CD133^+卵巢癌干细胞样细胞在血管内皮细胞中的分化

背景:大量研究证实,新生血管形成在肿瘤的生长、浸润以及转移过程中发挥重要作用。目的:探讨CD133+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的特点。方法:通过无血清培养方法从卵巢癌A2780细胞株中成功诱导出CD133+卵巢癌干细胞样细胞,在体外接种于铺或不铺Matrigel基质胶的96孔板内,观察不同时间点CD133+卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞形成管腔样结构能力。通过裸鼠皮下移植实验,免疫荧光法观察CD133+卵巢癌干细胞样细胞在卵巢癌血管新生中的作用。结果与结论:CD133+卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞(阳性对照)在未铺Matrigel基质胶上并不能形成相应的管腔结构,且不表达内皮细胞标志物CD31,在Matrigel基质胶上能够形成相对稳定的管腔结构,CD31表达明显。CD133+卵巢癌干细胞样细胞接种裸鼠皮下成瘤后,可观察到肿瘤组织中有人源性CD31的表达。结果表明CD133+卵巢癌干细胞样细胞能够分化为血管内皮细胞,参与肿瘤血管重建。

从鼠黑色素瘤细胞系中分离和鉴定癌干细胞样细胞

目的:从鼠黑色素瘤BL6F10细胞系中分离与鉴定癌干细胞(CSC)样细胞,为今后对CSC的鉴定及靶向治疗奠定基础。方法:用不同免疫磁珠标记的单克隆抗体,从BL6F10细胞系中分离有特征性CD表型的瘤细胞,体外观察不同CD表型瘤细胞在软琼脂培养基上形成克隆的能力;将这些瘤细胞皮下注射到C57BL/6小鼠,比较其致瘤性。结果:从BL6F10细胞系中分离出不同CD表型的特征性瘤细胞;在软琼脂培养基上,CD133+、CD44+和CD44+CD133+细胞克隆形成率分别高于CD133-、CD44-和CD44+CD133-细胞;CD133+、CD44+、CD44+CD133+和CD44+CD133+CD24+细胞在小鼠体内的致瘤性分别强于CD133-、CD44-、CD44+CD133-和CD44+CD133+CD24-细胞。结论:CD44+CD133+CD24+表型的BL6F10细胞的某些生物学特性与CSC样细胞相似,具有CSC特征,这些实验结果为进一步鉴定BL6F10细胞系中的CSC提供了重要的实验资料。

CD133^+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的实验研究

目的研究CD133+卵巢癌干细胞样细胞(ovarian cancer stem-like cells,OCSLCs)向血管内皮细胞的分化。方法通过无血清培养方法诱导卵巢癌A2780细胞株来源的CD133+OCSLCs;体外观察其在Matrigel基质胶上向血管内皮细胞分化的生物学行为,RT-PCR和Western blot检测其成管后CD31的表达;通过裸鼠皮下移植瘤实验,免疫荧光法观察CD133+OCSLCs在卵巢癌血管新生中的作用。结果成功诱导出CD133+OCSLCs;体外成管实验结果显示CD133+OCSLCs在Matrigel基质胶上具有成管能力,6 h管腔样结构形成最为明显;免疫荧光、RT-PCR和Western blot证实,OCSLCs成管后表达CD31内皮细胞标记物(P<0.01);CD133+OCSLCs接种裸鼠皮下成瘤后,通过免疫荧光可观察到人源性肿瘤微血管的形成。结论 CD133+OCSLCs具有向血管内皮细胞分化的潜能。

IGF信号轴在卵巢癌干细胞样细胞增殖状态转换及预防卵巢癌复发中的作用

目的:探究胰岛素样生长因子(IGF)信号轴在促进卵巢癌干细胞样细胞增殖和抗凋亡中的作用,探讨基于IGF信号轴的IGF-1R抑制剂的靶向治疗和寻求降低卵巢癌化疗后复发的可能途径。方法:采用CD117+CD44+A2780卵巢癌细胞株,使用免疫细胞化学的方法检测IGF信号轴中IGF-1、IGF-2和IGF-1R在CD117+CD44+A2780细胞中的表达;利用MTT法检测IGF-1对CD117+CD44+A2780细胞的促增殖活性,配制IGF-1的质量浓度分别为10、25、40、55 ng·ml-1,另设空白对照,从中筛选出加入外源IGF-1的适宜质量浓度用于后续实验中;再将实验分为3组,即IGF-1刺激组、NVP抑制组和空白组。通过流式细胞术检测3组细胞在药物处理48 h后的细胞周期分布和凋亡率情况。结果:IGF信号轴组件IGF-1、IGF-2和IGF-1R均表达在CD117+CD44+A2780细胞的细胞膜上和细胞质中;MTT检测发现当外源IGF-1质量浓度为40 ng·ml-1时对CD117+CD44+A2780细胞的促分裂增殖作用最明显;IGF-1刺激组较空白组增殖明显活跃,凋亡率降低(P<0.05);NVP抑制组较空白组增殖明显减少,凋亡率增高(P<0.05)。结论:IGF信号轴与卵巢癌化疗后的复发密切相关,IGF-1在卵巢癌干细胞样细胞转换增殖状态和对抗凋亡中发挥着重要作用;NVP阻断IGF-1R的作用可有效抑制卵巢癌干细胞样细胞从休眠状态启动分裂增殖;IGF信号轴组件可作为卵巢癌治疗及化疗后预防复发的靶点。

Linc-ROR RNA在卵巢癌干细胞样细胞干性调控及功能维持中的作用

目的:探讨基因间长链非编码RNA-重编码调控因子(Linc-ROR RNA)在卵巢癌干细胞样细胞(OCS-LC)干性调控及功能维持中的作用及其调控机制。方法:采用无血清悬浮培养条件诱导A2780细胞生成OCS-LC,通过成球实验、分化实验以及流式分析技术分析CD133^(+)细胞率,鉴定细胞干性特征。生物信息学分析,确定Linc-ROR RNA与miR-181c-5p RNA的靶向关系,双荧光素酶报告基因检测进一步验证。慢病毒转染并筛选出稳定低表达Linc-ROR RNA的细胞株,分别诱导si-ROR A2780细胞和control-ROR A2780细胞生成si-OCS-LC和control-OCS-LC,通过成球率、最大球直径和成球周期评估两组OCS-LC的成球能力。免疫荧光染色法检测两组OCS-LC中干细胞标志物CD133表达变化。RT-qPCR法检测Linc-ROR、miR-181c-5p以及核心转录因子Oct-4和Nanog mRNA表达水平,Western blot法检测Oct-4和Nanog蛋白表达水平。CCK-8法、Transwell小室法检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果:成功诱导OCS-LC,CD133^(+)细胞比例和Linc-ROR mRNA表达水平显著升高。双荧光素酶报告基因检测证实Linc-ROR靶向miR-181c-5p;敲降Linc-ROR后,si-OCS-LC组miR-181c-5p表达显著升高,Oct-4、Nanog表达显著降低,CD133^(+)细胞率、成球、增殖、迁移侵袭能力显著降低。结论:Linc-ROR可能通过调控miR-181c-5p的异常表达,促进核心转录因子Oct-4和Nanog表达,参与OCS-LC干性获得及功能维持,可能在卵巢癌转移中发挥重要作用。

DFOG对卵巢癌OVCAR3源性球细胞迁移和Twist1/FoxM1表达的影响

目的 :检查金雀异黄素(genistein,GEN)及其新型合成类似物7-二氟甲氧基-5,4’-二-正辛烷氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxyl-5,4'-di-n-octyl genistein,DFOG)对人卵巢癌OVCAR3源性球细胞迁移和Twist1/Fox M1蛋白表达的作用。方法 :Transwell小室细胞迁移试验检测细胞迁移率。蛋白质印迹分析细胞Twist1和Fox M1蛋白表达水平。结果 :与OVCAR3细胞相比,OVCAR3源性球细胞迁移率更高。GEN(40μM)或DFOG(5μM和10μM)抑制OVCAR3源性球细胞迁移。此外,GEN(40μM)或DFOG(5μM和10μM)平行地下调Twist1和Fox M1蛋白表达。结论 :GEN及其类似物DFOG抑制OVCAR3源性球细胞体外迁移与其抑制Twist1和Fox M1蛋白表达相关。