结论 p65在喉癌组织中表达上调,提示可能通过抑制喉癌细胞凋亡,对喉癌的发生和发展起重要促进作用;nm23-H1蛋白在伴转移的喉癌组织和淋巴结转移癌组织中的表达降低,提示nm23基因参与喉癌的浸润和转移。

NF-κB/p65在鼻NK／T淋巴瘤中的表达及意义

目的探讨NF-κB／p6S在鼻NK／T淋巴瘤表达及其与细胞凋亡和预后的关系。方法应用免疫组织化学SP法和TUNEL法，检测23例鼻NK／T淋巴瘤和14例良性淋巴结病变中NF-κB／p6S的表达水平和细胞凋亡。结果NF-κB／p65在鼻NK／T淋巴瘤表达的阳性率为43．5％（10／23）；凋亡指数与NF-κB／p65呈负相关（r=-0．631，P〈0．05）。NF-κB/p65阳性表达者的平均生存时间明显短于阴性者（P〈0．05）。结论NF-κB／p65表达而引起的凋亡抑制可能在鼻NK／T淋巴瘤的发生发展中有重要作用并可作为预后不良的参考指标。