信号转导子与转录活化子6(STAT6)在人结肠癌细胞株HT29(STAT6^(high))、Caco2(STAT6^(null))细胞凋亡中的作用

目的通过分析信号转导子与转录活化子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)活化状态时不同的人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)凋亡情况来研究STAT6与细胞凋亡之间的关系,并从分子水平探讨其可能的机制。方法采用流式细胞仪检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)细胞凋亡的情况,比较其差异;同时采用RT-PCR检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)中凋亡相关基因(Caspase家族蛋白Caspase3 mRNA、Caspase7 mRNA和Bcl-2家族蛋白凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mRNA、促凋亡蛋白Hrk mRNA)的表达水平,比较其差异。结果人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)细胞早期凋亡率为(13.30±0.73)%,明显高于HT29(STAT6high)的(2.00±0.43)%(P<0.01)。RT-PCR显示,人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中Caspase3 mRNA和Caspase7 mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mR-NA、促凋亡蛋白Hrk mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)、HT29(STAT6high)中STAT6活性水平与Caspase7、Caspase3、Bcl-2、Bcl-xl、Hrk mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.514、-0.562、-0.518、-0.512、-0.426,均P<0.05)。结论 STAT6可能参与结肠癌细胞凋亡,其机制可能与凋亡相关基因的表达有关。

IL-6在人胃癌细胞株AGS中生物学效应及其信号传导途径

目的探讨白细胞介素6(I-L6)在人胃腺癌细胞株AGS中产生生物学效应的信号传导途径。方法通过MTT法检测IL-6刺激AGS细胞后对其生长增殖的影响;采用电泳迁移变动试验(EMSA)和Westernblot观察IL-6刺激前后AGS细胞中IL6相关转录因子Stat3和参与IL-6信号传导功能的蛋白激酶Jak1的诱导活化状态,并确定该细胞中的IL6信号传导通路;通过免疫细胞化学染色确定磷酸化Stat3在AGS细胞内的定位。结果IL-6可显著促进AGS细胞的增殖;转录因子Stat3和蛋白激酶Jak1都能在AGS细胞中被IL-6诱导激活,且Stat3的活性与IL6的刺激呈一定的剂量和时间依赖性;磷酸化Stat3的染色定位于AGS细胞核。结论JAK/STAT信号传导途径的活化介导了IL-6对AGS细胞增殖的促进功能。

反应停对肺腺癌细胞株诱导的血管内皮细胞增殖的影响

目的探讨反应停对肺腺癌细胞株诱导的血管内皮细胞增殖的影响。方法用噻唑兰法检测不同浓度反应停对血管内皮细胞株ECV304(ECV304细胞)、肺腺癌细胞株SPC-A1(SPC-A1细胞)及其诱导的血管内皮细胞ECV304增殖的影响。结果反应停浓度为8.0和80.0μg/ml时对ECV304细胞增殖有抑制作用(P<0.05);不同浓度反应停对SPC-A1细胞增殖无影响;经8.0和80.0μg/ml反应停作用后SPC-A1细胞条件培养液对ECV304细胞增殖有抑制作用(P均<0.05),其细胞生长抑制率分别为5.19%、12.49%。结论反应停对SPC-A1细胞诱导的ECV304细胞增殖有抑制作用。

Smac基因过表达对胃癌细胞株MKN-45化疗敏感性的影响

背景与目的:细胞凋亡异常是肿瘤细胞产生耐药性的关键因素之一。Smac(secondmitochondria-derivedactivatorofcaspases,Smac或称DIABLO)是新近发现的一种凋亡调节基因,在介导化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡中起重要作用。本研究旨在观察Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响。方法:采用脂质体GeneSHUTTLE-40介导的方法,将Smac基因转入胃癌细胞MKN-45,RT-PCR和Westernblot法检测癌细胞中Smac的表达;选用顺铂(1、5、10μg/ml)、丝裂霉素(0.1、1、10μg/ml)和姜黄素(10、20、40μmol/L)分别处理转染前后的胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄影,AnnexinV-FITC和碘化丙啶双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:同未转染对照组比较,转染外源性Smac基因后MKN-45细胞SmacmRNA和蛋白表达水平显著增高(P<0.01);各浓度顺铂、丝裂霉素和姜黄素处理24h后,细胞生长抑制率分别增加10.10%～23.80%(P<0.01)、10.01%～15.86%(P<0.01)、11.28%～22.12%(P<0.01),细胞明显变圆、折光增强、漂浮细胞增多,细胞凋亡率分别增加6.7%～20.2%(P<0.01)、5.4%～13.2%(P<0.01)、10.6%～20.1%(P<0.01)。结论:转染外源性Smac基因并使其在胃癌细胞中过表达。

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株增殖活性的影响

目的本研究拟通过体外实验观察口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对舌癌细胞增殖能力的影响。方法建立口腔CAFs与舌癌细胞株Tca8113的交互作用模型,对Tca8113进行形态学观察,并通过MTT法及流式细胞术,观测口腔CAFs对Tca8113增殖活性及细胞周期的影响。结果CAFs和Tca8113直接混合培养组的Tca8113细胞形态及生长方式发生变化;与正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)相比,CAFs增强了Tca8113的增殖活性(P<0.05),并提高了处于S期和G2期的癌细胞的比例(48.1%vs40.0%)。结论口腔CAFs可在体外促进舌癌细胞株Tca8113的增殖,提示其在口腔鳞癌发展中起重要作用。

人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞株SW480增殖的影响及其作用机制

目的观察人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞株SW480增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法取对数生长期SW480细胞,分别加入含160、80、40、0μmol/L人参皂苷Rg3的储备液(分别计为A、B、C、D组)培养24 h,采用MTT法检测人参皂苷Rg3对SW480细胞增殖活性(OD值)的影响,倒置显微镜观察人参皂苷Rg3诱导SW480细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测SW480细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、闭锁蛋白(Occludin)mRNA,Western blotting法检测ICAM-1、Occludin蛋白。结果与D组比较,A、B、C组细胞OD值下降,凋亡率增加,ICAM-1 mRNA、蛋白表达降低,Occludin mRNA、蛋白表达升高(P均<0.05)。结论人参皂苷Rg3可抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,机制可能与ICAM-1表达下调、Occludin表达上调有关。

双歧杆菌脂磷壁酸对不同大肠癌细胞株转移能力及VEGF表达的影响

目的研究双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)对血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及其对大肠癌细胞株侵袭、转移能力的影响。方法采用噻唑蓝比色(MTT)法检测经双歧杆菌LTA处理前后大肠癌细胞株LoVo和HT-29对人工基底膜(Matrigel)的黏附能力变化;Transwell小室体外侵袭迁移实验检测经LTA处理前后两株细胞侵袭、迁移能力的改变。RT-PCR和Western blot检测经LTA作用前后,VEGF在两株细胞中的表达差异。结果经20、50、80μg/ml双歧杆菌LTA处理后,LoVo细胞和HT-29细胞在30、60、90、120min时的黏附率明显低于对照组(P<0.01);经50μg/ml双歧杆菌LTA处理24h后,LoVo细胞和HT-29细胞的侵袭能力及VEGF的mRNA和蛋白质的表达,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论双歧杆菌LTA能抑制大肠癌细胞黏附、侵袭、迁移的能力,下调其VEGF的mRNA和蛋白质的表达。

川芎嗪逆转肺癌细胞株多药耐药性的研究

目的 探讨中药川芎嗪(TMP)逆转肺腺癌SPCA-1细胞株耐药性的作用。方法 人肺腺癌SPCA-1细胞株,以阿霉素诱导耐药至终浓度为0.4μg/ml,MTT比色法测定TMP对耐药细胞的耐药性逆转作用。结果 100mg/L和320mg/L TMP对细胞的抑制率均小于5％,两者无显著差异。100mg/L TMP加丝裂霉素(MMC)组与相应浓度MMC组比较,细胞抑制率有显著性差异(P<0.05)。加入320mg/L TMP的阿霉素(ADM)、长春地辛(VDS)、MMC组与相应浓度各药物组比较,其细胞抑制率均有显著性差异(P<0.05),其中1PPC VDS+TMP、1PPC MMC+TMP组与相应药物组比较,差异非常显著(P<0.01)。顺铂(C-DDP)加TMP组与相应浓度C-DDP组比较,细胞抑制率均无显著性差异(P>0.05)。结论 无明显细胞毒浓度的TMP可显著逆转SPCA-1人肺腺癌细胞株对ADM、VDS、MMC的耐药性,但对CDDP介导的耐药无影响。

大蒜素对卵巢癌细胞株HO8910生长的抑制作用

目的 :观察大蒜素对卵巢癌细胞株HO8910的抑制作用。方法 :用不同时间不同剂量大蒜素作用于HO8910 ,通过肿瘤细胞药敏试验 ,观察肿瘤细胞存活率 ,并通过透射电镜观察一定剂量的大蒜素作用于HO8910一定时间后 ,肿瘤细胞形态的改变。结果 :5 0～ 10 0 μg/ml大蒜素可显著抑制肿瘤细胞的生长 ,且在作用 2h时即出现显著的抑制 ,随着作用时间的延长 ,抑制作用愈明显 ,72h达到高峰。透射电镜结果显示 :5 0 μg/ml的大蒜素作用HO8910 2 4h ,细胞肿胀 ,细胞膜破碎 ,胞浆脱落 ,细胞核裸露 ;小剂量 (2 5 μg/ml)则HO8910呈现细胞凋亡样改变 :细胞胞浆呈空泡 ,染色质边集 ,核仁固缩 ,胞质呈片状脱落。结论 :大蒜素可显著抑制HO8910的生长 ,且有明显的时间及剂量效应。大剂量的大蒜素对HO8910细胞呈直接杀伤作用 。

仓鼠胰腺癌细胞株移植性肝癌模型的建立及其生物学特性

目的:建立仓鼠胰腺癌细胞株(pGHAM-1)移植性肝癌模型,并研究其生物学特性.方法:将pGHAM-1培养后配成4×1010/L,取0.5mL接种于仓鼠皮下,成瘤后,接种于仓鼠肝脏.分别于第20、30、40天用B超仪检测肝脏肿瘤大小.于接种后第40天处死动物,观察肿瘤的生长、转移及腹水量.解剖取出肝脏,用游标卡尺测量肿瘤大小,切开肝脏直接观察肿瘤,再进行HE染色的组织病理学检查,免疫组织化学检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)及肿瘤转移相关蛋白(nm23-H1)的表达.结果:pGHAM-1种植性肝癌模型成功率达100%.B超仪检测仓鼠肝脏,第20、30、40天肿瘤体积分别为84.1±21.9mm3,413.7±208.4mm3,2187.3±1882.8mm3,与10d前者相比,有非常显著性差异(P<0.01);接种后第40天处死动物,解剖观察肿瘤,直接测量肿瘤体积为2948.0±2188mm3,其大小与第40天B超仪测量结果无显著性差异(P>0.05).部分仓鼠可见血性腹水;肝内未见肿瘤卫星结节;HE染色组织病理学检查为低分化胰腺癌;免疫组织化学检测结果显示VEGF及nm23-H1蛋白低表达.结论:pGHAM-1种植性肝癌模型建立方法简便,易复制,是理想的肝癌研究模型.

人体肝癌细胞株(7402)的细胞同步化和中期染色体分离方法

用人体肝癌细胞株(7402)和中国地鼠肺细胞系(CH-CL)的细胞建立了同步化方法:7402细胞在指数生长时,加入秋水仙胺处理后,用机械摇晃法收集中期细胞。或者在传代培养的7402细胞中加入TdR的DNA合成抑制剂,培养24小时后更换新的培养液解除细胞的抑制。同上加入秋水仙胺使细胞停止在分裂中期。这两种方法均可获得85~96%的中期细胞。此外,按上述方法加入秋水仙胺处理细胞并结合机械摇晃法,同样可收获70~90%的同步的中期细胞。染色体分离方法:按上述同步化收集的中期细胞,用Hanks液洗涤,TM低渗液处理,离心;去上清液,加入TMS缓冲液与细胞沉淀混匀,转入注射器或研磨器内,吸打或研磨细胞,使细胞膜破裂释放出染色体,再离心,收集上清液,在沉淀中再加入TMS缓冲液,低速离心,再收集上清液。这样反复离心,收集的上清液汇集于大离心管内,再离心,去上清液,加入TMS液混匀,低速离心,收集上清液。如此反复,就可获得纯度高的中期染色体。最后比较了两种同步化方法的优劣,并讨论了分离中期染色体的各种因素。

5-氮-2′-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响

目的 研究甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响,初步探讨其应用于临床治疗的可能性。方法 应用MTT法检测不同浓度的5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响,应用流式细胞术检测5-氮-2’-脱氧胞苷对QBC939细胞生长周期及凋亡率的影响。结果 5-氮-2’-脱氧胞苷在浓度为0.5μmol/L时即可以抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,24 h半数致死量为5.0 μmol/L,细胞周期中处于G0/G1期的细胞比例增多,凋亡的发生率增高,而且以上作用与药物浓度及作用时间在一定范围内呈正相关。结论 5-氮-2’-脱氧胞苷可能通过消除某些抑癌基因的启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制胆管癌细胞的生长,并促进其凋亡。

丁酸对结肠癌细胞株凋亡的影响

目的 :观察膳食纤维在结肠中的酵解产物丁酸对人结肠癌细胞株细胞凋亡的影响 ,探讨其预防结肠癌的作用机制。 方法 :人传代结肠癌细胞株SW 1116经不同浓度 (2、3、4、7和 10mmol/L)丁酸处理后 ,在不同时段 (6、2 4、4 8和 72h)收集细胞 ,分别用四唑蓝法检测肿瘤细胞生长的增殖率 ,用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化 ,以及用电镜观察其形态学改变。 结果 :随着培养液中丁酸浓度的不断升高和培养时间的延长 ,SW 1116细胞的生长逐渐受到抑制 ,最高抑制率达 5 9.19%。同时G1期细胞明显增多 ,而S期细胞明显减少 ,而细胞凋亡率逐渐增高 ,最高达 30 .6 2 % ,电镜观察出现细胞凋亡的特征性改变。 结论 :丁酸既能抑制结肠癌细胞的生长增殖 ,又能诱导其细胞凋亡。

HDAC1在肺腺癌细胞株A549中的表达及TSA对细胞增殖、凋亡的影响

背景与目的:研究表明组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)在多种肿瘤细胞中高表达,组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)抑制剂制滴菌素A(trichostatinA,TSA)能抑制肿瘤细胞的生长。而缺氧是恶性肿瘤的重要特征,本实验拟研究HDAC1在低氧肺腺癌细胞株A549中的表达及TSA对细胞增殖、凋亡的影响。方法:实验设常氧组(对照组)及低氧组(实验组),实验组设A～F组,即低氧6h组(A组),低氧6h加TSA组(B组),低氧12h组(C组),低氧24h组(D组),低氧24h加TSA组(E组),低氧48h组(F组)。用蛋白印迹法(Westernblot)检测A549细胞在不同时间低氧条件下HDAC1的表达,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、免疫组化和流式细胞仪、原位凋亡(Tunel)法检测A549细胞在不同时间低氧条件下的增殖和凋亡率以及TSA对其的影响,用RT-PCR检测A549细胞在不同时间低氧条件下HDAC1mRNA的表达及TSA对其的作用。结果:对照组HDAC1蛋白质表达的A值为138±11,实验A、C、D、F组A值分别为78±4.0、86±5.0、124±3.0、120±9.0。对照组HDAC1mRNA的A值与β-actinmRNAA值的比值0.68±0.03,A、B、D、E组HDAC1mRNA的A值与β-actinmRNAA值的比值分别为0.46±0.03、0.45±0.02、0.70±0.03、0.33±0.02。对照组PCNA的A值0.13±0.03、A、B、D、E组PCNA的A值分别为0.10±0.02。

奥曲肽和NC-8-12对人结肠癌细胞株HCT116体内外生长的影响

目的 探讨生长抑素类似物 (SSTA)能否在体内、外抑制结肠癌细胞的增殖及其抑制作用的可能机理。方法 用RT PCR和原位杂交方法检测人结肠癌细胞株HCT116生长抑素Ⅱ型受体 (SSTR2 )mRNA的表达 ;用MTT法检测奥曲肽 (Oct)或SSTR2特异激动剂NC 8 12对胰岛素或表皮生长因子刺激下的HCT116细胞作用2 4h后的增殖情况 ,并用流式细胞仪检测其CyclinD1的表达 ;同时将HCT116细胞种植于裸鼠皮下 ,给予其奥曲肽或NC 8 12治疗 ,观察肿瘤生长情况。结果 ①HCT116细胞株和荷瘤裸鼠癌组织中均有SSTR2mRNA的表达 ;②胰岛素和表皮生长因子能促进HCT116细胞株生长 ,且这一促进作用能部分地被Oct和NC 8 12减弱 ;③胰岛素刺激下HCT116细胞的CyclinD1表达水平提高 ,Oct或NC 8 12作用后其表达水平下降 ,但差异无显著性意义 (P>0 .0 5 ) ;④Oct和NC 8 12组裸鼠皮下种植瘤重量和体积与对照组比较差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。结论 在体外 ,Oct及NC 8 12均能抑制HCT116细胞株增殖 ,SSTR2参与介导了SSTA抑制结肠癌细胞生长的作用 ;在本实验剂量下 ,Oct和NC 8 12均对接种于裸鼠的人结肠癌肿瘤生长无影响。

转基因人腺癌细胞株的建立及其生物学特性的研究

自Rosenberg等把Neo^R、TNF基因导入肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)对晚期黑色素瘤患者进行治疗以来,肿瘤基因治疗开始问世并多集中于对细胞因子基因(IL-2,TNF,IFN-α,GM-CSF等)转导后抗肿瘤的研究.常用的方法是选择适当载体把细胞因子基因导入抗肿瘤的免疫效应细胞(TIL,LAK,CTL)或肿瘤细胞中,回输或接种机体,直接或间接杀伤肿瘤细胞,增强机体的免疫调节作用,从而达到治疗肿瘤的目的.

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。

腺病毒介导的野生型p53基因对肺腺癌细胞株生长的抑制作用

为研究野生型p53基因对肺腺癌细胞株GLC-82细胞生长的作用,确立腺病毒介导的野生型p53基因在肿瘤治疗中的意义,应用分子克隆技术首先构建了野生型p53复制缺陷型腺病毒重组体,应用生化染色方法确定了重组体的转染效率,以免疫组化法及PCR技术分别确定了腺病毒载体介导的p53基因转染GLC-82细胞后p53蛋白和p53 cDNA的表达情况;最后应用细胞生物学方法检测了p53对GLC-82细胞扩增及细胞周期的影响.结果表明所构建的重组体可以高效、快速转染GLC82细胞,抑制GLC-82细胞扩增,使细胞合成期和分裂后期的量减少。

人肾上腺皮质腺癌细胞株裸鼠移植瘤模型的建立及其意义

目的建立人肾上腺皮质腺癌移植瘤动物模型,为研究肾上腺皮质腺癌提供实验平台。方法选取4-6周龄裸鼠5只,将体外培养的人肾上腺皮质腺癌细胞株（SW-13）注射至其双侧腋窝皮下,建立人肾上腺皮质腺癌移植瘤模型。结果 6周后5只裸鼠双侧腋窝皮下均长出肿瘤,肿瘤胞膜完整,HE染色可见大量肿瘤细胞。结论成功建立人肾上腺皮质腺癌移植瘤动物模型,可以为肾上腺皮质腺癌的研究提供有效的动物模型平台。