癌胚抗原多聚核酸疫苗的研究进展

多聚核酸疫苗(Polynucleotide vaccine)．多被称为核酸疫苗(nucleic acid vaccine)，包括DNA疫苗和RNA疫苗二种，是九十年代兴起的一种以核酸为基础的新的免疫接种技术。由于该疫苗既能激发与重组活疫苗相似的免疫反应，又具有亚单位疫苗的安全性，且具有制各简单、接种方便等优点，自1994年在日内瓦召开首次国际性的关于核酸疫苗的会议以来，迅速成为一个研究的热点，部分核酸疫苗已获准进入一期临床试验。

癌胚抗原多聚核酸疫苗—肿瘤相关抗原疫苗研制的一条新思路

癌胚抗原多聚核酸疫苗—肿瘤相关抗原疫苗研制的一条新思路李云贵谢波综述王晓怀审校广州军区总医院放射肿瘤科（广州市５１００１０）多聚核酸疫苗（Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｖａｃｃｉｎｅ），多被称为核酸疫苗（ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｖａｃｃｉｎｅ），包括Ｄ...

含不同启动子的人癌胚抗原重组质粒的构建与表达

构建含不同启动子的人癌胚抗原重组表达质粒,观察肌肉注射该重组质粒后人癌胚抗原基因在小鼠舌肌中的表达情况。方法:将7天前肌肉注射0.75%布比卡因的小鼠分成4组,每组4只,分别将含不同启动子的重组质粒pCEA、pLCEASN及阴性对照质粒pcDNA3、pLXSN注射于小鼠的舌肌内,每周1次,每次100μg,共3次;注射前及每次注射后2天,取尾静脉血用放免法测其癌胚抗原的含量,最后1次注射2天后,处死小鼠并取其舌、脑、肝、脾、肾、心脏及股四头肌用免疫组化法(ABC法)检测癌胚抗原的表达。结果:构建并鉴定了两种新的癌胚抗原重组表达质粒;免疫组织化学法检测显示:癌胚抗原ABC染色仅在用人癌胚抗原重组表达质粒注射过的舌肌切片中阳性,而在脑、肝、脾、肾、心脏及股四头肌的切片中均阴性;放免法检测显示:所有血液样本中癌胚抗原的浓度均未达检测值(<5ng/ml)。结论:含不同启动子的癌胚抗原重组表达质粒可在注射部位有效地表达人癌胚抗原。

人癌胚抗原cDNA的克隆与真核表达质粒的构建

[目的]将人癌胚抗原(CEA)cDNA克隆到真核表达载体pIRES中,构建真核表达质粒pIRES鄄CEA,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达,并为下一步连接上热休克蛋白基因(HSP70)从而构建CEA鄄HSP融合核酸疫苗作准备。[方法]从CEA阳性的大肠癌组织中提取总RNA,经RT鄄PCR方法获取人癌胚抗原cDNA,用内切酶XbaⅠ和NotⅠ分别酶切质粒pIRES和CEAcDNA,通过T4连接酶将带有黏性末端的CEA鄄cDNA插入到pIRES质粒的XbaⅠ和NotⅠ酶切位点上。[结果]通过PCR扩增获得了CEA基因,并将CEA鄄cDNA正向克隆到载体pIRES中。[结论]已经成功构建了真核表达质粒pIRES鄄CEA,并为下一步连接上热休克蛋白基因(HSP70)从而构建CEA鄄HSP融合核酸疫苗作准备。

定量检测大肠癌及大肠良性疾病癌胚抗原信使核糖核酸的研究

目的探讨利用定量巢式逆转录聚合酶链反应(NestedRTPCR)检测大肠良恶性疾病组织及其外周血CEAmRNA(癌胚抗原信使核糖核酸)方法的效果及其临床意义。方法用竞争性NestedRTPCR方法定量检测25例手术切除的大肠肿瘤、肠系膜淋巴结及22例大肠良性病变和6例健康人外周血中CEAmRNA的量。结果25例大肠癌均呈阳性,表达量亦大,拷贝数为105～109。25例淋巴结中病理报告肿瘤转移者11例(44%)中NestedRTPCR方法检测CEAmRNA均呈阳性且量多,拷贝数为106～108,而14例(56%)病理报告肿瘤阴性NestedRTPCR检测有5例(35.7%)CEAmRNA阳性,Copy数为102～103。随访发现CEAmRNA阳性的5例患者均在20个月内复发,而CEAmRNA阴性者均未复发。22例大肠良性病变中2例(均为息肉伴不典型增生改变者)CEAmRNA呈阳性,表达量101,阳性率9%。6例正常健康人外周血CEAmRNA均呈阴性。结论定量NestedRTPCR检测大肠癌CEAmRNA的方法优于常规病理检查并可进行量化。对大肠癌的诊断及判断淋巴结转移有重要意义。

定量RT-PCR法检测CK20 mRNA、CEAmRNA在胃肠道肿瘤外周血中的表达

目的检测胃癌、大肠癌、健康人外周血CK20 mRNA、CEA mRNA的表达,探讨其临床意义。方法用定量RT-PCR法检测外周血白细胞中CK20mRNA、CEA mRNA的含量,肿瘤组30人,健康对照组23人。结果试验结果显示肿瘤组CEA mRNA、CK20 mRNA表达水平明显高于健康对照组(P=0.000、P=0.000)。分组比较中IV期CK20 mRNA明显高于I～III期,P为0.000,差异显著;IV期与I～III期CEA mRNA没有差别。肿瘤组其中之一阳性28人,阳性率93.75%;两指标同时阳性22人,阳性率73.33%。结论本试验胃癌、大肠癌外周血检测CEA mRNA敏感性和特异性高于CK20 mRNA,但CEA mRNA数值高低与分期无关,CK20 mRNA的表达量与肿瘤分期有关。两指标联合检测未提高阳性率。

新城疫病毒HN基因对肿瘤抗原诱导的抗肿瘤免疫的增强作用

目的 了解新城疫病毒HN基因增强肿瘤抗原诱发的抗肿瘤免疫反应的作用 ,并对其作用机制进行探讨。方法 将构建的HN基因 癌胚抗原 (CEA)cDNA共表达质粒 (pcD CEA HN)免疫小鼠 ,通过淋巴细胞增殖实验、NK细胞活性检测了解HN对抗CEA免疫反应的影响 ;并以免疫组化的手段追踪HN质粒表达产物在体内组织的分布 ,以及HN质粒对荷瘤小鼠肿瘤生长、抗肿瘤免疫反应的影响。结果 (1)共表达质粒pcD CEA HN免疫小鼠获得了较其他对照组强的淋巴细胞增殖指数及NK细胞活性。 (2 )HN质粒在肌肉、肿瘤组织有明显的表达。 (3)HN质粒对肿瘤生长具有一定的抑制作用 ,并能增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫。