肺癌患者K-ras、FHIT基因异常与吸烟关系

目的探讨吸烟与肺癌患者原癌基因K-ras点突变和人类脆性组氨酸三联体(FHIT)基因转录异常的关系,探讨吸烟致肺癌作用靶点。方法应用PCR-RFLP和RT-PCR分别检测80例肺癌患者及20例正常肺组织中K-ras、FHIT基因的异常情况,分析吸烟与K-ras、FHIT基因异常的关系。结果肺癌组织K-ras基因突变率为52.58%,FHIT基因转录异常阳性率为71.25%,与正常肺组织比较差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌组吸烟者的K-ras、FHIT基因异常率高于不吸烟者(P<0.05)。K-ras、FHIT基因异常与吸烟指数相关联,列联系数P分别为0.337和0.399;吸烟与肺腺癌K-ras基因点突变、肺鳞癌和小细胞肺癌的FHIT基因异常转录关系密切(P<0.05)。肺癌患者K-ras突变与FHIT转录异常无明显关联性,但两者在肺癌组织中差异有统计学意义(P<0.01)。结论K-ras、FHIT基因异常与肺癌发生密切相关。吸烟是肺腺癌中K-ras基因点突变和肺鳞癌、小细胞肺癌中FHIF基因异常转录的一个重要因素。

电化学发光-聚合酶链式反应方法检测胰腺癌中K-ras基因点突变

发展了一种可用于快速检测胰腺癌中K-ras癌基因点突变的电化学发光-聚合酶链式反应(ECL-PCR)分析方法。该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;再采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切。由于野生型样品和突变型样品间存在酶切位点的变化,其中只有野生型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到检测池中,进行电化学发光检测。采用该法对13例胰腺癌组织中的K-ras癌基因第12位密码子进行点突变分析,只需要10μL样品、20min孵育时间和30s采集时间,就可得出其中有12例存在点突变,点突变率为92.3%。本方法操作简便、安全、快速、灵敏,可用于检测任何一种导致限制性内切酶位点改变的基因点突变。

肺癌K-ras基因突变的二步PCR检测及其临床应用

目的 探讨高敏感性Kras基因点突变检测方法在肺癌临床的应用价值。方法 应用二步(巢式)聚合酶链反应结合限制性片断多态性分析方法(PCRRFLP)检测临床肺癌标本Kras基因第12密码子点突变。结果 二步PCRRFLP法检测Kras点突变的敏感性较一步法提高约64倍。55例肺癌石蜡包埋标本中,Kras点突变检出率为47.3%;对另67例纤支镜标本进行基因检测,以Kras突变进行基因诊断的敏感性为70.9%,特异性为91.7%。结论 二步PCRRFLP法对临床肺癌标本Kras点突变检出率较高。

电化学发光PCR方法检测结肠癌中K-ras癌基因点突变(英文)

发展了一种可用于快速检测K-ras癌基因点突变的电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法,该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;随后,采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切,由于突变导致酶切位点的丢失,所以只有野生型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到反应池中进行电化学发光检测。采用该法对20例结肠癌组织中的K-ras癌基因第12位密码子进行点突变分析,得出其中有9例存在点突变,点突变率为45%。该方法操作简便、安全、快速、灵敏,可用于快速检测K-ras癌基因点突变。

两种等位基因特异性扩增方法在结肠癌K-ras癌基因点突变检测中的应用比较(英文)

针对传统电泳检测方法存在操作复杂、费时等缺点,提出一种用于检测K-ras癌基因点突变的实时荧光等位基因特异性扩增(Allele specific amplification,ASA)方法。该法采用突变型引物对结肠癌基因组中的K-ras基因进行等位基因特异性扩增,只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物,该产物能与双链DNA染料SYBR GreenⅠ结合,产生荧光信号从而被检测到。通过对荧光域值和溶解曲线分析来区分不同的基因突变类型。该法可以检测到野生型DNA中含量为1/1 000的突变型DNA,整个检测时间小于1 h。我们用该法检测31例结肠癌样品中K-ras基因密码子12发生的点突变,其中有15例检出为阳性。此外,还采用等位基因特异性扩增结合电泳分析对样品进行了检测,并对两种方法进行了比较。结果显示:实时荧光等位基因特异性扩增方法具有操作简便、快速、检测成本低等优点,为临床诊断基因突变引起的疾病提供了一种可行的手段。

结直肠癌患者组织与粪便中K-ras癌基因12位点突变的分析

目的 探讨结直肠癌 (CRC)患者的组织与粪便中K ras癌基因 12位点突变检测结果的联系及检出率差异 ,为建立结直肠癌早期筛检方法提供科学依据。方法 应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)方法对 45例原发性结直肠癌患者手术切除的组织及术前粪便标本中K ras癌基因 12位点的突变情况进行检测 ,结果采用卡方检验及卡柏值 (Kappaval ue)进行统计分析。结果 癌组织、远端手术切缘粘膜、粪便标本中的K ras癌基因 12位点突变检出率分别为 3 5 .5 6% (16/45 )、4.44% (2 /45 )、3 7.78% (17/45 )。癌组织与粪便标本检测结果的关联检验为 :χ2 =3 3 .0 9,P <0 .0 1;差别检验为 :χ2 =0 ,P >0 .0 5 ;观察一致率为 93 .3 3 % ,卡柏值为 0 .86。结论 粪便中K ras癌基因 12位点突变检测结果与癌组织的检测结果存在联系 ,其检出率无显著性差异 ,可靠性极好 ;且粪便取材方便 ,无创伤性 。

k-ras、p16基因在卵巢上皮性肿瘤的表达及临床意义

目的 研究k ras、p16基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其意义。方法 应用链霉菌抗生物 过氧化酶连接法检测 98例卵巢上皮癌石蜡块中的表达情况 ,应用kaplam meier法及多变量cox比例风险回归摸型 ,分析 2种蛋白表达与患者预后关系。结果 k ras蛋白表达率为 79 6% ,其表达与临床分期及病理类型有关 (P <0 0 1) ;p16蛋白表达率 60 2 % ,其表达与临床分期、癌瘤播散、淋巴转移及患者预后有关 (P <0 0 1) ;患者生存随访表明p16表达阳性者平均生存时间短于无表达者 ,k ras对生存预后影响不显著。结论 p16蛋白表达与卵巢上皮癌的恶性程度有显著相关性 ,并能判断其癌瘤播散、转移能力、估计患者的预后 ;k ras基因表达主要发生在早期或分化好的卵巢肿瘤中 ,可以作为卵巢肿瘤发生的启动基因。

胃癌组织中RASSF6和K-RAS的表达及其临床意义

目的探讨RAS相关区域家族6基因(RASSF6)和原癌基因K-RAS在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测20例新鲜胃癌组织和癌旁组织中RASSF6和KRASmRNA表达水平,应用免疫组化法检测100例胃癌组织和癌旁胃组织中RASSF6和K-RAS蛋白的表达水平。结果 RASSF6mRNA及其蛋白在胃癌组织中的表达低于癌旁组织,K-RASmRNA及其蛋白在胃癌组织中的表达高于癌旁胃组织(P均<0.05);分化度低、浸润度深、有淋巴结转移及TNM分期高的胃癌组织存在RASSF6低表达和K-RAS高表达(P均<0.05),胃癌组织中RASSF6与K-RAS的表达呈负相关(r=-0.269,P<0.01)。结论胃癌组织中存在RASSF6低表达和K-RAS的高表达;RASSF6在胃癌发生、发展中起负性调控作用。

人类肺癌组织中COX-2的表达及其与K-ras和Mcl-1表达的关系

背景与目的环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)是花生四烯酸代谢限速酶的一个亚型,已发现COX-2与肿瘤的发生、发展和转移有关。本文旨在探讨肺癌组织中COX-2表达的临床病理学意义,及其与K-ras和Mcl-1表达的相互关系。方法应用免疫组织化学染色及图像分析系统检测COX-2、K-ras和Mcl-1在101例肺癌及7例正常肺组织中的表达。结果COX-2在非小细胞肺癌组织中高表达(P<0.05),以腺癌表达最高;在周围型肺癌(P<0.05)及中晚期肺癌组织中高表达(P<0.05);并且COX-2的表达与K-ras和Mcl-1的表达呈正相关。结论COX-2的表达与K-ras的基因突变和Mcl-1的表达上调有关,在肺癌的分化、进展过程中具有重要作用。

K-ras和tip30在上颌窦鳞状细胞癌中的表达及意义

目的分析K-ras原癌基因及tip30抑癌基因在上颌窦鳞状细胞癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组化的方法对54例上颌窦鳞状细胞癌和20例肥大的下鼻甲组织中K-ras及tip30进行检测。结果K-ras在上颌窦鳞状细胞癌中的阳性表达率为72.22%,在肥大的下鼻甲组织中的阳性表达率为0,两组差异有统计学意义(P<0.01)。tip30在上颌窦鳞状细胞癌中的阳性表达率为27.78%,在肥大的下鼻甲组织中的阳性表达率为85.00%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。K-ras与tip30的表达与患者的年龄、性别、吸烟史均无相关性(P>0.05),但两者都与肿瘤的TNM分期、病理分级及淋巴结转移有相关性(P<0.05)。两者在MSSCC中的表达呈负相关性(r=-0.446,P<0.01)。结论 K-ras及tip30在上颌窦鳞癌的发生、发展中可能起着密切的拮抗作用。

子宫内膜癌肿瘤标志物研究进展

肿瘤标志物（ tumor marker ）是指由肿瘤细胞分泌的，或是宿主对肿瘤反应而产生的并进入组织或体液中的物质。因肿瘤发生发展的原因尚未明确，肿瘤标志物的定义也还有待进一步完善。肿瘤标志物在肿瘤普查、高危人群的监测、诊断及个体化治疗、预后评判和病情观察等方面具有较大的意义，已成为肿瘤患者的一项重要检查指标，在临床中的应用日益广泛。目前为止，用于子宫内膜癌的肿瘤标志物已有多种，大致可分为：（1）激素受体标志物，如雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、胰岛素受体（IR）等；（2）血清肿瘤标志物，如CA125（carcinoma antigen 125）、CA199、癌胚抗原、人附睾分泌蛋白4（HE4）、甲壳质酶蛋白40（YKL-40）等；（3）肿瘤基因标志物，如癌基因K-ras、cerbB-2，抑癌基因PTEN、p53、nm23等。但这些肿瘤标志物多数灵敏性或特异性不高，联合使用可提高诊断的阳性率。本文就近年来子宫内膜癌主要相关肿瘤标志物的研究进展作一综述。

大肠癌患者血浆DNA中K-ras癌基因突变的检测

目的 评价血浆DNA中K ras癌基因第 12密码子点突变作为肿瘤标记物的临床应用价值。方法 用引物序列特异性聚合酶扩增链式反应 (PASP)检测了 32例大肠癌患者肿瘤组织DNA、血浆DNA中K ras癌基因第 12密码子点突变 ,对所有PASP法扩增得到的含点突变的PCR产物进行Sanger双脱氧链终止法测序。 结果 14例 (4 4%)大肠癌肿瘤组织DNA中存在K ras癌基因第 12密码子点突变 ;其中的 13例 (93%)在血浆DNA中存在与其肿瘤组织DNA相同类型的基因点突变。对于 18例肿瘤标本DNA未见突变的各期大肠癌及 5例正常献血员对照组 ,在其血浆DNA中也无一发现K ras基因突变。结论 血浆DNA中K ras癌基因第 12密码子点突变有望成为一个肿瘤标志物应用于大肠癌的诊断。

RASA1在胰腺癌中的异常表达及其临床意义

目的:探讨Ras p21蛋白活化子1(Ras p21 protein activator 1,RASA1)在胰腺癌中的表达状况及可能作用。方法:以qRT-PCR检测胰腺癌细胞(Capan-2、CFPAC-1、BxPC-3)和胰腺导管上皮细胞(H6C7)中RASA1 mRNA表达水平的差异,以Western blotting检测上述细胞之间RASA1蛋白表达水平的差异;以免疫组化检测RASA1蛋白在胰腺癌及胰腺良性病变(慢性胰腺炎、胰腺囊肿)中的表达差异,并观察其表达水平与胰腺癌各临床病理因素之间的联系。结果:各胰腺癌细胞株中RASA1 mRNA和蛋白表达水平均低于胰腺导管上皮细胞(P<0.05)。肿瘤组织RASA1蛋白表达水平显著低于良性病变组织(P<0.05);侵犯周边器官的肿瘤组织中RASA1表达显著低于局限于胰腺内的组织(P<0.05);Ⅰ期胰腺癌组织RASA1的表达则显著高于Ⅱ、Ⅲ期的癌组织(P<0.05);但RASA1表达与胰腺癌的远处转移关系尚不明确。结论:RASA1作为抑癌蛋白可能在胰腺癌的发生发展中发挥重要作用。

焦磷酸测序法检测结直肠癌患者k-ras基因突变

研究证明,k-ras癌基因的激活在CRC发生发展过程中起重要作用[1].k-ras基因最常见的激活方式为点突变,其中90%以上的突变发生在1号外显子第12位密码子（野生型：GGT）和第13位密码子（野生型：GGC）[2],突变率约30%～49%[3].近年来,k-ras基因是否突变已成为西妥昔单抗能否用于CRC分子靶向治疗的用药评判标准[4].因此,如何快速准确检出k-ras 基因突变对这类药物的应用及疗效预测显得尤为重要.焦磷酸测序法是一种酶促级联测序技术,特别适用于SNP常规检测[5].

KRAS对肺癌大鼠PI3K/Akt信号通路与免疫功能的影响

目的分析K-RAS原癌基因(KRAS)对肺癌大鼠PI3K/Akt信号通路与免疫功能的影响。方法选取30只Wistar大鼠,10只作为对照组,另外20只建立肺癌大鼠模型,将建模成功的20只大鼠分为模型组与KRAS沉默组,每组10只,观察各组大鼠一般情况,RT-PCR方法验证转染效率,采集各组大鼠静脉血进行检测免疫功能,HE染色观察各组大鼠肺组织病理学改变,流式细胞仪检测大鼠血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)表达,RT-PCR方法与Western blot方法检测大鼠肺组织中PI3K、AktmRNA与蛋白的表达。结果RT-PCR结果显示,KRAS慢病毒载体转染成功。与模型组相比,抑制KRAS表达可改善肺癌大鼠肺组织病理情况,上调大鼠血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)表达水平,降低肺组织PI3K与AktmRNA与蛋白表达水平。结论沉默KRAS表达,可提高肺癌大鼠免疫功能,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。