凋亡抑制蛋白Survivin、bcl-2在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨凋亡抑制蛋白Survivin、bcl-2蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达与不同临床病理特征的关系及二者在肺癌发生过程中可能存在的相关性。方法:采用免疫组化法的链霉菌抗生物素过氧化酶(S-P)法检测80例NSCLC组织和20例正常肺组织中Survivin、bcl-2蛋白表达情况。结果:非小细胞肺癌组织中Survivin、bcl-2蛋白阳性表达率分别为61.3%、50%,而在肺良性病变组织中阳性表达率分别为0%、10%,两者在两组中的表达均有显著性差异(P<0.05);Survivin蛋白在～期肺癌组织中阳性表达率72.0%显著高于I～II期肺癌组织的43.3%(P<0.05),bcl-2蛋白在鳞癌组的阳性表达率62.2%高于腺癌组的34.3%(P<0.05);Survivin、bcl-2蛋白在肺癌组织中的表达呈正相关关系。结论:Survivin蛋白表达与肺癌的TNM分期密切相关,Survivin、bcl-2可以作为判断病情和评价预后的指标。

根癌农杆菌胁迫下多花蔷薇(Rosamultiflora‘Inermis4’)的基因表达分析

多花蔷薇无刺4号(Rosamultiflora‘Inermis4’)对根癌病有较强抗性。以根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)接种多花蔷薇无刺4号为目的材料,刺伤处理为对照,采用抑制差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)方法,构建了富集多花蔷薇根癌病抗性相关基因的差减cDNA文库。差异筛选差减cDNA文库后,随机选取增强表达的92个克隆进行测序,去除冗余的cDNA和病菌的基因片段,共得到53个单一序列。利用GenBank数据库进行核酸和蛋白质同源性比较,获得的cDNA片段功能涉及:细胞分裂、生长(22个克隆),逆境防御、信号转导及激素调节(11个克隆)以及初生与次生代谢(10个克隆)。另有10个基因片段功能未知,可能为新的EST。根据测序及比对分析结果,对多花蔷薇无刺4号抗根癌病的分子机理进行了探讨。

DCLK1基因启动子甲基化与口腔鳞癌临床病理特征及预后的关系

目的探讨双肾上腺素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)基因启动子甲基化与口腔鳞癌临床病理特征及预后的关系。方法选取手术切除的129例口腔鳞癌组织和对应癌旁组织,采用甲基化特异性PCR检测DCLK1基因启动子甲基化情况,分析其与临床病理特征之间的关系。RT-PCR和免疫组织化学法分别检测DCLK1 mRNA和蛋白表达水平,并分析DCLK1基因启动子甲基化与DCLK1 mRNA和蛋白表达之间关系。随访3年,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析DCLK1基因启动子甲基化对患者预后的影响。结果口腔鳞癌组织和癌旁组织中DCLK1基因启动子甲基化阳性表达率分别为35.7%和64.3%(P<0.01)。口腔鳞癌组织中DCLK1mRNA水平和蛋白表达均较癌旁组织上升(均P<0.01)。口腔鳞癌组织中DCLK1基因启动子甲基化阳性表达与DCLK1 mRNA和蛋白表达之间均呈负相关(r=-0.767,P<0.01;r=-0.671,P<0.01)。DCLK1基因启动子甲基化状态在口腔鳞癌患者TNM分期、组织分化程度和淋巴结转移方面比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。DCLK1基因启动子甲基化阳性表达患者3年无进展生存率和总生存率均高于阴性表达患者(63.0%vs 43.4%,69.6%vs 47.0%,均P<0.05)。结论DCLK1去甲基化表达异常,与口腔鳞癌临床病理特征相关,影响患者预后。DCLK1去甲基化状态可能通过参与调控DCLK1 mRNA表达和蛋白分泌在肿瘤发生和发展发挥作用。

胃癌组织中P53及EGFR基因产物的表达

目的探索P53及EGFR基因产物表达与胃癌的关系及其相互关系．方法应用免疫组化技术对40例胃癌标本及对照组中的P53及EGFR基因产物的表达进行分析．结果P53及EGFR基因产物在胃良性病变中均为阴性，而在胃癌中的阳性率分别为52．5％和57．5％．p53基因及EGFR基因产物在高分化腺癌中的表达高于低分化癌（P＜0．05和P＜0．05）；在深度浸润性癌中高于浅表浸润性癌（P＜0．01和P＜0．001）；在伴转移的胃癌中高于无转移者（P＜0．01和P＜0．05）．P53及EGFR基因产物在胃癌中的表达高度相关（r＝0．7482）．结论P53及EGFR基因产物的表达是胃粘膜上皮恶变标志之一，p53基因突变与EGFR基因激活高度同步．

他汀类药物对食管癌细胞增殖及Akt蛋白表达影响

目的探讨他汀类药物对食管癌细胞增殖及蛋白激酶B(Akt)蛋白表达影响。方法取食管鳞癌(ESCC)细胞株进行培养,以不同时间(24、48h)和不同浓度(15、45μmol/L)的普伐他汀、辛伐他汀进行干预(4个实验组),并设立空白对照组。分别检测各组细胞增殖和丙二醛(MDA)含量,以及辛伐他汀对细胞周期和细胞凋亡、AktmRNA表达的影响。结果普伐他汀、15μmol/L辛伐他汀干预癌细胞时,对细胞增殖均无明显影响(P>0.05),45μmol/L辛伐他汀能够显著抑制癌细胞增殖(F=5.345、16.383,P<0.05)。各浓度普伐他汀干预癌细胞时,MDA含量均无明显变化(P>0.05);各浓度辛伐他汀干预癌细胞时,MDA含量均有明显上升(F=5.913、7.435,P<0.05)。辛伐他汀干预癌细胞时,G0/G1期细胞实验组明显高于对照组,S期、G2/M期细胞实验组明显低于对照组(t=2.975~10.027,P<0.05)。各浓度辛伐他汀干预癌细胞时,AktmRNA表达均明显下降(F=6.541、7.548,P<0.05)。结论辛伐他汀对食管癌细胞确有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,并能够抑制Akt蛋白的表达。

siRNA沉默NGAL基因对结肠癌细胞行为的影响

目的探讨中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophils gelatinases-associated lipocalin,NGAL)的基因沉默作用对结肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法采用转染试剂盒ribo FECTTMCP Transfection Kit负载NGAL siRNA转染结肠癌细胞株HT-29(转染组),以未转染的HT-29细胞为对照组。实时荧光定量PCR和ELISA分别检测细胞NGAL mRNA水平和细胞培养上清液中NGAL蛋白水平,采用细胞划痕实验、Promega Cell Proliferation Assay G3580和BD C6流式细胞仪分别检测细胞迁移、增殖和凋亡情况。结果 HT-29细胞转染NGAL siRNA72 h后,转染组NGAL mRNA水平为对照组的0.123(P<0.05);转染48 h后,转染组细胞培养上清液中NGAL蛋白为(0.328±0.055)μg/L,低于对照组的(1.071±0.143)μg/L(t=8.205,P=0.001)。转染48 h后,转染组凋亡率为(18.87±1.65)%,低于对照组的(11.93±1.90)%(t=-4.752,P=0.009)。转染24 h后,转染组细胞迁移率为对照组的(23.35±6.35)%(t=11.930,P<0.01)。转染48 h后,转染组细胞增殖率为对照组的(90.00±5.30)%(t=1.983,P=0.118)。结论 NGAL siRNA可以抑制结肠癌细胞NGAL基因和蛋白的表达,抑制细胞迁移,促进细胞凋亡。

胃癌及癌前病变组织中C-erb-B_2蛋白检测的临床意义

目的 :探讨 C- erb- B2 在胃癌前病变、胃癌组织中的表达及对胃癌的发生及其对预后评估的临床价值。方法 :用免疫组化 SP法同步检测 30例轻度慢性浅表性胃炎、35例慢性萎缩性胃炎伴胃粘膜不典型增生、15例肠腺化生及 5 0例胃癌组织切片 ,观察 C- erb- B2 在不同胃粘膜病变中的阳性率。结果 :C- erb- B2 在重度不典型增生、肠腺化生及胃癌组织中均有较高的阳性表达 ,与轻度慢性浅表性胃炎相比 P<0 .0 1,伴淋巴结、肝转移胃癌患者 C- erb- B2 强阳性率明显高于无转移者。结论 :C- erb- B2 与胃癌发生密切相关 ,C- erb- B2 过度表达提示胃癌患者预后不良 ,C- erb- B2 检测在胃癌前病变、胃癌组织中的表达对胃癌的诊断及预后评估具有重要意义。

大肠癌中c-Jun激活区结合蛋白1（Jab1）的表达及其意义

目的探讨大肠癌中c‐Jun激活区结合蛋白1（Jab1）的表达及其临床病理指标和预后的关系。方法收集98例大肠癌组织（大肠癌组）和相应癌旁组织标本（对照组），采用免疫组织化学方法检测两组Jab1的表达并比较。结果Jab1在大肠癌组中的阳性表达率为96．9％（95／98），显著高于对照组17．3％（17／98），其差异有统计学意义（ P ＜0．05）；Jab1阳性表达与肿瘤细胞分化程度、浸润深度、TNM 分期和淋巴结转移显著相关（ P ＜0．05）；与患者性别、年龄、肿瘤大小无显著相关（ P ＞0．05）；JAB1阳性表达患者1年、3年、5年生存率分别为81．0％、49．6％、31．0％；阴性表达患者1年、3年、5年生存率分别为100．0％、87．5％、75．0％，其差异具有统计学意义（ P＜0．05）。结论 Jab1可能参与了大肠癌的发生、浸润及转移；根据Jab1的表达可判断大肠癌患者的预后。

电针“内关"对急性心肌缺血大鼠心肌c-fos基因表达的影响

目的:探讨电针“内关”改善急性心肌缺血的机制。方法:将96只大鼠随机分为假手术组、心肌缺血模型组、心肌缺血模型加电针组,采用结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血实验模型,造模成功后,电针双侧“内关”。用生化方法检测血清心肌酶活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌中c-fos基因的表达。结果:心肌缺血模型组血清心肌酶活性和心肌c-fosmR—NA表达显著高于假手术组(P<0.05),电针后降低,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:电针“内关”改善急性心肌缺血的机制与下调心肌组织c—fosmRNA的表达有关。

胃癌及癌前病变ras P21,P53的表达意义

近年来的研究结果揭示,胃癌的发生是一个涉及多种癌基因、抑癌基因及多阶段累积的复杂过程,其中癌基因rasp21及抑癌基因p53是与胃癌发生有关的癌相关基因。我们采用SP免疫组化法,同步检测ras p21及p53,观察二种基因蛋白产物在胃癌及癌前病变中的表达情况,以探讨ras癌基因及p53基因在胃癌发生中的作用及意义。 1 材料和方法 1.1 材料胃粘膜活检组织经病理诊断的胃癌42例,不典型增生23例,肠上皮化生26例,慢性萎缩性胃炎14例,慢性浅表性胃炎24例,用100mL·L^(-1)福尔马林液固定,常规组织脱水,石蜡包埋,4μm连续切片。鼠抗人ran P21单克隆抗体及鼠抗人P53单克隆抗体均为美国Maxim Biotech公司产品,试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。 1.2 方法应用免疫组化(SP法)染色,测定方法按试剂盒说明书进行。ras P21蛋白阳性表现为细胞质染色呈棕黄色;P53蛋白阳性表现为细胞核染色呈棕黄色至深棕黄色。

AKT2通过调控p27表达逆转卵巢癌顺铂耐药

目的:探讨上皮性卵巢癌中蛋白激酶B beta(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 2,AKT2)与p27在卵巢癌多细胞球体顺铂耐药中的作用。方法:三维培养获得人卵巢癌多细胞球体(multi-cellular spheroids,MCS);Western印迹法分析p27及AKT2表达;构建AKT2干扰载体,脂质体法转染A2780细胞后三维培养形成多细胞球体,不同浓度顺铂处理后通过FCM法检测细胞凋亡,MTT法比较细胞对顺铂的敏感性。结果:Western印迹法结果提示,MCS中AKT2及p27的表达高于单层细胞;转染AKT2干扰载体(shRNA-AKT2)的MCS中AKT2、p27表达量较未转染MCS及转染空载体的MCS明显降低。流式细胞仪分解结果表示,不同浓度顺铂作用后,MCS凋亡率明显低于单层细胞;转染shRNA-AKT2的细胞球凋亡率较未转染MCS及转染空载体的MCS升高。MTT法示瞬时转染shRNA-AKT2的细胞球顺铂对细胞抑制率较未转染MCS及转染空载体的MCS升高。结论:干扰AKT2可降低p27的表达,从而逆转卵巢癌对顺铂的化疗耐药。

P21^(ras)、P16在大肠癌中的表达及临床意义

目的探讨癌基因P21^(ras)及抑癌基因P16与大肠癌的关系。方法应用免疫组化SP法分析、研究了P21^(ras)蛋白、P16蛋白在80例大肠癌、20例大肠腺瘤及20例正常大肠组织中的表达。结果①P21^(ras)在前二者中的阳性表达率分别为70.1％(57/80)和65％(13/20),明显高于在正常组织中的30％(6/20),其比较具有显著性差异(x^2=17.66、P<0.005;x^2=5.23、P<0.05);P16在大肠癌中的阳性表达率为36.3％(29/80)低于在腺瘤及正常组织中的65％(13/20)和75％(15/20),其比较亦具有显著性差异。②P21^(ras)、P16的阳性表达率在大肠癌患者的年龄、性别及肿瘤大小方面无显著性差异,而与肿瘤的临床Dukes分期(x^2=6.20、P<0.025;x^2=6.25、P<0.05)、有无淋巴结转移及术后5a生存率密切相关。③P21^(ras)在不同的大肠癌组织病理类型中,其表达率无显著性差异;P16的阳性表达率随着肿瘤浸润深度的增加有下降趋势,但无统计学意义。④在80例大肠癌患者中,P21^(ras)阳性而P16阴性者比率高于其他三者,而且这类大肠癌患者的术后5a生存率下降。结论大肠癌的发生、发展,是由包括癌基因、抑癌基因在内的多种因素作用的结果;在临床工作中联合检测P21^(ras)及P16蛋白在大肠癌中的表达水平,对我们估计患者的病情、推测其预后有指导性意义。

p16^(INK4a)和RASSF1a启动子甲基化在非小细胞肺癌中的研究

目的探讨抑癌基因p16INK4a和RASSF1a启动子甲基化在非小细胞肺癌中的作用。方法应用甲基化特异的PCR(methyl-specific PCR,MSP)和RT-PCR法测定基因的甲基化率与mRNA的转录水平,回收PCR产物测序。结果在NSCLC癌/癌旁组织中的甲基化率分别是RASSF1a为55%和10%,p16INK4a为43%和12%,p16INK4a和RASSF1a的甲基化率在>65岁组高于≤65岁组,两基因甲基化率均随吸烟指数的增加而增高,并且随TNM临床进展而逐渐增加;p16INK4a甲基化率鳞癌组高于腺癌组。甲基化的NSCLC标本mRNA转录失活或下降,在细胞株水平5-aza-deoxycytidine(5-Aza-CdR)处理后,甲基化而转录沉默的细胞株恢复转录活性。结论启动子甲基化是调节p16INK4a和RASSF1a转录的重要机制,5-Aza-CdR具有逆转甲基化而恢复转录的作用。

survivin、MDR_1、MRP在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨survivin、MDR1(P-糖蛋白)、MRP蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义。方法观察50例非小细胞肺癌患者survivin、MDR1、MRP蛋白表达差异及相关性,分析survivin表达与预后的关系。结果78.0%的NSCLC表达survivin阳性和阴性患者1年生存率分别为43.5%、72.7%,两者差异有统计学意义(P<0.05);MDR、蛋白表达率为66.0%,与survivin蛋白显著相关(P<0.05),而MRP表达与survivin表达无明显相关(P>0.05)。结论(1)survivin蛋白在NSCLC中表达上调提示其在NSCLC发生、发展及预后中起重要作用,survivin可成为肺癌基因治疗靶点;(2)MDR1、MRP蛋白可与survivin蛋白共同存在于肺癌组织中,可能参与肿瘤耐药。

食管上皮癌变过程中cyclin E和p21^(WAF1)的表达及其意义

目的 研究细胞周期调控因子 cyclin E和 p2 1WAF1 基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义。方法 应用免疫组化 S- P方法和原位杂交方法分别检测 4 8例食管癌组织和相应癌旁组织 (正常黏膜 17例 ,非典型增生组织 31例 )中 cyclin E和 p2 1WAF1 蛋白及 m RNA表达。结果 从食管正常黏膜到非典型增生组织和癌组织 ,cy-clin E蛋白和 m RNA阳性表达率皆呈逐渐升高的趋势 ,食管癌组织和癌旁组织之间差异有显著性。高分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于其它各组 ,m RNA阳性表达率显著高于正常黏膜和非典型增生 级。 p2 1WAF 1 蛋白及m RNA在癌旁组织和癌组织中表达皆较高 ,两者差异无显著性。cyclin E和 p2 1W AF 1 基因表达无显著相关性。结论 食管癌变过程中 ,细胞周期蛋白 cyclin E表达水平增高 ,和组织分化程度显著相关 ,其异常是食管癌变过程中的早期事件 ,可能作为食管高分化鳞癌的诊断标志物之一。p2 1WAF 1 基因在食管癌组织中高表达 ,可能与细胞周期调控的反馈机制有关。

ERCC1和AKT2在胃癌组织中的表达及其临床意义

【目的】探讨切除修复交叉互补基因1（ERCC1）、蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/AKT）两种蛋白在胃癌组织中表达情况及其意义。【方法】采用 SP免疫组织化学法检测76例胃癌组织中 ERCC1、AKT2蛋白的表达情况，并与42例正常胃黏膜组织进行比较。【结果】胃癌组织中 ERCC1、AKT2蛋白表达定位于细胞核和浆， ERCC1表达明显低于正常胃黏膜组织，而 AKT2阳性表达明显高于正常胃黏膜组织（P ＜0．05）。ERCC1和AKT2蛋白的表达与淋巴结转移及病理分期有关（P＜0．05），两者之间表达呈无明显相关性。术后化疗患者中ERCC1和 AKT2阴性者预后好于均阳性者。【结论】ERCC1和 AKT2在与胃癌预后及耐药密切相关，对其变化进行检测可帮助了解胃癌患者的肿瘤恶性程度，指导制定个体化治疗方案并判断预后。

急性髓细胞白血病Bcl-2蛋白表达及其临床意义

目的:检测急性髓细胞白血病(AML)Bcl-2蛋白,并评价其与AML患者临床特征及多药耐药基因MDR1表达产物P170的关系。方法:免疫细胞化学ABC法检测白血病细胞中Bcl-2蛋白及P170表达。结果:AML中存在Bcl-2高水平表达,但复发的AML与初发AMLBcl-2表达无显著差异(P>0.05)。初发AML中,Bcl-2阳性组患者完全缓解(CR)率显著低于Bcl-2阴性组(P<0.01)。Bcl-2的阳性与阴性组中P170表达无显著差异(P>0.05)。Bcl-2和P170间无相关表达(rs=0.171,P>0.05),但Bcl-2/P170双阳性组化疗CR率显著低于双阴性组(P<0.01)或P170/Bcl-2单阳性组(P<0.05)。结论:初发AML中Bcl-2蛋白高水平表达与化疗耐药有关;Bcl-2与P170联合表达患者化疗反应更差。

WT1基因在NSCLC中的表达及其临床意义

目的探讨Wilms tumor gene 1(WT1)基因在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR技术检测100例NSCLC组织石蜡标本及对照标本(40例癌旁组织和40例良性病变组织)中WT1基因的表达量,以对照组WT1相对表达量均值为比较标准,将癌组织WT1表达量分为高表达和低表达;分析WT1表达量与NSCLC患者临床特征、生存期之间的关系。结果与对照组组织比较,WT1基因在NSCLC组织中高表达[(4. 295±1. 477) vs (1. 001±0. 002),P <0. 01]。WT1基因表达在NSCLC患者病理类型[(4. 132±0. 576) vs (6. 118±0. 525)]、分化程度[(3. 973±0. 329) vs (5. 683±0. 383)]、TNM分期[(4. 829±0. 137) vs (5. 685±0. 473)]和淋巴结转移[(3. 165±0. 499) vs (5. 186±0. 618)]方面比较,差异均具有统计学意义(均P <0. 01)。WT1高表达患者(WT1表达≥1. 001)生存期缩短(43个月vs 59个月,P=0. 002)。结论WT1基因在NSCLC组织中高表达,且高表达能够促进NSCLC分化和转移,缩短患者生存期。

RNA干扰沉默DJ-1基因对Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的：观察沉默DJ-1基因对人喉癌Hep-2细胞株裸鼠移植瘤的作用及其机制。方法：建立人喉癌Hep-2裸鼠移植瘤模型，24只裸鼠随机分为三组（每组8只）：对照组（5％葡萄糖溶液）、小剂量组（20μg 的DJ-1基因特异性小干扰RNA）、大剂量组（40μg的DJ-1基因特异性小干扰RNA）。各组瘤体内分别注射相应液体50μL，2次／周，共6次，每次测量瘤体质量及大小。停药后48 h脱颈椎法处死裸鼠，剥离瘤体，测瘤体质量，计算抑瘤率。采用免疫组织化学法分别检测剥离瘤体组织Caspase-3、Ki-67的表达情况；实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测各组移植瘤 DJ-1、PTEN、survivin 基因和蛋白的表达。结果：小剂量组[（0．66±0．15） g]和大剂量组[（0．48±0．11） g]的瘤体质量均小于对照组[（0．83±0．16）g，均P ＜0．05]，且抑瘤率分别为（20．48±0．18）％和（42．16±0．13）％。小剂量组和大剂量组Caspase-3表达增高， Ki-67表达减少，与对照组差异均有统计学意义（均P ＜0．05）；与对照组比较，小剂量组和大剂量组DJ-1、survivin的mRNA和蛋白表达均减少（均P＜0．05），而PTEN的mRNA和蛋白表达均增加（均P＜0．05）。结论：大剂量的DJ-1小干扰RNA可能通过下调DJ-1和促进PTEN的表达，从而阻断PI3 K-PKB／Akt信号通路并调节survivin表达来促进肿瘤细胞凋亡，抑制人喉癌Hep-2裸鼠移植瘤的生长。