鼻咽癌相关基因NGX6对鼻咽癌细胞周期的影响

为了探讨鼻咽癌(NPC)候选抑瘤基因NGX6对NPC细胞的细胞周期进程及细胞周期素的影响,阐明它的作用机制,通过建立稳定表达NGX6的鼻咽癌HNE1细胞株,采用细胞免疫组织化学,流式细胞仪检测与分析细胞周期及细胞周期素的改变,用westernblot验证它对细胞周期的影响.结果显示稳定表达NGX6的HNE1细胞较对照组细胞周期中G0 G1期比例明显增加,而S期比例减少.细胞凋亡率无明显变化.流式细胞仪检测发现cyclinD1、A和E的表达明显减少,以cyclinD1的改变最为明显.Westernblot检测也发现cyclinD1的表达明显下调.以上结果说明NGX6主要通过下调cyclinD1的表达,延缓细胞周期的G1→S的进程,从而抑制NPC细胞的过度增殖.

PEI-Fe_3O_4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响

目的探讨PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响,为进一步研究E1A基因对宫颈癌放、化疗增敏提供实验依据。方法取对数生长的人宫颈癌细胞(Hela)、对照空载体细胞(Hela-vect)、转染E1A基因的人宫颈癌细胞(Hela-E1A),使用流式细胞仪(Coulter-profiloⅡ型)测定DNA含量,计算机分析细胞周期。结果Hela-E1A组与Hela及Hela-vect组比较,S期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显增多,G1期无明显变化。结论PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因能改变人宫颈癌细胞周期的分布,使该细胞周期出现S期抑制和G2/M期阻滞,为进一步研究E1A基因对宫颈癌放、化疗增敏提供了实验依据。

胆囊收缩素受体在胰腺癌细胞中的表达及胆囊收缩素对胰腺癌细胞周期的影响

目的:观察胆囊收缩素受体(CCKR)在人胰腺癌细胞株SW1990中的表达及胆囊收缩素(CCK)-8肽对胰腺癌细胞周期的影响. 方法:应用RT-PCR方法检测人胰腺癌细胞株SW1990中胆囊收缩素受体(CCKR)mRNA的表达,细胞化学法检测SW1990 细胞中胆囊收缩素受体(CCKR)蛋白水平的表达,流式细胞仪检测不同浓度的CCK-8肽对SW199细胞周期的影响. 结果:在人胰腺癌细胞株SW1990中不表达CCK-A亚型受体,但表达CCK-B亚型受体;CCKR在癌细胞株SW1990 中的表达主要位于细胞膜上,细胞浆内也可见.在10-8g/L- 10-5g/L浓度范围内,CCK-8肽促进SW1990细胞的增殖, 呈剂量依赖性,细胞周期分析发现S期细胞增加,G2/M 期细胞减少. 结论:CCKB受体在人胰腺癌细胞株SW1990中表达, CCK-8肽能促进SW1990细胞的增殖,抑制细胞的凋亡, CCK通过CCKR在胰腺癌细胞的增殖中发挥重要作用.

胃泌素、生长抑素对大肠癌细胞周期的调控作用

检测79例大肠癌组织中胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)、Cyclin D1、CyclinE、Cyclin A、Cyclin B1、CDK2、CDK4表达情况,探讨大肠癌组织GAS、SS的表达与Cyclins、CDKs表达的相关性,了解胃肠激素对大肠癌细胞增殖的具体调控位点.

let-7a对人胃癌细胞周期的影响

微小RNA是一种内源性的、非编码RNA分子，属转录后基因表达调控因子，参与多种生理过程，已成为继小干扰RNA（siRNA）之后新的研究热点之一。lethal-7（let-7）是1993年后被发现的第2个微小RNA。我们利用重组慢病毒将let-7a转导入胃癌SGC-7901细胞，观察其对SGC-7901细胞周期的影响。

尿多酸肽对乳腺癌细胞周期及Cyclin D1表达的影响

目的探讨肿瘤细胞分化诱导剂尿多酸肽(CDAⅡ)对乳腺癌细胞周期分布和CyclinD1表达的的影响。方法将CDAⅡ与不同生物学特性的乳腺癌细胞株MCF7和MDAMB231进行体外培养,分成3组:对照组、CDAⅡ组和维甲酸(ATRA)组,观察CDAⅡ对乳腺癌细胞生长曲线、细胞周期、CyclinD1表达及形态学等方面的影响。结果CDAⅡ可减缓2株乳腺癌细胞的生长和增殖能力,改变细胞周期分布,使MCF7细胞株对照组、CDAⅡ组和ATRA组S期比例分别为33.04%、21.70%和23.64%;MDAMB231细胞分别为38.7%、28.7%和27.9%;MCF7细胞株对照组、CDAⅡ组和ATRA组细胞CyclinD1表达(荧光强度)分别为12.26、6.46和6.74,MDAMB231细胞分别为12.43、8.32和8.97。结论CDAⅡ可抑制不同生物学特性的2株乳腺癌细胞的生长和增殖能力,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,并减少乳腺癌细胞CyclinD1表达。

胃癌细胞周期G1/S转换期基因表达谱的分析

目的检测胃癌细胞在DNA合成前期/DNA合成期(G1/S)交界点基因表达谱的变化,探讨胃癌细胞由G1期进入S期相关基因的调控作用。方法应用胸腺嘧啶核苷(thymidine)-偌考达唑(nocodazole)及双胸腺嘧啶核苷(doublethymidine)法分别阻断胃癌细胞株(MKN45)于DNA合成后期/有丝分裂期(G2/M)及G1/S交接点释放后收集标本,应用cDNA微阵列基因芯片检测细胞周期中G1早期、G1末期、S早期及S晚期的基因表达谱,专业软件进行聚类分析。结果检测到4个时间点均可信的2001个基因,其中959个基因出现上调或下调。147个基因在G1末期出现上调,其功能涉及DNA代谢、转录与翻译、翻译后修饰、泛素化、信号转导等,这些过程在不同环节上影响细胞周期。结论多基因参与胃癌细胞周期G1期至S期的转换,且为其转换所必需,部分参与以上过程的基因与胃癌过度增殖有关。

Her-2/neu小分子干扰RNA对肺腺癌细胞周期和凋亡机制的影响

目的研究人类表皮生长因子受体2(Her2/neu)小分子干扰RNA(siRNA)对Her2/neu过表达的肺腺癌细胞的细胞周期和凋亡机制的影响。方法用化学合成的靶向Her2/neusiRNA转染肺腺癌calu3细胞,转染前后通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)测定细胞中Her2/neu、细胞周期蛋白(Cyclin)D1mRNA水平;流式细胞术检测Her2/neu蛋白水平和细胞周期的变化;AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测肺癌细胞的凋亡情况;荧光分光光度法测定Caspase3活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果Her2/neusiRNA能在mRNA和蛋白水平下调肺癌细胞株calu3中Her2/neu基因的表达。calu3细胞转染Her2/neusiRNA48h后处于G0/G1期的细胞增多,同时S期的细胞比例减少,与未转染对照组、空载体组和非特异性siRNA组比较差异有统计学意义(F=6.1,P<0.01)。转染Her2/neusiRNA后CyclinD1mRNA水平下降,同时培养上清液中的VEGF含量为176pg/ml±6pg/ml(F=24.7,P<0.01),Caspase3活性为135%±4%(F=8.9,P<0.01),细胞凋亡率为25.1%±1.2%(F=10.3,P<0.01)。结论化学合成的靶向Her2/neusiRNA能够下调Her2/neu基因表达,继而降低CyclinD1和VEGF水平,激活Caspase3途径,从而阻滞细胞周期于G0/G1期和诱导凋亡。

WWOX基因转染后对卵巢上皮性癌细胞周期的调控

WWOX基因是2000年由Bednarek等^[1]应用鸟枪基因测序技术（shot gun sequencing）分离并鉴定出的新的抑癌基因。国内外学者对WWOX基因在卵巢上皮性癌（卵巢癌）发生、发展中的作用进行了一些初步研究^[2-3]，但其具体作用机制尚不明确。

RNA干扰缺氧诱导因子2对肾癌细胞周期和凋亡的影响

研究表明肾细胞癌主要表达缺氧诱导因子2（HIF-2），其主要参与血管生成、糖酵解等调节，在肿瘤生长过程中具有较重要作用。我们通过构建HIF-2RNA干扰真核表达载体转染入肾癌细胞中，观察HIF-2 RNA干扰对肾癌的HIF-2表达的影响，观察其对肾癌细胞周期和细胞凋亡的影响。

绿茶儿茶素表没食子儿茶素没食子酸酯使胃癌细胞周期S期阻滞抑制DNA甲基转移酶表达

遗传学研究结果表明,抑癌基因启动子区域CpG岛的异常甲基化与胃癌的形成密切相关.我们使用绿茶儿茶素表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）干预胃癌细胞,探讨EGCG对AGS细胞周期和DNA甲基转移酶（DNMTs）表达影响.

HIF-1α基因沉默对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察沉默HIF-1α基因对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和细胞周期的影响。方法:构建针对乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体LV-RNAi-HIF-1α并转染人胰腺癌Patu8988细胞,MTT法观察HIF-1α基因沉默后胰腺癌Patu8988细胞体外增殖情况,以空白组及转染阴性对照干扰载体的阴性组为对照;流式细胞仪检测Patu8988/LV-RNAi-HIF-1α的细胞周期,以空白组为对照。结果:与空白组及阴性组细胞相比,Patu8988/LV-RNAi-HIF-1α的细胞增殖速度减慢,差异有统计学意义(F=58.48,P=0.000;F=55.91,P=0.000);Patu8988/LV-RNAi-HIF-1 G0/G1细胞比例较空白组高(t=10.87,P=0.001),S期、G2/M期细胞比例较空白组低(t=6.44,P=0.005,t=5.49,P=0.005),表现出G0/G1期阻滞。结论:HIF-1α基因表达沉默抑制人胰腺癌Patu8988细胞的DNA合成,将细胞阻滞于G0/G1期,使Patu8988细胞增殖能力降低,胰腺癌细胞体外生长被显著抑制。